FILTRATION

branche descend jusqu'au fond du flacon et dont la deuxième, extérieure, est étirée et fermée à la flamme. Le bouchon ainsi préparé est enveloppé de papier filtre et stérilisé à l'autoclave à 120°.

Au moment de l'appliquer sur le flacon, on flambe le col de celuici, puis on déplie le papier qui entoure le bouchon répartiteur, et on saisit ce bouchon par sa partie supérieure avec la main gauche. La main droite restée libre débarrasse le flacon de son premier bouchon, et rapidement celui-ci est remplacé par le bouchon répartiteur. Cette opération doit se faire très vite, pour éviter la chute des poussières atmosphériques dans Je flacon ; le bouchon et le tube de verre plongeant dans le flacon ne doivent avoir aucun contact avec les objets extérieurs.

Pour extraire le liquide du flacon il suffit d'adapter une poire en caoutchouc à la tubulure A, de flamber la partie effilée du tube H et d'en casser l'extrémité avec une pince flambée : quelques coups de poire amènent l'écoulement du liquide. Quand on a extrait une quantité suffisante de filtrat, on ferme le tube B à la lampe, ce qui permet de conserver le liquide restant dans le flacon à l'abri de l'air.

Au moment où l'on cesse de souffler, il se produit quelquefois, avec cet appareil, une rentrée d'air dans le flacon par le tube B; cet air peut entraîner avec lui des impuretés et souiller le liquide. On remédie à cet inconvénient par le très simple dispositif suivant.

La branche extérieure du tube B est, avant la stérilisation, coupée vers sa partie moyenne. On rejoint les deux fragments b et c au moyen d'un tube en caoutchouc rouge long de quelques centimètres et clans lequel on introduit à frottement une baguette de verre de 1 à 2 centimètres de longueur (fig. 16). A l'état de repos, la baguette obture complètement le tube en caoutchouc et s'oppose à toute com- j munication avec l'extérieur; mais vient-on à pincer latéra- p. .g qj,. lement, entre le pouce et l'index, le tube de caoutchouc, il '?uratjon diî en résulte la formation d'un petit canal par lequel passe le li- tube répaitiquide. Pour se servir de l'appareil, on opère ainsi qu'il suit : leur.

Le tube effilé étant flambé, son extrémité est cassée, on donne quelques coups de poire, puis on pince le tube de caoutchouc, le liquide s'écoule. Veut-on arrêter l'écoulement, on relâche d'abord le tube de caoutchouc : le liquide cesse de couler, toute communication avec l'extérieur est interrompue, alors seulement on supprime la pression, on sépare de l'appareil la poire de caoutchouc et ferme à la lampe la pointe effilée.

2° Appareil a fii.tration de Martin (fig. — 11 se compose d'un cylindre métallique B, analogue à celui que nous avons décrit page 15, et à la partie supérieure duquel on visse un;entonnoir métal*

STÉRILISÂT K)\,

«que a robinet, D. Le liquide verse dans cet entonnoir pénètre dans la ga.ne métallique et traverse la bougie qui S est contenue pour arriver, par l'intermédiaire d'un tube en caoutchouc li dans le ballon C ou L'on fait le vide au moyen de la trompe à ëau Une tubulure effilée, maintenue fermée pendant l'opération, permettra

Fig. 17. — Appareil à fillralion de L. Martin.

ultérieurement de répartir le liquide dans des tubes nu fiol<flambés.

La tubulure supérieure du ballon C, par laquelle on fait le vide, doit être munie d'un tampon d'ouate que l'on a omis de représenter dans la figure 17. Toutes les pièces de l'appareil doivent être stérilisées avant la fillralion.

Cet appareil a peu d'avantages sur le précédent; il a, en revanche, l'inconvénient de coûter fort cher.

3° Bougie diî laboratoire. — Quand on veut filtrer une très petite quantité de liquide, pour l'essai d'une toxine, par exemple, on peut utiliser une petite bougie à parois minces, longue de 12 à 15 centimètres, sans embase, et dite bougie de laboratoire.

