CHAPITRE II

Bactériologie.

1.— Recherche du g$onocoque dans le pus, le liquide prostatique et le sperme. — Méthodes de coloration,

méthodes de culture.

Tous ceux qui ont cherché sous le microscope le gonocoque dans le pus des blennorrhagies chroniques savent à quelles difficultés l’on se heurte presque à chaque examen et combien il est malaisé de conclure à sa présence ou à son absence au milieu des microbes associés dont plusieurs se rapprochent morphologiquement beaucoup du gonocoque de Neisser. Il faut, avant tout, obtenir des préparations très lisibles, émployer un colorant assez énergique pour recolorer nettement le gonocoque après l’action de l’alcool-acétone dans la méthode de Gram, et il faut employer un colorant qui n’empâte pas les détails et donne des préparations très fines.

Nous avons cherché longtemps à ce sujet, nous avons essayé maints procédés et aucun ne nous a donné pleine satisfaction ; la recoloration à l’éosine est mauvaise, les préparations sont floues et les gonocoques souvent peu visibles; la fuschine diluée donne des préparations plus nettes, les gonocoques, et en général les germes qui se décolorent par la méthode de Gram ne sont pas parfaitement visibles ; la fuschine phéniquée, diluée sur la lame même, donne souvent de bonnes préparations, mais le résultat est inconstant et parfois la coloration est trop. intense et surcharge le violet phéniqué ; l’action d’une fuschine surajoutée à du bleu de méthylène, sans décoloration, et après

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unsimple lavage, ne nous a pas semblée être recommandable.

Après bien des recherches à l’aide des diverses formules proposées par les auteurs (voir Bibliogr. n°° 1,2, 5, 6, 16, 26, 31), nous nous sommes arrêté à la méthode suivante que nous n'avons vu nulle part et qui nous est personnelle (1):

. Fixation à l’alcool-éther.

. Violet de gentiane phéniqué 1/2 minute.

. Liqueur de GraM sur le violet.

. Décoloration rapide à l'alcool 5, acétone 1.

. Recoloration au Neutralroth ou rouge neutre (2).

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Nous employons ce colorant sous deux formes :

1° En solution à 1 pour 99 centi-cubes d'eau phéniquée à 2°/,, pour obtenir une coloration rapide en 10 à 15 secondes.

2° Un centi-cube de cette solution phéniquée au 1/100 diluée

dans 50 centi-cubes d'eau ordinaire, donneun produit excellent

pour une coloration lente ; le mélange est versé dans un verre

à pied ou mieux dans un tube Borrel, on y plonge la lame, la

face enduite tournée vers la partie inférieure, et on l'y laisse pendant une 1/2 heure.

Cette méthode de recoloration donne des préparations très

. jolies et très nettes; le fond est ocre-rouge; les éléments cellu-

laires protoplasme et noyaux bien visibles, noyaux brun-

(1) Le rouge neutre a été employé par HIMMEL I. pour étudier l’activité des éléments cellulaires sur les microbes vivants. Ce colorant a peu d’action sur les germes vivants inclus dans les cellules ; au contraire, quand ils sont morts, il les colore en rouge brique (HIMMEL I. Le rouge neutre. Son rôle dans l'étude de la phagocytose en général et dans celle de la blennorrhagie en particulier. — Ann. Inst. Pasteur, Paris, 16, 1902 (663-6851).

() Nous avons employé le rouge neutre dès 1913 et nous avons utilisé la méthode décrite ci-dessus depuis 1916. — Nos observations étaient prises déjà depuis plusieurs mois et la rédaction de ce lravail très avancée quand nous avons eu connaissance du procédé de coloration de M. Lurz, publié en janvier 1919 dans le Bulletin des sciences pharmaco. logiques.

M. Lurz emploie le rouge neutre, mais avec addition d’acide acétique dans la solution jusqu'à virage au rouge-cuivre; il ne s’agit donc plus du colorant que nous préconisons : l’acide phénique ajouté comme mordant ne produisant pas de changement de teinte dans la solution aqueuse de rouge neutre.

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rouge et protoplasma brun clair ; enfin les germes décolorés par la méthode de Grau sont brun-rouge, tranchant bien sur le protoplasma plus clair et se différenciant nettement du violet-noir des germes restant colorés par la méthode de Gram. Le gonocoque apparaît bien coloré, sans empâtements, avec tous les détails de sa structure en diplocoque réniforme.

La egloration lente avec un colorant dilué permet d’obtenir des préparations encore plus fines et plus lisibles; les noyaux cellulaires et les germes prennent la coloration d'une manière aussi intense qu'avec un colorant concentré ; mais, par contre, le protoplasma se teinte plus légèrement; il y a donc encore plus de contraste entre la teinte des gonocoques et celle du fond quand ces germes sont intracellulaires.

L'importance d'une bonne coloration dans ce genre de recherches s'impose avec d'autant plus de rigueur que la culture est pratiquement impossible quand l'examen porte sur des pus de blennorrhagies chroniques où les gonocoques n'existent qu’en petit nombre.

Les ouvrages de bactériologie déclarent très doctement que l’on doit, en cas d'hésitation après un examen de frottis. recourir à la culture, à la recherche des fermentations sucrées, au séro-diagnostic, et même à la recherche de la fixation du complément! Pourquoi ne pas avouer que nous ne connaissons pas de milieu propre à cultiver le gonocoque, sauf quand celui-ci abonde, et qu'il est inutile alors de faire une culture pour le découvrir ? Quelques expérimentateurs habiles ou heureux ayant obtenu, une fois par hasard, une culture en partant d'un pus de blennorrhagie chronique, il ne faut pas en conclure que la culture du gonocoque est pratiquement réalisable.

