S 1. — LA METHODE DE WONG; SA PRÉCISION RÉELLE
Les méthodes de dosage de l’hémoglobine qui sont à la fois précises et susceptibles d’un emploi courant dans un laboratoire de chimie clinique sont peu nombreuses; en effet, on ne peut guère considérer comme telles que certaines méthodes ferrométriques, et notamment celles de FoNTÈSs et THIVOLLE [33, 34, 35], de Mousserox et Mlle Cros [86] (50), de FOWWEATHER (2), et de WonG [144].
Parmi celles-ci, la méthode de WoxG est celle qui paraît plus particulièrement convenir en raison de sa rapidité, de sa simplicité de moyens, et de la précision de 2 % que son auteur lui attribue; aussi, lorsque nous avons voulu doser l’hémoglobine de façon pratique et précise, nous avons envisagé d'y recourir,
(50) Moyennant, toutefois, l’adoption d’un mode de minéralisation convenable.
(51) Voir note (46), page 55.
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Le principe et les détails du mode opératoire de la me-
thode de WonG sont les suivants:
A. — Principe:
« On sépare le fer de la molécule d’hémoglobine par l’action de l’acide sulfurique concentré, employé comme il l’est d'ordinaire dans la préparation de l’hématoporphyrine acide, la décomposition étant facilitée grâce à du persulfate de potassium.
Les protéides sont alors précipités par l'acide tungstique et filtrés; le procédé ne comportant pas d’ébullition, la concentration de l’acide dans l’inconnu peut être contrôlée et établie identique à celle utilisée pour la production de la réaction colorée dans le cas de l’étalon. Par l’action du sulfocyanure de potassium, on fait enfin passer le fer à l’état de sulfocyanure ferrique, composé sur lequel porte le dosage colorimétrique, en opérant en présence de persulfate de
potassium qui empêche toute réduction à l’état ferreux ».
B. — Mode opératoire:
« Mettre, dans un ballon jaugé de 50 cm, exactement 0 cm°,5 du sang étudié (sang défibriné) puis 2 em° d’acide sulfurique concentré exempt de fer; mélanger en imprimant à l’ensemble, pendant une à deux minutes, un mouvement de rotation. Additionner de 2 cm? d’une solution aqueuse saturée de persulfate de potassium pur et agiter.
Diluer jusqu’à environ 25 cm* avec de l’eau distillée et introduire dans le flacon 2 cm*° d’une selution aqueuse à 10 % de tungstate de sodium exempt de fer; mélanger; refroidir à la température ambiante sous le robinet et diluer ensuite exactement jusqu’à 50 cm® avec de l’eau distillée.
Boucher hermétiquement le facon et le renverser deux
0h 2 ou trois fois pour réaliser un parfait mélange. Filtrer le précipité tungstique ainsi obtenu, à travers un papier filtre sec, dans un récipient sec et propre; pipeter exactement 20 em* de filtrat limpide dans un grand tube à essai gradué à 20 et 25 cm“.
Mesurer, dans un tube à essai semblable, exactement 1 cm* d’une solution étalon d’alun de fer et d’ammonium contenant 0 mg, 1 de fer par cm (52); additionner exactement — au moyen d’une pipette de 1 cm° graduée en dixièmes — de 0 cm’, 8 de l’acide sulfurique précédemment utilisé et diluer avec de l’eau distillée juste jusqu’à la marque 20 cm°, en refroidissant à la température ambiante sous le robinet.
Additionner alors tant l’inconnu que l’étalon de 1 cm* de la solution de persulfate de potassium saturée et de 4 cm° d’une solution appropriée de sulfocyanure de potassium (53). Boucher avec des bouchons propres en caoutchouc, mélanger, enfin comparer au colorimètre de DuBosd.
Les 20 cm* de filtrat représentant 0 cm, 2 du sang initial, et la quantité de solution étalon employée contenant 0 mg, 1 de fer, le résultat cherché, exprimé en fer, sera:
XFe —— X 50 : (1)
(X re représentant le nombre de milligrammes de fer renfermés dans 100 cm° du sang étudié, h, la hauteur de lecture correspondant à la solution étalon, et h, celle correspondant à l'inconnu) ».
(52) Solution aqueuse à 0 g. 863 d’alun de fer et d’ammonium cristallisé pur et à 2 cm® d’acide sulfurique concentré exempt de fer pour 1.000 cms (Won& [144]).
(53) Solution aqueuse 3 N en sulfocyanure de potassium et à 4 % d’acétone pure (WoN&G [1441).
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Dans les dosages d’hémoglobine selon la méthode de Won, au lieu de laisser les résultats sous la forme ci-dessus, on les exprime souvent en « capacités respiratoires ». Pour
22.400 cela, il suffit de multiplier le rapport (1) par ——— = 0,4
