IL. — PROCÉDÉS DE RECHERCHES

A. — Les deux microbes qui ont servi dans ces recherches sont la bactéridie charbonneuse et le bacille de la septicémie des souris. | |

1° Du premier, j'ai utilisé la forme ordinaire à spores et une variété asporogène préparée par le procédé des bouillons phéniqués de M. Roux.

Quand on examine la question de savoir si le charbon s’atténue dans le corps de l’animal inoculé, ou en gouttes pendantes, il est nécessaire de contrôler les expériences faites avec du charbon à spores, pard’autresfaitesavec de l’asporogène, car on pourrait objecter aux premières que Les spores des cultures ont conservé la virulence primitive ; et il est beaucoup plus commode de se servir de cultures que du sang d’un animal charbonneux.

J'ai utilisé des cultures faites sur gélose nutritive de la composition suivañte : |

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Ces cultures provenaient généralement de l'ensemencement du sang d’un animal charbonneux (cobaye ou lapin); de cette façon on a une idée assez exacte de la virulence de la bactéridie employée.

Cette bactéridie devait tuer un lapin de poids moyen (1X,500 à 2 kilos) entre 24 et 48 heures. Avec le charbon à spores, j'employais toujours des cultures d’un jour pour avoir de beaux bâtonnêts se colorant d’une façon bien uniforme et peu de spores. J'ai exceptionnellement usé de cultures d’asporogène de deux jours. Une culture était diluée dans 6 à 8 c. c. de bouillon de veau ordinaire ;

20 Le bacille de la septicémie pousse mal sur tous les milieux solides. Je me suis contenté de cultures en bouillon de veau peptonisé à 1 0/0, de 1 à 2 jours. Lh culture n’est jamais très abondante; mais les résultats de l’inoculation de 1 c. c. aux grenouilles ont été si nets qu’il a paru inutile de chercher un meilleur milieu nutritif.

B. — Mes préparations ont été surtout des préparations de lymphe, faites suivant le procédé recommandé pour le sang.

Les organes à couper étaient fixés à l’alcooi absolu, quelquefois aussi par le sublimé à saturation et acide. Mais par ce dernier procédé les granulations acidophiles ne prennent plus aussi bien la teinte de l’éosine. Les organes étaient ensuite inclus dans la paraffine et colorés sur lames.

C. — Le meilleur mode de coloration de la lymphe est le suivant. Colorer 5 minutes dans la solution :

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Laver à l’eau. Colorer 15 à 20 secondes dans une solution aqueuse à 3 0/0 de bleu de méthylène.

Laver très soigneusement à l’eau et laisser sécher ; puis monter au baume. Les granulations éosinophiles et l’hémoglobine se colorent en rose; les noyaux et les microbes en bleu plus ou moins intense; le protoplasme en bleu très clair.

Quelquefois la coloration à l’éosine, suivie d’un passage au Gram, est excellente pour permettre d’apercevoir facilement les microbes dans une préparation. Enfin, j'ai quelquefois employé

le picro-carmin pour colorer les noyaux, etle Gram pour les microbes.

Pour les coupes, la coloration au bleu de méthylène ne donne

pas de bons résultats. Une double coloration à l’éosine Gram permet de mettre bien en évidence les grains acidophiles et les microbes; mais les noyaux sont peu ou point nets. . Un bon procédé est celui qui consiste à colorer les microbes par la méthode de Gram, et à porter ensuite la coupe un quart d'heure à une demi-heure dans le liquide de Biondi-Heidenhain (mélange d’aurantia, de vert de méthyle et de fuchsine acide) Mais il faut que la fuchsine acide ne soit pas en excès dans le liquide, car alors les microbes se décolorent; on s’en aperçoit d’ailleurs facilement, les granulations éosinophiles prenant alors la teinte fuchsine. Quand la fuchsine est en proportion convenable, les granulations ; prennent une teinte jaune brunâtre, l'hémoglobine une teinte jaune orange, les noyaux se colorent en vertet le protoplasme est grisätre. On a ainsi, différentiés, tous les détails des cellules.

Enfin je me suis servi dé coupes colorées quelques heures dans le carmin boracique de Grenacher, puis décolorées quelques minutes dans l’alcool chlorhydrique. On a alors une bonne coloration des noyaux des cellules, avec élection de la couleur très nette sur la chromatine. Les cellules à granulations sontreconnaissables. Les microbes sont ensuite colorés par la méthode de

Gram.