CILS

à l'eau distillée) de manière à obtenir une suspension à peine trouble et absolument homogène.

2° Déposer avec une pipette une goutte de cette émulsion sur une lamelle scrupuleusement propre, flambée et tenue avec une pince de Cornet. Si la lamelle n'est pas parfaitement nettoyée, le liquide ne s'y répand pas également.

3° En inclinant la lamelle dans tous les sens, répartir le liquide à sa surface, puis aspirer avec la pipette l'excès de liquide qui se rassemble à l'angle inférieur de la lamelle.

4° Laisser sécher à la température ordinaire, à l'abri des poussières. Ne pas fixer.

La lamelle est alors prête à subir l'action des liquides colorants employés suivant l'une des méthodes que nous allons exposer.

En observant ces règles on obtient une dilution telle que chaque champ du microscope ne contient qu'un petit nombre de bactéries, condition indispensable pour une bonne observation; de plus on élimine autant qu'il est possible les matières muqueuses qui agglomèrent les microbes dans les cultures et forment sur la lamelle des précipités abondants obscurcissant la préparation.

A. - PROCÉDÉ DE LOFFLER.

La mise en œuvre de ce procédé exige les réactifs suivants :

Encre de fuchsine.

Solution aqueuse de tanin à 20 p. 80 10 centimètres cubes.

Solution aq. saturée à froid do sulfate ferreux. . 5 — Solution alcoolique saturée de fuchsine 1 centimètre cube.

Mêler. Ne pas filtrer. Cette solution doit être employée fraîche.

Solution alcaline.

Soude à l'alcool 1 gramme.

Eau distillée 100 centimètres cubes.

Solution acide.

Acide sulfurique pur i gramme.

Eau distillée 100 centimètres cubes.

Solution colorante.

Eau d'aniline 100 centimètres cubes.

Solution de soude à 1 p. 100 1 centimètre cube.

Violet de gentiane ou fuchsine 4à5 grammes.

Agiter ; laisser en contact quelques heures dans un flacon ; filtrer. Opération. — i° Mordançage. — Déposer sur la lamelle préparée comme ci-dessus une grosse goutte d'encre de fuchsine additionnée,

suivant le microbe dont on veut colorer les cils, d'un certain nombre de gouttes de la solution acide ou de la solution alcaline. Chauffer sur la veilleuse du bec Bunsen jusqu'à dégagement de vapeurs sans atteindre l'ébullition et pendant trente à cinquante secondes.

La quantité des solutions alcaline ou acide à ajouter à 10 centimètres cubes 'd'encre de fuchsine a été déterminée par tâtonnements. Voici les chiffres qui se rapportent aux principales bactéries ciliées :

Mordant sans addition aucune Spirillum concentricum.

+ 1/2 à 1 goutte solution acide Vibrion du choiera.

■+■ VI gouttes Bacille pyocyanique.

+ XVIII à XX gouttes sol. alcaline. Wicrococcus agilis.

-f- XX gouttes Charbon symplomatique.

+ XX à XXX gouttes Bacille typhique.

-f XXVIII à XXX gouttes Bacillus subtilis.