C0 EURE

100 — 80 75: Valeur hématimétrique corrigée.

Pour une femme ayant par exemple 45 degrés SaxLi:

100 « D 62,5: Valeur hématimétrique corrigée.

On voit donc l'importance de cette manipulation, nécessitant la détermination préalable de la valeur physiologique moyenne normale du taux d’hémoglobine des deux sexes pour chaque région.

D’autres inconvénients doivent encore être mentionnés ici: Wu (57) a constaté que l’hémoglobine pure, traitée à égale concentration que dans le sang, soit 15 gr. % env., donne une coloration de 20% plus intense que le sang; il y aurait donc influence inhibitrice partielle, provoquée par les albumines ou les éléments minéraux du sang.

L’hémoglobine existe, d’ailleurs, dans le sang en suspension colloïdale et de la sorte l'intensité de la coloration est atténuée par des éléments altérant l’état de la dispersion. Enfin, FERVILLE critique les résultats obtenus sur des sangs d’anémiques.

Malgré toutes ces critiques la méthode de SaHLI et son petit colorimètre sont sûrement actuellement le plus souvent et universellement employés en clinique et des hématologues de la valeur de NAEGELI recommande cette technique.

Aussi BüRKER (59) a-t-il essayé d'améliorer les résultats et de les rendre comparables d’un laboratoire à l’autre, en étalonnant l’appareil de SAHLI à des valeurs d'hémoglobines absolues. Il a établi que le taux d’hémoglobine de la solution témoin et stable, employée actuellement pour l’appareil de Sac correspond à 17,3 gr. d'Oxyhémoglobine et par conséquent est égal à une solution de sang diluée 100 fois.

Un sang, qui donne la valeur de 100 degrés SAHLI, contient donc 17,3 gr. d’hémoglobine dans 100 cc.

En se basant sur les mêmes principes AUTENRIETH à encore modifié la méthode.

La technique présente des avantages remarquables sur les précédentes:

1) Le colorimètre d’AUTENRIETH-HELLIGE peut être employé pour le dosage d’autres éléments chimiques et biologiques. La comparaison des couleurs de deux solutions est plus facilement à apprécier que dans le SAHLI.

— or

2) Les résultats concordent mieux avec ceux donnés par les dosages ferrométriques.

3) La solution témoin, fournie par le fabricant et se trouvant dans le prisme du colorimètre est aussi stable que celle de Sax et elle est établie rationnellement.

4) L'avantage principal réside dans le fait suivant: Les volumes du sang à examiner et du liquide de dilution (HCI N/10) sont toujours constants et la teinte obtenue, grâce à la formation de l’hématine chlorhydratée, sera comparée à celle de la solution témoin contenue dans un prisme mobile, de sorte que l’on peut facilement obtenir légalité des teintes de la solution sanguine et de l’étalon à une épaisseur de couche donnée de ce dernier.

Mode opératoire personnel.

Nous avons choisi dix hommes d’apparence sains et bien portants.

Nous avons examiné leur sang selon les principes de NAEGELI (98) en étudiant la composition hématologique. A cet effet il faut que le sang réponde aux conditions suivantes:

1) Nombre des hématies: entre 4.500.000 et 5.000.000. 2) Morphologie et Chromométrie:

Anisocytose: néant; Microcytose et Poïkilocytose: néant; Hypochromatie: néant.

3) Viscosité du plasma sanguin: 1,7 à 1,9.

Viscosité du sérum sanguin: 1,65 à 1,75.

4) Hémoglobine d’après SaLi: 90 (80° Sa11 pour notre

région).

Nous avons dosé dans ces différents échantillons de sang le fer d’après la méthode de FoNTÈs et THIVOLLE (2), basée sur les principes de microdosage molybdomangani-

métrique. Les valeurs de fer ainsi trouvées variaient dans les limites de 0,0623 à 0,0480 gr. pour cent, mais Ja plupart des sangs montraient un taux de 0,0535 à 0,0565 gr. de fer pour 100 cc de sang, de sorte que nous pouvons établir une moyenne de 0,055 gr. pour cent.

À partir de ces sangs, nous avons préparé de l’oxy-hémaüine en employant la méthode de Hamsik (60), très facilement réalisable dans chaque laboratoire: Nous avons prélevé sur chaque homme 30 cc: de sang. Le sang défibriné a été coagulé à l’aide de l’acétone pure (RHÔNE-POULENC). On centrifuge pour décanter le liquide surnageant et récupérer le précipité. Celui-ci est lavé à plusieurs reprises au moyen d’eau distillée. Puis on lave encore avec de l’acétone pure. On décante et on fait un épuisement au refrigérant à reflux à l’aide d’acétone contenant 2% d’acide oxalique, L’extrait filtré est ensuite précipité au moyen d’une solution concentrée d’acétate de sodium, [’oxyhématine précipite de cette facon, on filtre et on lave le précipité à plusieurs reprises avec de l’eau distillée. Finalement on sèche à l’étuve à + 37°.

La poudre ainsi obtenue nous a servi pour établir nos solutions témoins. Ce produit contenait au dosage par la méthode de FOoNTES et THIVOLLE, un taux de 0,90% de fer en moyenne.

Si nous avons effectivement de l’hématine purifiée, nous pouvons établir le raisonnement suivant:

100 gr. de notre produit contiennent 0,9 gr. de fer; comme nous l’avions constaté, nos sangs étaient à un taux moyen de 0,055 gr. de fer %. Pour obtenir une solution d’'hématine contenant 0,055 gr. de fer, en admettant un poids moléculaire de 633 pour notre produit, il faudrait donc sensiblement une solution de 0,01 gr. d’hématine pour cent pour préparer une solution renfermant la même quantité de fer que nos sangs, dont nous sommes parti.

