CHAPITRE PREMIER
TITRAGE D'UN SÉRUM SYPHILITIQUE PAR UNE RÉACTION QUANTITATIVE DE FIXATION DU COMPLÉMENT
Les sérums syphilitiques contiennent une globuline spéciale de la classe des anticorps : la réagine, isolée par Neurath et ses collaborateurs [37]. Cette réagine forme un complexe spécifique avec un lipide appelé cardiolipine, isolé par Pangborn du cœur de bœuf [32-33]. Toutes les réactions de séro-diagnostic de la syphilis (réactions de floculation ou réactions d’hémolyse) sont basées sur -ce principe.
La réaction quantitative entre la réagine du sérum syphilitique, l’antigène à la cardiolipine et le complément mesuré en unités 50 0/0 s'effectue dans cinq tubes à hémolyse. Chaque tube contient la même quantité de sérum mais des doses croissantes et connues d’antigène et de complément. Après le temps nécessaire à la fixation, à basse température, d’une partie du complément sur le complexe réagine-cardiolipine, on ajoute à chacun des cinq tubes la mème dose de globules rouges de mouton sensibilisés. On porte les tubes à 37° : le complément qui n'a pas été fixé hémolyse les hématies sensibilisées. On effectue donc dans ce deuxième temps un véritable titrage (à 50 0/0 d’hémolyse) du complément résiduel. On en déduit le nombre d'unités 50 o/o de complément fixées dans le premier temps de
la réaction : ce chiffre exprime le titre en réagine du sérum syphilitique. 1. — PRÉPARATION DES RÉACTIFS
— Le sérum soigneusement centrifugé est inactivé par chauffage dans un bain-marie à 55°-56° pendant exactement 30 minutes.
— Le complément est apporté par du sérum frais de cobaye titré à 50 070 d'hémolyse par la méthode précédemment décrite. On en prépare une dilution contenant 50 unilés 30 0/0 dans 1 em (soit 1/r le taux de cette
dilution). Par exemple, si l'unité 50 0/0 est 0,24 ém° au 1/100°, le complé-
ment doit être dilué à —=1/8,35 (1/r7=1/8,35): 4 100 X 1 SAC) 19) 5o X 0,24 — Suspension d'antigène à la cardiolipine. — Nous utilisons l’antigène à
la cardiolipine préparé par le Service des Antigeènes de l’Institut Pasteur pour les réactions de fixation du complément, Cet antigène semi-synthétique est une solution alcoolique contenant par centimètre eube : 0,06 mg.
de cardiolipine, 0,05 mg. de lécithine et 6,9 mg. de cholestérol. La léci-
thine el la cardiolipine sont purifiées suivant la technique décrite par M. Faure [53-58]. Lorsque l’on mélange cet antigène à de l’eau salée à 8,9 0/00 on oblient une suspension colloïdale de ces lipides antigéniques. On utilise dans tous les tubes de la réaction un même volume de suspension antigénique (1 em”) mais le titre de la suspension varie pour chacun des cinq tubes de la réaction, Voici les litres correspondants calculés d’après les résultats du titrage de l'antigène que nous exposerons dans le chapitre
suivant
Titre 1: 0,01 em* d’antigène pur dans 31 em° d'eau à 8,5 0/00 de CINa
Titre II : 0,03 cm* » » 32 cm° » »
Titre III : 0,05 cm° » » 9200 » »
TiremiVe 0 ;:0776m° DRE) 32 cm » »
lréremVa To on cm » » 32 cm° » »
Les suspensions colloïdales d’'antigène se préparent de la manière suivante
On mesure dans 5 Béchers de 250 em° les volumes d’eau physiologique indiqués.
On prélève l’antigène avec une pipette donnant exactement 100 gouttes d’antigène pur par centimètre cube (Pipette Pasteur convenablement étirée et étalonnée). On laisse tomber le nombre de gouttes nécessaires dans l’eau physiologique contenue dans chacun des Béchers auxquels on imprime un léger mouvement de rotation.
Ces suspensions colloïdales doivent être distribuées entre la ro° et la 30° minute qui suivent leur préparation.
— Les globules rouges de mouton sensibilisés sont les mêmes que ceux employés dans le titrage du complément, c’est-à-dire que l’on utilise
1,5 cm° du mélange, préparé 10 minutes avant l'emploi de
1 volume de suspension globulaire standardisée ; x volume de sérum hémol\tique dilué au titre voulu; 1 volume d’une solution à 1 0/00 de SO, Mg, 7OH, dans l’eau physiologique.