FUTRATIOX. â3 a. L'appareil peut être disposé comme le représente la figure 18; la bougie

Fig. 19. — Carafe de Duclaux pour filtrer Fig. 20. — Filtre de Kilasalo.

dans le vide.

plonge dans une petite éprouvette où se trouve le liquide à filtrer; un tube en caoutchouc, fortement fixé à l'aide d'une ligature élastique sur l'extré-

STERILISATION,

mite supérieure de lu bougie, relie celle-ci à un petit ballon B à deux tubulures. A la tubulure A, munie d'un lumpon d'ouate, on adapte soit la trompe à eau, soit une petite pompe aspirante du modèle de celle de l'appareil Potain. Stériliser l'appareil à l'autoclave avant de s'en servir.

b. La bougie peut encore être adaptée dans une carafe à trois tubulures comme dans la figure 19. Pour cela le pourtour de l'extrémité supérieure de la bougie est garni d'un peu d'ouate, puis on fait pénétrer la bougie à frottement dans la tubulure supérieure; on terme la tubulure D et on garnit d'un tampon d'ouate la tubulure B. Après stérilisation à l'autoclave, on verse sur l'ouate, en F, un peu de cire Golaz liquéfiée, pour rendre le joint étanche. La tubulure B étant réunie à la trompe à eau, le liquide à stériliser, versé en E, traverse le bougie et se collecte dans le ballon; pour répartir le filtrat, il suffit de briser la pointe D et de souffler par B (Duclaux).

c. Le filtre de Kitasato, l'appareil de Martin pour essais, sont des modifications de la carafe de Duclaux; l'inspection des figures ci jointes suffit à montrer leur mode de fonctionnement (fig. 20 et 21).

Fig. 21. — Appareil à fillration

de Martin pour essais. Règles générales. — En résumé, dans

la stérilisation par filtration, deux règles

capitales sont à observer :

1° N'opérer qu'avec un filtre contrôlé, ne laissant passer aucun germe, et préalablement stérilisé.

2° Maintenir le liquide filtré à V abri de toute souillure.

Article IV. — STÉRILISATION PAR LES ANTISEPTIQUES.

Ce procédé de stérilisation est peu employé, car, non seulement il détruit les microbes contenus dans le milieu que l'on se propose de stériliser, mais il rend encore ce milieu impropre à des cultureultérieures : la dose d"un antiseptique nécessaire pour détruire les germes dans un milieu, est toujours de beaucoup supérieure à celle qui suffît pour empêcher le développement de nouveaux germes apportés dans ce milieu.

1e On utilise les antiseptiques pour stériliser les cloches el cristallisoirs devant contenir des appareils de culture sans cependant être en contact direct avec les cultures; dans ce cas il faut avoir soin d'employer des antiseptiques fixes, n'émettant pas de vapeurs qui. en Venant au contact des germes, empêcheraient leur développement.

On emploie d'ordinaire la solution de sublimé au millième. Cette

STÉRILISATION PAR irE^A' n4 TsUS fcTclf . L-E^DS.

solution de sublimé peut être préparée avec de l'eau ordinaire, mais il faut alors ajouter à l'eau une petite quantité d'un des acides tartrique, acétique ou chlorhydrique, pour que le sublimé ne soit pas précipité par les sels en solution dans l'eau.

De plus, l'addition d'un acide à la solution de sublimé augmente beaucoup son pouvoir antiseptique et empêche le sel de mercure d'être précipité au contact des liquides organiques, ordinairement de réaction alcaline.

Furbringer conseille la solution suivante:

gau 1 000 grammes.

Chlorure mercurique I gramme.

Acide acétique cristal lisable Os',50

Il faut donner la préférence à la formule de Laplace, beaucoup plus active :

Eau 1 000 gramme?.

Chlorure mercurique I gramme.

Acide chlorhydrique 3 grammes.

Cette solution sera couramment employée pour le lavage des mains, des cloches, etc. En avoir plusieurs litres préparés d'avance.

Nous avons à peu près abandonné le sublimé pour adopter Yoxycyanure de mercure en solution au millième. L'oxycyanure, antiseptique énergique, n'est pas caustique, il ne précipite pas les album inoïdes, enfin, il n'attaque pas les objets métalliques. 11 peut être utilisé pour le lavage des mains, des vases, l'antisepsie des instruments métalliques au cours des vivisections, etc.

2° Les solutions de sublimé ou d'oxycyanure de mercure sont utilisées pour stériliser la surface cutanée quand, sur le vivant, on veut faire des prélèvements de pus, de sang, etc. (Voy. chap. xi). Il faut alors avoir soin, la stérilisation terminée, de débarrasser le tégument de toute trace de l'antiseptique, au moyen de lavages à l'alcool, avant de faire le prélèvement, sans quoi les résultats des cultures seraient négatifs.

3° On utilise encore les antiseptiques quand on se propose d'empêcher la pullulation des germes dans un liquide tiltré et ne devant plus servir de milieu de culture : on ajoute alors une petite quantité , d'un antiseptique dépourvu d'action chimique sur les éléments que contient le liquide, par exemple, de l'acide thymique, du camphre.

