MODE OPÉRATOIRE

Il s’agit d'effectuer avec chacun des sérums n° x et 2 et avec chacune des dilutions au 1/2 de ces sérums une réaclion quantilative à 5 tubes, mais en utilisant dans tous les tubes la même suspension antigénique. On pratique parallèlement la même opération avec chacune des 10 suspensions antigéniques. Pour chaque sérum pur et chaque dilution de sérum il faut donc prévoir 5o tubes à hémolyse, soit 200 tubes au total (placés sur un portoir métallique rectangulaire).

Distribution des réactifs. — Dans chaque groupe de 5 tubes on distribue dans l’ordre (cf. tableau n° 8) :

— 0,0 cm* de sérum inactivé (pur ou dilué) ;

— complément dilué à 1/r, à doses croissantes : 0,05 em° dans le 1° tube, oroiemadans lér2 etc:

— eau physiologique pour compléter le volume à 0,50 cm° ;

— 1 cm° de la suspension antigénique voulue.

On répète cette distribution 4o fois : d’une part pour le sérum n° 1, pour le sérum n° 2 et pour les dilutions au 1/2 de ces sérums, et d’autre part, pour chaque suspension antigénique.

— Pour Chaque dilution d’antigène on prépare un tube contenant 1 em° de suspension antigénique et 0,05 de complément à 1/r : ces tubes sont les témoins du pouvoir anticomplémentaire possible de l’antigène.

Temps de fixation. — 6 heures à + 6-82.

Temps d'hémolyse. — Les tubes sont réchauffés 10 minutes à 37° et on ajoute dans chacun, 1,5 cm° de suspension de globules rouges de mouton sensibilisés. Les tubes sont alors abandonnés 45 minutes à 57°, puis centrifugés. On évalue au photocolorimètre de Bonét-Maury le pourcentage d'hémolyse atteint dans chaque tube.

Réaction quantitative de fixation du complément à effectuer avec chacun des sérums 1 et 2, purs et dilués au 1/2 el avec chacune des dix suspensions d'antigène à la cardiolipine, pour réaliser le titrage de l’antigène à la cardiolipine en vue de la réaction quanlilalive de fixation du complé-

ment appliquée au séro-diagnostic de la syphilis.

Numéro des tubes

Sérum inactivé (n° 1 ou 2, pur ou dilué AU T2) RE PES 0) | 20 CD

Complément diluë à 1/r (5o unités BoY0)/0 AN SAC) A EN 00

EauSalée 41080 0/0 NE 070

Suspension antigénique (à essayer) .| 1

6 heures de fixation à 6-8 10’ à 370.

G. R. sensibilisés (standardisés)

45" à 37°. Centrifugation. Lecture photométrique du pourcentage d'hémolyse.

3. — RÉSULTATS. INTERPRÉTATION DE LA COURBE ET CALCUL DU TITRE DE L’ANTIGÈNE g

— Avec l’antigène que nous avons titré, les suspensions antigéniques ne montraient pas de pouvoir anticomplémentaire notable. (Les antigènes très anticomplémentaires, comme certains antigènes microbiens, ne peuvent être titrés par cette technique).

— Pour chacun des 4o groupes de 5 tubes, le nombre d'unités 50 07/0 fixées en présence d'un des sérums et de l’une des 10 suspensions anttgéniques est calculé soit graphiquement, soit à l’aide du tableau à double entrée du chapitre précédent (ef. tableau 7).

L'ensemble des résultats obtenus avec l’antigène essayé et les deux sérums syphilitiques choisis est représenté dans le tableau n° Qÿ : on voit que pour chaque sérum ou sa dilution il existe une suspension antigénique

permettant la fixation du nombre maximum d'unités 5o 0/0. TABLEAU 9

Résultats du titrage d'un antigène à la cardiolipine. Pour le calcul des titres oplima, voir la figure 4.

Numéro de la suspension antigénique

I 2 Nour 8 15 18 201 6)E2T ar R228 ED) 20 so - —— | ——— | || ——— | ——— |" —— | ———— | —— | = 2 N°2, pur | 7 10 12.913 919 ,9)0072 {t 9 8 6,5 = Le 2e RE er ces = E :

5 Non au 2 "105 8 10,5| 11,5| 11 9,5 9 8 6,5, 5,5 ; PMR neue LE Nm Rauar/ 2575 6/5) 0) 6 595 A 3 DIE DES

On peut exprimer graphiquement ces résultats en portant en ordonnées le nombre d'unités 50 o/o fixées et en abscisse le nombre de centièmes de centimètre cube d’antigène pur contenus dans 25 cm° de suspension antigénique.

