Solution-étalon d’hydrobilirubine

Le

Etant donné l'exposé général que nous venons de faire la nécessité d'établir une solution titrée {d'hydrobilirubine apparait clairement. Cette solution titrée, étalonnée, renfermant un poids connu d'hydrobilirubine nous a servi à établir le dosage initial, celui sur lequel reposera toute notre méthode.

Pour établir une telle solution-mère une hydrobilirubine chimiquement pure, cristallisée eut été nécessaire. Malheureusement un tel produit n'existe pas et jamais aucun chimiste n'a encore pu l'obtenir pratiquement.

Ne pouvant nous procurer — puisque elle n'existe pas — une hydrobilirubine pure nous avons cherché à en obtenir une aussi pure que possible. Sur les conseils autorisés de M. Grimbert, professeur à l'Ecole de Pharmacie, nous

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avons rejeté l’hydrobilirubine ou urobiline obtenue par le procédé de Jaffé, manifestement entachée de trop d'impuretés et nous avons fait choix de l’urobiline en poudre de la maison Merck, obtenue par le procédé d'Hoppe Scyler, bien supérieure à la précédente. Ce n’est certainement pas une urobiline chimiquement pure,au sens absolu du mot, mais c’est à l’heure actuelle, celle qui se rapproche le plus de ce produit idéal.

Sans nul doute, il eut été préférable de pouvoir opérer avec un produit rigoureusement pur; mais cCommenous ne pouvions nous servir d’un produit qui n'existe pas, force nous a donc été de nous rabattre sur l’hydrobilirubine de Merck.

D'autant qu’à tout prendre, peu importe. En effet, le produit commercialisé de Merck est un produit stable, toujours comparable à lui-même et son mode de préparation est bien connu. Dès lors, c'est une entité bien définie, une base fixe avec laquelle nous pourrons comparer utilement tous les résultats de nos dosages et cela, avec la certitude d’être compris par tout le monde et en donnant à tous, la possibilité d’avoir entre les mains le terme même de la comparaison, c’est-à-dire le contrôle même de nos résultats. Quant à ces résultats eux-mêmes ils ne pourront évidemment indiqner qu’un poids d’hydrobilirubine exprimé en hydrobilirubine de Merck, préparée d’après le procédé d’'Hoppe-Seyler et non pas en urobiline pure. Si nous disons par exemple qu’une urine donnée renferme par litre 0,005 millim. d’urobiline, nous voulons dire d’urobiline de Merck et non pas d’urobiline cristal-

lisée.

Fabrication de La solution-étalon. — Nous avons de-

DESCOMPS %

mandé à la maison Merck un centisramme d'urobiline, rigoureusement pesé et vérifié.

A son arrivée au laboratoire il a été de nouveau pesé et vérifié par nous. Nous l'avons fait dissoudre dans l'alcool amylique, que notre expérience personnelle nous fait considérer coinme le meilleur dissolvant de l’urobiline.

Une telle dissolution ne va pas sans quelques difficultés. Voici en pratique comment il faut opérer :

On prend un mortier de verre neuf sans aucune aspérité et l’on y verse le centigramme d'urobiline pesé et vérifié. On le pulvérise finement à sec, puis goutte à goutte ettrès lentement,on commence à verser l'alcool amylique en pulvérisant toujours l’urobiline. La dissolution est à peu près complète au bout d’un quart d'heure. On verse alors la solution obtenue dans un ballon jaugé et vérifié de 100 centimètres cubes. Avec de l'alcool amylique pur, on lave à plusieurs reprises le mortier, afin d’entrainer les dernières traces d’urobiline et l’on ajoute tous ces liquides de lavage dans le ballon jaugé, en ayant soin d'employer au totalune quantité d’alcoo! amylique inférieure à 100 centimètres cubes.

À ce moment on porte la solution ainsi préparée dans un bain-marie à 50° et on l'y laisse séjourner une heure. Cette température trop basse pour agir d'une façon quelconque sur l’urobiline (nous nous en sommes personnellement assuré du reste) est cependant suffisante pour faire dissoudre les dernières traces de poudre d’urobiline et pour obtenir une dissolution absolument parfaite.

On filtre alors, puis on laisse refroidir et ce n'est que

lorsque la solution est revenue environ à + 15° que l’on complète exactement le volume à 100 centimètres cubes. On obtient ainsi une solution jaune ambrée renfermant