EN VUE DE LA RÉACTION A DO 0/0 D'HÉMOLYSE
Pour titrer le sérum hémolytique nous employons une méthode analogue à celle décrite par Kent [19]. Le titrage se fait en deux temps
— On recherche d’abord la dose minima active de complément correspondant au sérum hémolytique étudié, c'est-à-dire que l’on calcule l'unité 50 0/0 d’un complément quelconque en présence d’un très fort excès du sérum hémolytique considéré,
— On recherche ensuite la dose optima d'hémolysines en présence de l'unité 50 0/0 ainsi calculée : cette dose optima est la dose la plus faible de sérum hémolytique permettant d'obtenir encore 50 o/0 d’hémolyse en présence de cette quantité fixe et connue de complément, Contrairement
au titre du complément qui varie chaque jour, le titre du sérum hémolv-
tique est pratiquement invariable : il suffit de le vérifier tous les trois ou quatre mois.
a) MATÉRIEL ET RéacTIrs. — Le sérum hémolylique est un sérum de lapin ou de cheval anti-hématies de mouton préparé suivant les méthodes classiques et conservé à la glacière en l’additionnant d'un égal volume de glycérine pure et neutralisée. Ce sérum ne doit pas agglutiner les globules rouges de mouton au taux où il est utilisé pour l’hémolyse. Les autres réactifs (suspension globulaire standardisée, complément) étant les mêmes que ceux servant au titrage du complément, toutes les indications les concernant ont déjà été données.
— Le matériel est le même que celui servant au titrage du complément.
b) MOopbE OPÉRATOIRE. — On prépare une solution mère au 1/200° du
sérum hémolytique étudié.
PREMIER TEMPS. — Titrage de l’unilé 50 0/0 du complément du jour en présence du sérum hémolytique au 1/200°.
On titre l'unité 50 o/o suivant la technique précédemment décrite (cf. tableau 1) mais les globules rouges de mouton sont sensibilisés en mélangeant 10 minutes avant l’emploi
1 volume de suspension globulaire standardisée ;
1 volume de sérum hémolytique au 1/200° ;
1 volume de solution isotonique de SO,Mg à 1 0/00.
On distribue 1,5 cm de ce mélange dans tous les tubes du titrage : donc
chaque tube contient 0,50 em° de sérum hémolytique au 1/200°.
DEuxIÈME TEMPS. — Recherche de la dose optima d’'hémolysines en présence d'une unité 50 0/0 du complément du jour.
Dans une série de 10 tubes à hémolyse, on distribue dans l’ordre (voir tableau 4) :
— des doses croissantes de sérum. hémolytique dilué au 1/200° 0,05 cm° dans le premier tube, 0,10 cm° dans le deuxième, 0,15 cm° dans le troisième et ainsi de suite ;
— de l’eau physiologique pour compléter le volume de chaque tube à ODONCIN;
— dans chaque tube 1 cm* du mélange contenant
r volume de suspension globulaire standardisée ;
1 volume de SO,Mg à 1 0/00.
Chaque tube contient donc 0,50 cm° de suspension standardisée d’'hémalies.
On attend dix minutes pour permettre la sensibilisation des globules.
2h RÉACTION QUANTITATIVE DE FIXATION DU COMPLÉMENT
Titrage du sérum hémolytique en vue de la réaction à 50 0/0 d'hémolyse.
Numérocdes tubes CN | 2 5 4 5 ô 7 8 9 10 Sérum hémolytique au 1/200 . . AR a Re re 5 à = N. Re 7 Eau) salée à18,510/0. MR sed ec G. R. standardisés (+ Mo) x he 2 s I I I I I 1 I
attendre 10’
Complément dilué (1 unité 5o 0/0 dans a,6.em 00, 50: CM 00,5 %42,5712:5 011.506 50 me res
457 à 370. Centrifugation. Lecture photométrique du pourcentage d’hémolyse.
— On ajoute alors dans chaque tube 1,5 cm° de complément dilué de telle manière que 1,5 cm° de cette dilution contienne 1 unité 50 0/0 du complément titré dans le premier temps. Par exemple, si l'unité était
0,25 cm° au 1/100°, le complément devra être dilué à = :/600°. 00 CT 0 : 0,25
Les tubes sont placés dans le bain-marie à 37° pendant 45 minutes. On lès agite fréquemment. Les tubes sont ensuite centrifugés et l’on évalue photométriquement le pourcentage d’hémolyse atteint dans chacun de ces tubes. À titre d'exemple les résultats obtenus avec un sérum de cheval sont rapportés dans le tableau 5.
Résultats d’un titrage de sérum hémolytique.
Numéro des tubes . .| :— 2 3 n 5 6
Sérum hémolytique au [20070 ENST OS 0,10! 0,15) 0,20| 0,25| 0,30| 0,35| 0,40! 0,45| 0,50
