TECHNIQUE DU TITRAGE N

a) MATÉRIEL UTILISÉ. — Pour toutes nos expériences nous utilisons le matériel suivant

— Les réactions sont faites dans des tubes à hémolyse de 12x75 mm. (tubes de Kahn pouvant être centrifugés).

— La préparation des réactifs titrés est faite à l’aide de pipettes précises de 1 em* au 1/100° et de 10 em” au 1/10°.

— Pour la distribution des réactifs dans les tubes nous utilisons

a) pour des volumes compris entre 6,05 et 0,50 cm et variant par fraction de 0,05 cm des pipettes calibrées donnant exactement 20 gouttes au centimètre cube (pipeltes de Duclaux), ce qui permet une distribution rapide et suffisamment précise ;

b) pour des volumes de 1 ou de 1,5 cm° des rhéomètres de Vernes convenablement réglés : distribution précise et qui assure un mélange parfait des réactifs.

Cette verrerie doit toujours être maintenue chimiquement propre. L’emploi du savon ou des lessives est à proscrire pour le nettoyage des tubes. En plus de cette verrerie nous utilisons un réfrigérateur, un bain-marie

à 37°, une centrifugeuse et un photocolorimètre de Bonét-Maury.

b) Réacrirs. — 1. Solulion de CINa chimiquement pur, à 8,5 0/00. — Cette solution, isotonique (eau physiologique) sert à préparer toutes les dilutions des réactifs

— l’eau doit être récemment distillée et son pH compris entre 7 et 7,3 ;

— le titre de 8,5 0/00 en CINa doit être soigneusement respecté ;

— la solution doit être filtrée (et stérilisée si on veut la conserver plusieurs jours).

2. Le complément. — Les précautions habituelles doivent être prises pour assurer la meilleure qualité possible de ce réactif. On utilise donc un mélange du sérum de plusieurs cobayes robustes, et mâles de préférence. Les animaux à jeun sont saignés par section des carotides, ce qui est préférable à Ta ponction cardiaque, les cobayes soumis à des ponctions répétées fournissant à la longue un complément de mauvaise qualité. Le sang recueilli dans des tubes à centrifuger est abandonné 1 heure à Ja tempé-

rature du laboratoire. On décolle le caillot des parois de verre et on porte

les tubes dans le réfrigérateur pendant encore 1 où 2 heures. On centrifuge et on recueille le sérum clair.

Le problème de la conservation du complément peut être résolu par une de ces quatre méthodes qui donnent toutes de bons résultats

1. Lyophilisation (Flosdorf et Mudd) c'est-à-dire déshydratation sous vide à partir de l’élat congelé. Le complément se trouve alors sous forme pulvérulente, en ampoules scellées et peut être conservé plusieurs mois même à la température ordinaire.

2. Conservation à l'état congelé (à — 15°, — s0°) ; on ne doit dégeler que la quantité de complément dont on a immédiatement besoin, La durée de conservation est de quelques semaines.

9. Dissoudre 1 g. de CINa pur dans 10 cm° de sérum de cobaye : le complément se conserve ainsi à la glacière durant 2 à 3 semaines.