CAPSULES
porter au-dessus d'une petite flamme; chauffer jusqu'à apparition de vapeurs ; approcher et éloigner de la flamme de manière à prolonger pendant quatre à cinq minutes l'action du liquide chaud. Les spores et les bactéries se colorent en rouge intense. 3° Laver à l'eau.
4° Faire agir sur la lamelle pendant quelques secondes une solution au quart d'acide nitrique :
.\cide nitrique pur 1 partie.
Eau distillée 3 parties.
Les bacilles se décolorent; les spores restent colorées. 5° Laver à grande eau.
6° Déposer sur la préparation une goutte de solution aqueuse de bleu de méthylène; laisser en contact vingt à trente secondes. Les bacilles précédemment décolorés fixent le bleu.
7° Laver, sécher, monter au baume. Les bacilles sont colorés en bleu, les spores en rouge.
Remarque. — Cette méthode donne d'excellents résultats avec le B. megaterium\ elle réussit moins bien avec la Bactéridie charbonneuse pour laquelle il est préférable d'utiliser comme décolorant (temps 4) l'alcool absolu. — La décoloration, d'ailleurs, constitue le point délicat de cette manipulation; après quelques tâtonnements on arrive à déterminer le temps nécessaire pour obtenir la décoloration des différents bacilles tout en conservant la coloration de leurs spores.
b. Procédé de Mœller. — 1° Préparer une lamelle. Sécher. Fixer pendant deux minutes à l'alcool absolu ; remplacer l'alcool par du chloroforme (deux minutes). Ne pas laver.
2° Déposer sur la lamelle quelques gouttes d'une solution d'acide chromique à 1 p. 20 (quatre à cinq minutes).
3° Colorer avec la fuchsine de Ziehl, à chaud, comme dans le procédé ci-dessus ; laver à l'eau.
4° Décolorer pendant quelques secondes avec une solution d'acide sulfurique à p. 100 ; achever la décoloration avec l'alcool absolu.
5°-6°-7° Laver, colorer au bleu, monter, comme ci-dessus.
Article II. — CAPSULES.
Certains microbes sont entourés d'une zone hyaline brillante, ou capsule, que l'on peut mettre en évidence par des artifices de coloration ; le microbe est alors fortement coloré et autour de lui apparaît la capsule pâle avec un bord faiblement teinté.
4° Préparer une lamelle, sécher, fixer.
2° Colorer avec une goutte du mélange suivant :
Violet acétisé.
Acide acétique
Solution alcoolique L'au distillée
do violet do gentiane ) ou do krystall violet.
I gramme.
'•> centimètres cubes.
Laisser agir trente à soixante secondes. 3° Laver, sécher, monter au baume.
Ce procédé suffit dans la majorité des cas; la coloration des microbes encapsulés, dans les coupes, exige des procédés spéciaux que nous étudierons plus loin (Voy. 2° Partie, ch. xv).
La simple coloration par la fuchsine de Ziehl diluée donne aussi d'assez bons résultats.
Les cils vibratiles ou flagella, organes de mouvement des microbes, ne sont visibles à l'état frais et sans coloration que chez les espèces de grande taille telles que les sulfobactéries [Bacterium photometricum, Beggiatoa roseopersinica t etc.) ; chez les autres bactéries mobiles, leur étude nécessite des procédés complexes de coloration.
g 1er. COLORATION DES CILS DES BACTÉRIES VIVANTES.
1° Déposer sur un porte-objet une goutte de culture en bouillon.
2° Y ajouter une goutte de solution de Ziehl étendue de trois à quatre parties d'eau; mélanger la culture avec la goutte colorante.
3o Couvrir avec une lamelle et examiner immédiatement avec l'objectif à immersion.
Les bacilles sont colorés en rouge intense et les cils teintés en rose pâle avec des grains rouges plus foncés disposés en série le long des flagella; les cils apparaissent surtout sur les bacilles bien vivants et très mobiles.
Remarque. — Ce procédé, très expéditif, ne réussit qu'avec certains microbes, principalement le Vibrion du choléra, le V. de Finkler-Prior, le V. Metc/mikowi; il échoue à colorer les cils d'un grand nombre de bactéries (B. typhique, B. coli commime , B. subtilis, par exemple).
