ILI. — RÉACTION DES POISSONS A LA BACTÉRIDIE
Les grenouilles ont été très étudiées, sans doute à cause de la facilité de les conserver vivantes et aussi de leur manipulation fort simple. Les poissons l’ont été moins. M. de Giaxa (14), enrecherchantlafaçon dont certainsmicrobes pathogènes pour les vertébrés supérieurs se comportent dans l’eau de mer, a fait avaler du charbon à divers poissons, et a constaté que, au bout de quelques heures, on ne retrouvait que bien peu de microbes.
M. Lubarsh (32, 35), au laboratoire de Naples, a expérimenté sur plusieurs espèces de poissons, mais toutes appartenant aux Elasmobranches : Torpedo marmorata et ocellata, Scyllium canicula et catulus et Raja. Les injections étaient faites sous la peau
du dos quand cela était possible (raies et torpilles), sinon dans le péritoine.
Les résultats de M. Lubarsh sont peu nets; et ils se résument assez complètement par la dernière phrase de son exposé: « Dans tous les cas, on ne saurait douter que les bacilles introduits ne meurent peu à peu, et que les phagocytes ne prennent au moins quelque part à cette mort. » ’
Ses expériences n’ont d’ailleurs pas toujours été couronnées de succès, comme il le déclare pour les squales.
I n’a pas recherché si la lymphe avait un pouvoir bactéricide ou atténuant chez l'animal vivant ou in vitro. Enfin il n'a pas étudié d’une façon spéciale les leucocytes du point d’inoculation.
Dernièrement MM. Sabrazès et Colombot (56) ont inoculé des Hippocampes, et constaté ce fait intéressant que, à la température de 14 à 26°, ce poisson prend le charbon. Malheureusement, et ces auteurs l’ont bien remarqué, ce ne peut être là qu’une exception, explicable par ce seul fait que la proportion des globules blancs est relativement très faible. |
J'ai cherché à élucider la façon dont les poissons résistent aux inoculations de charbon. Malheureusement, ces recher- .ches n'ont pu porter que sur des Téléostéens; mais je me suis attaché à montrer la grande généralité des faits observés. Mes expériences ont porté principalement sur Gobio fluviatilis et Perca fluviatilis. J'ai opéré aussi sur quelques Curassius auratus. Ces derniers mesuraient une dizaine de centimètres ; la longueur des autres variait entre 15 et 30 centimètres. Ces poissons vivaient longtemps dans un cristallisoir où l’eau se renouvelait constamment; la température était celle de l’eau du robinet : elle à varié, durant la période des expériences, de 15 à 20°, et n'a jamais dépassé ce dernier chiffre. Pour opérer à une température plus élevée (22 ou 23°), je mettais les poissons dans un cristallisoir rempli d’eau bien pure à cette température. Ils y vivaient plusieurs jours dans de très bonnes conditions. 4
Tous mes poissons étaient inoculés dans la cavité péritonéale, sur la ligne médiane, à 2 ou 3 centimètres del’anus, c'està-dire dans la région où le tube digestif est rectiligne ; je perçais obliquement la paroi du corps et j'inoculais 0,2 c. ce. à 0,4 c. c. d’une dilution de culture charbonneuse sur gélose, dans du bouillon. à
Les écailles du poisson fermaient la plaie, et les bactéries de l’eau ou de la surface de l'animal ne pénétraient que rarement à l'intérieur du corps, comme la suite de l'expérience le montrait.
Au bout d’un temps variable, j'introduisais dans la cavité péritonéale l'extrémité amincie d’une pipette flambée, et je retirais une certaine quantité de lymphe qui servait à faire soit des lames colorées, soit des gouttes pendantes, soit enfin des inoculations à des cobayes.
Les poissons, placés dans les conditions indiquées, résistent généralement aux injections charbonneuses, et j'en ai conservé plusieurs mois dans leur petit aquarium.