Nous nous sommes servis d’une solution de:

Hématine préparée par nous: 0,33 gr. (0,1).

Acide acétique cristallisable: 100,00 gr. (30).

Cette solution a été réalisée par chauffage à l’autoclave à + 120° pendant 5 minutes. Nous obtenons ainsi un liquide clair, brun foncé. À partir de cette solution nous avons effectué une série de solutions diluées à concentrations décroissantes. Les solutions contenant 0,059 à 0,061% correspondaient le mieux au degré opacimétrique mesuré à la cellule photoélectrique en comparaison avec nos sangs normaux, traités selon la méthode de SAaHLI-BürKER pour obtenir de l’'hématine chlorhydratée. Si nous calculons le taux en fer de notre solution d’hématine représentant 100% d’hémo-

globine, nous arrivons à l’équation suivante:

0,060 56 =: — 633 EX Lu fer a 0,053 °/

Fixé sur le taux et la concentration à employer en partant de notre hématine préparée directement, nous avons ensuite cherché à trouver un produit stable, facilement trouvable dans le commerce et permettant de préparer des solutions témoins toujours identiques.

Notre choix est tombé sur l’hématine MERCK, préparée d’après MERCK de la façon suivante: «Obtenue en traitant de loxyhémoglobine par un acide (S ou Cl). Dépourvue de propriétés albuminoïdes et renfermant le fer total de la molécule hémoglobinique. Poudre amorphe, noir-bleuâtre, soluble dans les alcalis dilués et les acides, insoluble dans l’eau, l'alcool et l’éther.»

Ce produit correspond d’après le fabricant à l’hémine de MOERNER (61) où à l’'Hématosine de NENCK1 (62) et répond à la formule: C#*H#O5N{Fe. Ce serait donc le produit correspondant à notre formule de constitution développée antérieurement.

Nous avons préparé à l’aide de l’hématine MERGK la solution standard suivante:

Hématine /MERCR RE 2 PRE On O1 gr.

mt ee,

Nous chauffons à l’autoclave à + 120° pour obtenir la dissolution complète. A partir de cette solution, nous avons préparé les dilutions successives de la façon suivante:

Solution d’hématine acétique ...... TAC GÉVCÉFINEA Dur Code) Er ne 5 gr.

FAURE ANTON RE ce dacc:

Nous obtenons ainsi une solution stable d’hématine, à laquelle nous avons ajouté successivement, chaque fois, 2 ce d’eau distillée, Nous comparons à la cellule photo-électrique chaque fois la nouvelle dilution avec la teinte de notre solution témoin préparée avec notre oxyhématine (HAMsiK).

Nous trouvons des degrés opacimétriques égaux avec la solution contenant:

Solution d’hématine MErRCKk acétique 1 cc.

Giycérine tpureA(Codex)#e 7e. . DROT.

PAU USTITÉCMR ERIC EN QTMENARRRE 30 cc.

Nous avons ainsi une solution d’hématine MERCK contenant sensiblement 0,009 gr. %.

Si nous admettons un poids moléculaire de 650 pour l’hématine MERCK (Chlorhydrate), nous obtenons pour nos régions la composition suivante du sang normal pour l’homme:

HémAaUNmeR nr 0,585 P.M. (650) Ier. EM ECS 0,0504 P. M. (56) FFémmoslobine %: ..0 7. 15,0002 P. M. (166.669)

Nous voyons par conséquent qu’à l’aide de l’hématine MERGK, facilement à obtenir et à composition stable, il est facile de se préparer une solution standard d'hématine.

Celle-ci peut être une fois pour toute étalonnée en comparant avec 4 ou 5 sangs d'hommes normaux, pour étre ramenée à la valeur physiologique moyenne normale de la région locale et servira ensuite continuellement de témoin, soit à l’aide du colorimètre d'AUTENRIETH-HELLIGE, soit à la cellule photo-électrique, comme nous allons maintenant le

décrire.

Etablissement de nos courbes d’étalonnage.

À l’aide de notre solution standard acétique, nous avons préparé des dilutions glycérino-aqueuses à taux progressivement diminuants. Ces solutions à titres d’hématine connus ont été ensuite employées pour déterminer:

1) Au moyen de la cellule photo-électrique (étalonnée à 106 MV. par rapport à l’eau distillée) le degré opacimétrique en MV. correspondant à chaque dilution.

2) Au moyen du colorimètre d'AUTENRIETH-HELLIGE les millimètres indiqués sur l’échelle graduée de lappareil. A cet effet nous avions introduit dans le prisme de l’instrument la solution antérieurement étalonnée, renfermant 0,009% d’hématine MERCK, que nous admettons, comme nos recherches l’avaient prouvé, comme correspondant à 100% d’hémoglobine en Alsace. Dans la cuve à faces parallèles nous avons successivement introduit les solutions diluées et nous avons ainsi pu tracer un graphique indiquant le pourcentage d’hémoglobine, contrôlé à l’aide de dilutions de sang normal.

Nous exprimons dans le tableau suivant ces valeurs:

Tableau N° VI.

Pourcentage

d'oxyhémoglobine : Grammes : d'Hémoglobine dans sur la base

15 gr. —= 100°/, 100 cc de sang

Dilution de la solution standard acétique

Relevé au colorimètre

Dans le graphique ci-joint (N° 4) nous reproduisons la courbe, qui correspond à ces valeurs.

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