TRAITEMENT PRÉLIMINAIRE DES COUPES

Les coupes ne peuvent être traitées par les réactifs colorants qu'après avoir été débarrassées de la paraffine qui les imbibe.

A. Procédé recommandé. — 1° Aussitôt faites, les coupes son! portées dans un cristallisoir à couvercle rodé contenant de l'éther ; l'éther dissout rapidement la paraffine; la durée de l'immersion dans l'éther varie de plusieurs minutes à quelques heures, selon les dimensions et le nombre des coupes traitées.

2° Quand les coupes sont débarrassées de la paraffine, on les porte avec une spatule de platine ou de nickel dans un second cristallisoir contenant de l'alcool absolu.

3° Après quelques minutes d'immersion dans l'alcool les coupes

COUPES

• sont transportées une à une, avec la spatule, dans un cristallisoir plein d'eau distillée; au moment du contact avec l'eau, les coupes présentent un mouvement giratoire très vif, qui les déroule et les étale. Quand les coupes sont fines et fragiles, la brusquerie de ce mouvement giratoire peut les casser et les rendre inutilisables ; il est bon dans ce cas de porter les coupes, au sortir de l'alcool absolu, dans de l'alcool à 70°, puis dans de l'alcool à 40°, et enfin, seulement, dans l'eau distillée.

4° Pour transporter une coupe sur la lame porte-objet, on plonge celte lame obliquement dans l'eau où se trouvent les coupes, on entraîne une de celles-ci avec une aiguille jusqu'au niveau du milieu de la lame, avec l'aiguille on fixe contre la lame l'angle supérieur de la coupe et on sort doucement la lame de l'eau : la coupe s'étale d'elle-même. On enlève l'excès d'eau avec du papier à cigarettes ou du papier de soie découpé en petits rectangles (et non déchiré, pour éviter la présence de barbes qui pourraient accrocher et entraîner la coupe), et la coupe est prête à subir la coloration.

B. Fixation à l'albumine. — Le procédé ci-dessus suffit dans la majorité des cas entre des mains expérimentées; mais quand les coupes sont très délicates (pou mon par exemple), elles sont exposées à se déchirer pendant les manipulations qu'il exige. 11 faut alors, aussitôt la coupe pratiquée, la fixer, ne varietur, sur la lame porte-objet. Le mode de fixation le plus ordinairement employé en bactériologie est celui qui utilise l'albumine de Mayer.

Albumine de Mayer. — Battre deux blancs d'œuf en neige, laisser déposer, filtrer sur papier et ajouter au liquide clair obtenu son volume de glycérine. Conserver dans un flacon bien bouché dans lequel on place un petit fragment de camphre ou de thymol pour empêcher la putréfaction. Au moment de l'usage, rétablir par agitation l'homogénéité du liquide.

Mode d'emploi. — Dès que la coupe est pratiquée, on la porte avec la spatule sur une couche mince d'albumine déposée sur la lame (une gouttelette d'albumine a été placée sur la lame, puis étalée en couche très fine avec la pulpe de l'index). Avec le pinceau on étale la coupe avec soin de façon qu'elle ne fasse pas de plis, puis on exerce une légère pression pour la faire adhérer à l'albumine.

Si les coupes ne s'étalaient pas, on disposerait à la surface de la lame enduite d'albumine une gouttelette d'eau, on placerait la coupe sur cette goutte d'eau, puis on chaufferait légèrement sur la platine chauffante jusqu'à ce que la coupe s'étale ; ce résultat obtenu, on enlève l'excès d'eau avec du papier de soie et ou continue l'opération comme ci-dessous.

On chauffe alors très légèrement sur la veilleuse du bec Bunsen la

l'ace libre de la lame porte-objet, en quekpjes secondes la coupe devient adhérente au verre. Ueste à la débarrasser de la paraffine : pour cela on la traite par le xyloi, puis par l'alcool absolu; on peut alors lui l'aire subir l'action des matières colorantes.

Kioiahquk. — Ce procédé a l'inconvénient de ne pouvoir être employé quand on doit traiter la coupe par un certain nombre du réactifs, qui' tels que les solutions alcalines, le picrocannin de Orth, etc., ont la 'propriété de dissoudre l'albumine.