Quelques-uns succombaient, mais certainement par accident, soient qu'ils aient été manipulésun peu rudement, soit qu’une maladie parasitaire (due à une saprolégniée ou à une bactérie), ait élu domicile sur leurs écailles. #
Les poissons étudiés ne prennent donc pas le charbon. Et leur immunité n'est pas seulement relative, elle est absolue, pourvu que l’animal soit dans de bonnes conditions de vie. Les goujons et les perches inoculés et placés à 23° résistent aussi bien que les autres; et pourtant la température de 23° est très favorable au pu de la bactéridie charbonneuse.
De quelle façon ces poissons résistent-ils au charbon? Si on prend un peu de lymphe au point d'inoculation, quelques heures après l'injection du charbon, on est frappé par ce fait que cette lymphe est très abondante : c’est un liquide trouble, blanchâtre, qui s’élève à une certaine hauteur dans la pipette sans qu'il soit besoin d’aspirer. Il contient en suspension un nombre considérable de globules blancs. ,
Le lendemain il y a encore de l’exsudat au point d'inoculation, mais en proportion bien moins grande que le premier jour; on en tire à peine une goutte en introduisant le tube effilé :.
Lesjours suivants, l’exsudat diminue de plus en plus, et il est nécessaire d’aspirer fortement pour en retirer une petile quantité.
Donc leucocytose d’abord abondante, puis diminuant graduellement.
Examinons une lame colorée (éosine, bleu de méthylène)
4. Il est bien entendu que ces expériences sont faites à 15-200. — En expéri-
mentant à 12, la leucocytose commence bien plus tard, et il faut attendre plus de 42 heures pour avoir un fort exsudat.
faite avec de la lymphe d’un goujon retirée 6 h. 1/2 après l’injection, et au moment de la forte leucocytose. Un certain nombre de cellules contiennent à leur intérieur des microbes : les bacilles libres sont extrêmement rares. Il y a donc, chez ce goujon, déjà au bout de 6 h. 1/2, une phagocytose très nette et presque complète : le nombre des microbes libres est si faible qu’il peut être attribué aux leucocytes éclatés.
La phagocytose n’est pas toujours aussi avancée quelques heures après l’inoculation. Il y a évidemment des différences individuelles ; et surtout, au bout du même temps, la proportion des microbes englobés aux extracellulaires est d’autant plus grande qu’il y a moins de microbes injectés.
Dans le cas cité, il s'agissait d’un gros goujon qui avait recu 0,7 c. c. d’une culture en bouillon de 1 jour.
D’autres fois, si onexaminelalymphe retirée même 17 heures après l’inoculation, on trouve que la moitié des microbes seulement sont intracellulaires. Parmi les cellules renfermant les bactéridies, beaucoup en contiennent un petit nombre. Quelquesunes seulement en sont bourrées ; leur volume à alors doublé ou triplé. Fréquemment on observe autour des microbes des vacuoles. e |
Quoi qu’il en soit de la rapidité de l’englobement des microbes par les leucocytes, il se fait peu à peu (des préparations faites à des temps de plus en plus éloignés avec la lymphe d’un même poisson le prouvent nettement), et est d'autant plus lent que le moment de l’inoculation s'éloigne davantage. Deux ou trois jours après, on ne trouve plus que quelques microbes libres à côté des microbes englobés !.
Le lendemain de l’inoculation, on remarque que la plupart des microbes englobés se colorent mal, présentent des phénomènes de dégénérescence ; de certains on ne voit plus que des traces presque méconnaissables. I] y a destruction des microbes par les leucocytes.
De tous ces faits, je crois pouvoir conclure que les microbes finissent toujours par être englobés et détruits par les leucocytes.
