BOUILLON DE BŒUF PEPTONISÉ

Ce milieu est d'un usage fréquent; nous le désignerons par le simple mot bouillon.

Préparation. — 1° Prendre 500 grammes de viande de bœuf, maigre, privée de tendons et d'aponévroses; la hacher menu, la faire macérer pendant quelques heures dans 1 000 grammes d'eau froide.

2° Cuire le tout à feu doux dans une casserole émaillée, remuer constamment avec une spatule. Porter lentement à l'ébullition, et prolonger celle-ci pendant dix minutes.

3° Jeter sur un torchon épais et propre, exprimer fortement le résidu, recueillir le liquide qui s'écoule et le filtrer chaud sur un filtre en papier épais (Chardin ou Prat-Durnas) et mouillé afin de retenir la graisse.

4° Verser le bouillon filtré dans une casserole émaillée, y ajouter:

Peptone sèclie (Cliapotcaut ou Witte). 10 grammes, soit 1 p. 100 de l'eav employée.

Sel marin S — soit 0,5 p. 100

Phosphate de sonde. . Une pincée (environ 1 gramme).

Porter à l'ébullition en agitant pour assurer la dissolution de la peptone.

5° Le liquide obtenu est fortement acide; il faut le neutraliser, les

(1) .Nous ne décrirons que les milieux de culture d'un intérêt général : les variantes propres à l'étude de certaines espèces microbienne.) seront décrites quand nous nous occuperons de ces espèces.

bactéries se développant de préférence en milieu neutre ou légèrement alcalin.

Pour cela, employer une solution normale de soude dont on verse, avec une pipette, de petites quantités dans le bouillon en ayant soin de véritier fréquemment, avec le papier de tournesol, la réaction du liquide. On cesse d'ajouter de la soude dès que le papier rouge est très légèrement bleui par une goutte de bouillon porté à son contact avec un agitateur en verre. L'alcalinité doit être très peu prononcée; le bouillon est alors alcalin au tournesol et acide à la phtalléine.

Ce temps est le plus délicat de la préparation du bouillon ; la quantité d'alcali à ajouter varie beaucoup avec les différentes viandes; aussi ne peut-on procéder que par tâtonnements. Ajouter très lentement la solution de soude, remuer avec soin la masse à chaque nouvelle addition. Quand on approche de la neutralisation, essayer le bouillon à la fois avec un papier rouge et un papier bleu de tournesol ; il arrive un moment où une goutte de liquide ne fait virer aucun de ces deux papiers ; il suffira alors d'ajouter une très petite quantité de soude pour avoir une alcalinité suffisante; Park et Williams ont montré que pour obtenir l'alcalinité favorable il faut ajouter au bouillon neutre 7 centimètres cubes de solution normale de soude par litre de bouillon (1).

6° Le bouillon alcalinisé est versé dans un mat ras en verre, ou mieux dans une boite à lait en tôle émaillée et on le porte à l'autoclave à U5°-H7° pendant cinq minutes. Le liquide se trouble et il abandonne des grumeaux de phosphates terreux.

Retiré de l'autoclave, il est jeté chaud sur un liltre Chardin mouillé : les grumeaux sont retenus et le filtrat doit être absolument limpide.

Cette opération a pour but de débarrasser le bouillon des phosphates terreux en excès ; si l'on omettait de la pratiquer, le bouillon se troublerait lors de la stérilisation.

7° Le liquide limpide obtenu est ramené au volume de 1 000 centimètres cubes par addition d'eau distillée.

8° Le bouillon est alors terminé; il ne reste plus qu'à le répartir dans les vases de culture et à le stériliser.

a. Si l'on désire conserver le bouillon pour un usage éloigné, on peut le verser pour la slérilisation dans un grand matras fermé à l'ouate ou dont on étire le col à la lampe. Au moment du besoin, on répartira le liquide nutritif dans les vases de culture suivant le procédé indiqué page 47.

(I) La solution normale de soude conlieut 40 grammes de NalIO par litre d'eau distillée.

b. Mieux vaut répartir immédiatement le bouillon dans les tubes à essai ou les mal ras Pasteur :

1° Verser 10 à 15 centimètres cubes de bouillon par tube ou 2o centimètres cubes par matras.

Il faut dans colle opération se servir d'un petit entonnoir de verre pour ne pas mouiller l'orifice des tubes ; le bouillon desséché au contact du bouchon d'ouate ferait adhérer ce bouchon et on ne pourrait, par la suite, ouvrir le tube que difficilement; cette précaution est encore plus importante quand ou utilise une substance solidiliable comme la gélose ou la célatine.

2° Fermer les tubes ou flacons à l'ouate.

3° Porter les vases à l'autoclave dans un panier en toile métallique et stériliser à 115° pendant vingt minutes, en ayant soin de ne pas dépasser cette température et en observant les règles exposées au chapitre premier (1).