MÉTHODE DE COLORATION DE GRAM
Gram a imaginé une méthode de coloration, qui permet de classer les bactéries en deux groupes.
Quand on colore certaines bactéries par une couleur basique en solution anilinée ou phéniquée, et que Ton fait agir ensuite sur la préparation un mordant spécial à base d'iode, ces bactérie- né si décolorent plus par l'action de dissolvants tels que l'alcool absolu ; c'est le cas de la Bactéridie charbonneuse, par exemple.
Au contraire, d'autres bactéries, traitées de la même façon, se
EXAMEN APRÈS COLORATION
laissent décolorer facilement par l'alcool absolu : c'est ce qui se produit pour le Bacille typhique, par exemple.
On caractérise les bactéries suivant la façon dont elles se comportent vis-à-vis de cette réaction : on dit qu'elles prennent le Gram quand elles restent colorées, et au contraire, qu'elles ne prennent pas le Gram quand elles se décolorent La Bactéridie charbonneuse prend le Gram, le Bacille d'Eberth ne prend pas le Gram.
Le mordant utilisé a la composition suivante :
Liquide de Gram.
Iode 1 gramme.
Iodure de potassium 2 grammes.
Eau distillée 300 centimètres cubes.
Dans le procédé type on emploie comme décolorant Y alcool absolu, auquel on substitue parfois l'huile d'aniline pure (Weigert) ou Valcool acétone (Nicolle).
Alcool acétone.
Alcool absolu 2 parties.
Acétone 1 partie.
La méthode de Gram a subi de nombreuses modifications et est utilisée pour pratiquer des doubles colorations dans les frottis, les coupes, etc.; nous étudierons ces applications dans un chapitre spécial ; pour le moment nous nous en tiendrons à l'exposé de la méthode classique employée comme procédé de diagnostic.
Opération. — d° Préparer une lamelle sèche (Voy. p. 142).
2° Colorer pendant trente à cinquante secondes avec la solution colorante; nous recommandons le krystall violet phéniqué.
3° Rejeter l'excès de matière colorante (ne pas laver), puis déposer sur la préparation deux ou trois grosses gouttes du liquide de Gram ; laisser en contact vingt à trente secondes. La préparation prend une teinte brune.
4° Laver à l'eau, sécher.
d° Verser goutte à goutte de l'alcool absolu sur la lamelle pendant vingt à soixante secondes suivant les cas (intensité, durée d'action de la matière colorante, nombre de microbes, etc.).
6° Laver rapidement à l'eau.
7° Examiner la préparation dans l'eau. Si les microbes prennent le Gram ils sont colorés en violet intense; dans le cas contraire ils sont décolorés; parfois certains individus sont décolorés, les autres présentant encore une teinte violette, il suffira alors d'un nouveau lavage de quelques secondes à l'alcool pour terminer la réaction.
Bkssox. — Techn. microb., 2» édit. 10
Pour conserver la préparation, sécher cl monter dans le baume.
En résumé :
Préparer une lamelle sèche, colorer, traiter par la solution iodurcc, laver, sécher, traiter par V alcool, laver, examiner.
Remarques. — a. Le temps 5 (décoloration) est d'une exécution délicate, sa durée varie selon la matière colorante employée, sa durée d'action, etc. : on n'arrivera à une réussite complète qu'après quelques tâtonnements ; l'habitude et un certain tour de main constituent mieux que toutes les règles l'élément capital de succès. Savoir que, si une décoloration insuffisante peut induire en erreur, on parvient à décolorer les bactéries les plus résistantes en prolongeant outre mesure le contact de l'alcool.
b. Les préparations traitées par la méthode de Gram se conservent moins bien que celles qui sont colorées par les procédés ordinaires : elles se décolorent à la longue.