Nous avons essayé tous les milieux préconisés par les auteurs (1), depuis les milieux humanisés à l’ascite, au sang, au sérum, jusqu’à l'urine humaine albumineuse enrichie de peptone, depuis les milieux au sérum de veau ou de lapin, jusqu'aux milieux glycérinés, jusqu'aux milieux à l’albumine d'œuf, alcalins ou acides, solides ou liquides ; tous ne nous ont donné que des déboires et cependant dans nombre de cas nous avons

(1) Bibliog® ; n°3, 15, 19,,23,132,.33,

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opéré dans les meilleures conditions en ensemençant le pus immédiatement au sortir de l’uréthre et en mettant à l’étuve sans délai. Les quelques résultats positifs que nous avons eu, ont été obtenus en partant de pus de blennorrhagies relativement récentes, datant de 20 ou 30 jours au plus, et nos cultures étaient grêles et le plus souvent non repiquables.

Nous avons cherché à composer nous-même des milieux favorables à la culture du gonocoque ; l’un d'eux nous a donné des résultats, mais inconstants; nous en donnons la formule cidessous :

Urine humaine non albumineuse......... 100 gr. BEDIODER ER MERE RE EE rene recu QRore GÉLOSCMR RE RE EL RE rt en es 0 à 3 gr.

GINCÉLINEN TRES Ne ie le 5 gr

On stérilise à 105° pendant 1/4 d'heure.

Le liquide est réparti dans des tubes à hémolyse, deux centicubes dans chaque ; on y ajoute Occ.5 de sérum humain stérile, on mélange, on incline et on laisse solidifier. Le milieu doit être légèrement alcalin. Ensemencer largement et le plus rapidement possible au sortir de l’urèthre ; mettre à l'étuve à1372.

Une notion assez nouvelle permettra peut-être de composer des milieux favorables et vraiment d'utilité pratique pour la culture du gonocoque : c’est celle du pouvoir antitrypsique du sérum. On sait que ce pouvoir antitrypsique empêche le libre développement des microorganismes dans le sang et dans les humeurs, il entrave le travail digestif des microbes qui aboutirait sans lui à la conversion des albumines naturelles du sang et des leucocytes en aliments appropriés à ces germes. On a pu rendre fertiles des hémocultures infertiles en neutralisant le pouvoir antitryptique du sérum par addition de trypsine ; le ferment était ajouté soit directement en nature, soit indirectement par du pus stagnant dont les leucocytes subissaient une désagrégation rapide. Ainsi — mais ce n’est qu'une hypothèse — il est possible que les milieux humanisés pour la culture du gonocoque deviennent beaucoup meilleurs si nous en mesurions le pouvoir antitrypsique afin de le neutraliser; des expériences

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dans ce sens donneraient peut-être des résultats intéressants el seraient à tenter

2.— Recherche des germes associés, saprophytes et pyogènes dans le pus, le liquide prostatique, le sperme. — Méthodes de prélèvement, de coloration, de culture. — Milieux employés pour identifier les $Sermes. — Inocu-

lations.

Chaque fois que nous avons été en présence d'un malade atteint de blennorrhagie, nous nous sommes efforcé de rechercher non seulement le gonocoque, mais de séparer et d’identifier les germes associés.

Ces germes vivent le plus souvent en saprophytes à la faveur de l'irritation causée par la suppuration gonococcique ; parfois cependant les plus minutieuses recherches ne permettent pas de décéler le gonocoque et pourtant une suppuration continue à la faveur de ces germes apparus secondairement.

La suppuration peut être assez abondante pour tacher le linge dans la journée, ou réduite à une simple goutte semipurulente collant le méat pendant la nuit, ou même elle peut se manifester seulement par quelques filaments expulsés sous l’action du passage de l’urine pendant la miction et formés de cellules épithéliaies desquamées et de leucocytes polynu-

cléaires.

La flore microbienne au cours des blennorrhagies a été étudiée par nombre d'auteurs ; la littérature allemande, sur ce sujet, est surtout à consulter, en France, peu d'auteurs ont publié des travaux, quelques-uns pourtant sont très intéressants. Les bactériologistes ont étudié tantôt la flore de l'urèthre normal, tantôt celle de l’urèthre au cours de la blennorrhagie; bien des germes, on peut mème dire tous les germes qui peuvent être associés au gonocoque se retrouvent dans l'urèthre normal.

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Lusréarrex et MannagerG (Bibliog. n° 20) ont trouvé les microbes suivants :

Staphylocoque doré.

Micrococcus subflavus de Bumm.

Bacillus nodosus parvus.

5 espèces de cocci en amas.

Streptococcus giganteus urethræ.

Streptocoque n° 2.

Horuegisrer (Bibliog. n° 14) décrit :

4 Diplocoques grands, liquéfiant la gélatine. 3 — petits, non liquéfiant.

Perir et WassermANx (Bibl. no 24) ont trouvé :

4 Microcoques ou Diplocoques.

6 Bacilles.

Ils les différencient d'après la manière dont ils se colorent par la méthode de Gram et d’après leur action sur l'urine et sur la gélatine.

Franz (Bibl. n° 7) a trouvé en 56 examens :

5 Microcoques.

2 cocci ovalaires.

& Diplocoques.