B. — COLORA TION OES PRÉPARA TIONS SÈCHES

C'est le procédé qui permet le mieux de juger des caractères morphologiques des microbes; de plus il donne des préparations durables pouvant être conservées fort longtemps.

Opération. — 1° Déposer une goutte de la culture en bouillon sur la lamelle tenue avec la pince de Cornet. Étaler avec l'extrémité de la pipette, ou :

Déposer une goutte d'eau filtrée sur la lamelle et y délayer une trace de la culture sur milieu solide. Étaler avec l'ose.

2° Dessécher à une douce chaleur, soit en maintenant la lamelle à une certaine hauteur au-dessus de la veilleuse du bec de Bunsen, soit en la plaçant sur une platine de Koch (fig. 103) chauffée à 45°-50°.

Avoir soin pendant la dessiccation d'étaler constamment le liquide sur la lamelle pour éviter la production de cercles concentriques.

EXAMEN APRÈS COLORATION. I 43

3o Pour que les microbes ne se détachent pas de la lamelle pendant les lavages, fixer : a. en passant rapidement, à deux ou trois reprisés, dans la flamme chauffante du bec de Bunsen, la lamelle

Fig. 103. — Platine de Kocli.

dont la face enduite est tournée en haut; ce procédé a l'inconvénient de déformer, de ratatiner les bactéries ; — b. en versant sur la face enduite de la lamelle deux ou trois gouttes d'alcool-éther ; laisser évaporer. Ce procédé ne déforme pas les microbes.

Alcool-éther.

Alcool absolu... 50 centimètres cubes.

Étlicr rectifié 50 —

4° Faire tomber du filtre sur la préparation deux ou trois gouttes de solution colorante (fuchsine de Ziehl diluée, thionine phéniqu'éé, bleu alcalin, etc.); avoir soin que le liquide ne passe pas à la face inférieure de la lamelle. Laisser en contact Ireute à soixante secondes.

5° Laver en faisant tomber avec la pissette un filet d'eau sur un des coins de la lamelle ; ne jamais verser l'eau directement sur le centre de la préparation pour ne pas entraîner les microbes.

6° Examiner (de préférence avec l'objectif 1/12 et l'oculaire 1 ou II) :

a. Extemporanément, dans l'eau, en portant immédiatement la lamelle sur une lame. Essuyer soigneusement la face supérieure de l;i lamelle avec un linge fin avant d'y placer la goutte d'huile de cèdre nécessaire pour l'emploi de l'objectif;

6. Après dessiccation et montage au baume du Canada ; pour cela, sécher la lamelle à l'air ou à une douce chaleur, déposer alors sur la face enduite une goutte de baume prise au bout d'une baguette de verre, appliquer sur une lame et presser légèrement pour étaler le baume.

En résume:

Étaler sur la lamelle la goutte de culture, sécher, fixer, colorer, laver à l'eau, sécher, monter au baume, examiner.

Remarques. — a. 11 est important de se rappeler au cours des manipulations quelle est la face de la lamelle qui est enduite de culture: quand on a perdu cette face, il est quelquefois malaisé de la retrouver : on y

arrive en frottant légèrement 1-- voisinage des bords de la lamelle avec une pointe d'aiguille : on produit ainsi du côté de la face enduite des éraillures faciles à reconnaître. On évite ces désagréments en tenant la lamelle avec la pince de Cornet dont l'un des mors est muni d'un petit bouton frappé dans le métal; le bouton devra toujours être tenu en haut et correspondre à la face de la lamelle recouverte de microbes.

b. Ne déposer sur la lamelle qu'une très petite quantité de culture : on juge mieux de la forme des microbes quand il n'y a qu'un petit nombre d'individus par champ de microscope.

c. Employer le baume du Canada dissous dans le xylol; la solution devra avoir une consistance sirupeuse telle

Fig. 104. — Flacon à baume du Canada, qu'elle ne file pas quand on en prélève une goutte avec un agitateur; on conserve le baume dans un flacon fermé par un bouchon-cloche en verre et muni d'un rebord qui permet d'égoutter l'excès de baume emporté par l'agitateur (fig. 104).

cl. L'alcool-éther, l'alcool et en général tous les réactifs volatils seront conservés de préférence dans des flacons compte-gouttes bouchant à l'émeri (nombreux modèles dans le commerce) ; donner la préférence aux flacons de forme basse, en verre épais et de contenance de 60 à 100 centimètres cubes.