On trace alors les quatre courbes joignant les points correspondant à une quantité

chaque sérum ou à chaque dilution de sérum, c’est-à-dire à donnée de réagine syphilitique (cf. fig. n° 4).

— Chaque courbe passe par un maximum dont l’abscisse représente le litre optimum de la suspension antigénique à employer pour que la fixation du complément soit maxima en présence de cette dose de réagine. On voit nettement que dans tous les cas, la réaction est partiellement inhibée soit par excès, soit par défaut d’antigène.

— On constate que les différents titres optima ainsi déterminés sont croissants pour des quantités de réagine croissantes, ce qui justifie le fait d'employer des doses croissantes d’antigène dans les réactions quantitatives du type Calmette-Massol modifié. D'autre part, les sommets des courbes correspondant à ces titres optima peuvent être reliés par une ligne droite

(en pointillé sur la figure).

&o RÉACTION QUANTITATIVE DE FIXATION DU COMPLÉMENT

— Cette ligne droite permet le calcul graphique des litres optima des suspensions anligéniques à utiliser dans la réaction quantitative. En effet, les 5 tubes de la réaction contiennent respectivement 2,5, 7,5, 12,5, 17,9 et 22,5 unités 50 o/o de complément, ce qui correspond à 1,5, 6,5, 11,5, 16,5

et 21,5 unités 5o o/o susceptibles d’être fixées (dans les conditions du

Ne RTS SA AS : os 15 É i “N°2 pur i N°3 diluëaul2 1) ” Nôk dilué au /2

Unités 50% de complément fixees [æ)

SRE 1 st L | eee RE TE SRG 2 00 CONEU

Centièmes de cm3 dantigene pur pour 25 cm; deau physiologique

Fi. 4. — Courbes permettant le calcul des titres des suspensions d’antigène à la cardiolipine à employer dans chacun des cinq tubes de la réaction quantitative de fixation du complément (d’après les résultats mentionnés dans le tableau 9).

Erratum : Sur la figure 4, à la place de sérum n° 3 dilué au r/2 et de sérum n° 4 dilué au 1/2, lire : sérum n° x dilué au r/2 et sérum n° » dilué au 1)».

litrage de l’antigène). L’abscisse du point d’ordonnée 1,5 de la droite est le titre de la suspension antigénique à employer dans le 1° tube de la réaction ; celui d’ordonnée 6,5 dans le 2° tube, etc... On a donc les résultats suivants

litre I : 0,008 cm* d’antigène pur dans 25 cm d’eau physiologique (ou 0,01 cm

d’antigène pur dans 31 cm d’eau physiologique)

RÉACTION QUANTITATIVE DE FIXATION DU COMPLÉMENT 4r

Titre IL : 0,035 cm° d'antigène pur dans 25 em d’eau physiologique (ou 0,03 em d’antigène pur dans 32 em° d’eau physiologique).

Titre HE : 0,039 em d’'antigène pur dans 5 cm d'eau physiologique (ou 0,05 em d’antigène pur dans 82 em° d’eau physiologique),

Titre IV : 0,0545 cm* d’antigène pur dans 25 cm’ d'eau physiologique (ou 0,07 em d’antigène pur dans 82 cm“ d’eau physiologique).

Titre V : 0,070 cm d'antigène pur dans 25 em d’eau physiologique (ou 0,09 em* d'antigène pur dans 32 cm° d’eau physiologique).

— On constate d'autre part qu'en présence de la quantité optima d’antigène la dose de 0,05 cm° du sérum n° tr fixe 22 unités 5o o/o et le même. volume du sérum n° 1 dilué au 1/2 fixe 11,5 unités 5o 0/0, soit environ la moitié. De même le sérum n° 2 fixe 14 unités 5o o/o et le sérum n° 2 dilué au 1/2 fixe 7,5 unités 50° 0/0. Il existe donc une relation à peu près linéaire (du type y=x) entre la quantité de réagine réellement présente dans un sérum et le nombre d'unités 50 o/o de complément fixées en présence de la dose optima d'antigène. En effet (cf. tableau n° 9) cette relation est beaucoup moins bien respectée si d’autres doses d’antigène sont utilisées.