A quel état se fait cet englobement? Je vais montrer:
A° Que les microbes englobéssont vivants ;
1. Le nombre des microbes libres est si faible qu’ils peuvent provenir de phagocytes éclatés,
20 Qu'ils sont virulents.
Retirons de la lymphe de la manière indiquée, et faisons-en des gouttes pendantes. Si on les place à l’étuve, on constate que, moins de 24 heures après, 1l s’y produit un abondant développement de charbon. Les bâtonnets, en général isolés ou par chaînes de 3 ou 4 articles au plus, donnent des filaments très longs qui s’enchevètrent les uns dans les autres. Si les bacilles ne sont pas très nombreux dans la goutte de lymphe, on observe ainsi le lendemain une série de petites colonies. L’« humeur » du poisson n'a donc pas de propriétés bactéricides à 35°. À 15-209, on n'observe pas de changements appréciables dans la goutte : la température n'est pas suffisante pour la croissance de la bactéridie. Mais si on porte la goutte pendante, au bout de 2 ou 3 jours, à l’étuve, on observe un abondant développement. L’humeur du poisson n’a donc pu détruire le bacille charbonneux.
Pendant 2 jours, à 15-16°, les leucocytes continuent à montrer des prolongements pseudopodiques, ils sont. encore vivants; * peuvent-ils détruire les bacilles intracellulaires ?
Une expérience m'a permis de répondre à cette question.
"Une goutte pendante laissée 2 jours dans le laboratoire et
contenant presque exclusivement des bacilles intracellulaires, est portée à l’étuve ; le lendemain, elle montre un aussi abondant développement bactéridien que celles portées dès le 1% jour à l’étuve. Donc, après deux jours, il reste encore de nombreux bacilles vivants dans les leucocytes: ces cellules, in vitro, ont été certainement atteintes dans leur MONO de digestion intracellulaire.
Ainsi donc l'humeur du poisson in vitro n’a aucune action bactéricide. Mais peut-être en a-t-elle dans l'organisme vivant. L'expérience que nous venons de citer montre déjà qu'il y a des bacilles vivants dans les leucocytes. Je peux donner deux autres preuves qu’une telle action n'existe pas:
19 Même 8 jours après l’inoculation, on trouve encore des bactéridies vivantes dans le corps du poisson, ainsi qu’on peut s’en assurer en ensemençant “ la lymphe sur gélose: on a quelques colonies ;
20 Dans les gouttes pendantes, on observe assez facilement des microbes englobés par les leucocytes. Si on met une goutte
pendante à l'étuve, on coustate qu'au bout de 5 ou 6 heures, une
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partie des bactéridies contenues à l’intérieur des leucocytes commencent à croître : 24 heures après, elles ont fait éclater complè tement le leucocvte, et ont donné naissance à une belle colonie.
Nous pouvons donc affirmer que le plasma lymphatique de poisson n’a pas de propriétés bactéricides ni in vitro, n1 dans l'organisme vivant; et que les microbes sont bien englobés à l’état vivant par les leucocytes. — On peut même dire que, in vitro, humeur du poisson constitue un bon milieu de culture pour la bactéridie.
Montrons maintenant que le plasma du poisson n’a pas de propriété atténuante.
Les expériences ont porté sur plusieurs goujons, perches et poissons rouges, et ont été faites, sauf les dernières, avec un bacille charbonneux, à spores, très virulent (tuant sûrement un lapin entre 24 et 48 heures). — Ces poissons ont servi à deux séries d'expériences :
1° On prend, avec une pipette eflilée, un peu de lymphe, , |
qu'on inocule à des cobayes; ;
2° Avec de la lymphe prélevée 6 ou 8 heures après l’inocu-+ lation, on fait des gouttes pendantes, qu’on conserve un temps variable, à 15-20°, ou à l’étuve, et qu'on inocule ensuite à des cobayes. |
Ces 2 séries d'expériences permettent de savoir si la bactéridie subit un changement de virulence par suite de l’action de la lymphe : 1° chez l'animal vivant ; 2° in vitro.
Le cobaye est un animal commode en ce qu’il résiste mieux - aucharbon que la souris; le temps que l’animal met à succomber mesure assez bien la virulence des bacilles injectés à condition que leur nombre soit appréciable‘.
Nous sommes arrivé aux résultats suivants pour la 1'° série d'expériences :