4° Enfin, on stérilise quelquefois à l'aide d'un antiseptique une culture où l'on veut étudier les produits de sécrétion des microbes.

On emploie dans ce cas des antiseptiques volatils, tels que chloroforme, essence de moutarde, toluol, etc., dont on pourra ensuite facilement débarrasser le liquide par évaporation.

Les substances nécessaires à la vie des microorganismes peuvent être fournies par des macérations, des bouillons de tissus animaux, des infusions végétales, ou enfin des solutions salines additionnées d'un hydrocarbure. Les milieux de culture peuvent être solides ou liquides.

Les microbes, comme toutes les cellules vivantes, sont constitués par des matières organiques azotées et non azotées et par des sels minéraux.

Il faudra donc leur fournir ces trois catégories de substances. De plus, toute cellule respire ; les microbes ont besoin d'oxygène.

Mais, tandis que certains microbes, les aérobies, sont susceptibles, comme les êtres supérieurs, d'utiliser l'oxygène gazeux tel qu'il se trouve dans l'air, les autres, ou anaérobics, ne peuvent se développer au contact de l'oxygène libre et empruntent ce corps à une de ses- combinaisons qu'ils décomposent à mesure de leurs besoins (Pasteur).

A ces deux catégories de microbes correspondent des modes de culture fort différents ; les aérobies doivent être cultivés dans des vases permettant le libre accès de l'air; les anaérobies, au contraire, ne se développent que si on les préserve du contact de l'air, en les cultivant, soit dans le vide, soit en présence d'un gaz inerte.

Quoi qu'il en soit, les milieux de culture sont les mêmes pour ces deux sortes ûe microorganismes et doivent toujours contenir des matières azotées, des éléments ternaires et des sels. Plusieurs microbes sont susceptibles de décomposer les combinaisons minérales de l'azote (azotates, etc.) et de transformer l'azote de ces sels en azote organique : dans un certain nombre de cas, on pourra cultiver les microbes dans des milieux purement minéraux auxquels on aura eu soin d'ajouter une petite quantité (i'uii hydrocarbure, de sucre par exemple.

Règles générales. — Tout milieu de culture doit : 1° Contenir les substance* nécessaires au développement du microbe qu'on y ensemencera ;

2° Avoir été préalablement stérilisé ;

3° Être contenu dans des vases qui le mettent à l'abri de toute contamination par les germes extérieurs.

Vases de culture. — Ils sont très variés; nous les décrirons à

mesure que nous en ferons usage ; nous nous contenterons, pour le moment, de signaler les modèles les plus fréquemment utilisés pour la culture des aérobies.

i Les tubes à essai ordinaires, mais sans rebord à l'orifice, sont d'un

usage constant. Ces tubes seront boucliés à l'ouate, comme nous l'avons expliqué plus b au t.

2" Les mettras Pasteur, petites fioles d'une contenance de 30 à 50 grammes, sont aussi très employés. Ces matras sont d'ordinaire

Fig. H. — Tube pour culture Fig. 23. — Malras Pasteur,

bouché à l'ouate.

bouchés au moyen d'un bouchon tubulaire en verre, embrassant leur col rodé à l'émeri, et muni d'une cheminée étroite portant un tampon d'ouate. Ce mode de fermeture protège très efficacement le contenu du ballon contre les diverses causes de souillure, mais il a l'inconvénient d'être très fragile : le bouchon de verre éclate souvent quand on le flambe avant d'ouvrir le matras.

Il est préférable de coiffer l'orifice des matras avec un petit capuchon de papier filtre (rouler une petite bande de papier filtre autour du col et en tortiller sur elle-même la partie supérieure), ou plus simplement encore de boucher ces flacons à .l'ouate comme les tubes à essai.

Capuchons de caoutchouc. — Le bouchon d'ouate ne préserve pas le contenu des tubes de l'évaporation ; pour conserver certains milieux solides,

luis que sérum, gélose, pomme de terre, etc., ou devra empêcher Cette évaporation eu eoill'aul les tube.*, préalablement bouchés à l'ouate, avec uu capuchon do caoutchouc. Mais ces capuchons maintiennent l'ouate humide : il faut les stériliser avant leur application, sans quoi les germes qu'ils apporteraient finiraient par traverser l'ouate humide et souilleraient le contenu des tubes. On les stérilise à l'autoclave à H5° ou en les trempant dans le sublimé acide.

Il est encore plus simple, pour conserver les cultures de collection de tremper l'extrémité des tubes bouchés à l'ouate dans la paraffine fondue.

Article I. — MILIEUX LIQUIDES.