RÉSISTANCE

La bactéridie non sporulée est tuée rapidement quand on l'expose à des températures supérieures à-{-50o; à 51°, le sang charbonneux est stérilisé en une demi-heure. Un abaissement de température môme considérable ne lue pas la bactéridie; elle peul résister une heure à une température de — 100°. Le manque d'oxygène, l'immersion dans l'oxygène comprimé tuent la bactéridie non sporulée.

La spore, forme de résistance de la bacléridic, possède toute la virulence de celle-ci. Les spores humides résistent fort longtemps à la température de 4- 70° et pendant cinq minutes à 85°. Lorsqu'elles sont desséchées, et particulièrement en présence d'un liquide albu-

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 241

mineux (sang, etc.), leur résistance augmente ; elles tolèrent alors des températures supérieures à 100°, le contact de l'alcool absolu, de l'oxygène comprimé, la privation complète d'oxygène, l'exposition au soleil (1), etc. La spore ne se développe pour donner naissance à une bactéridie qu'en présence d'oxygène libre.

Recherche de la bactéridie dans le sol. — Pasteur a utilisé la résistance des spores à la chaleur pour isoler la bactéridie de la terre des Champs maudits. On opérera comme il suit :

Prélever une petite quantité de terre, la broyer dans un mortier, puis la mettre en suspension dans de l'eau stérilisée ; il se produit immédiatement un précipité grossier, décanter avec soin le liquide surnageant qui ne contient plus que des particules très ténues, légères, et le laisser déposer dans un verre à pied stérilisé ; le liquide trouble s'éclaircit et il se forme un dépôt au fond du verre. On décante alors le liquide, on aspire le dépôt dans des pipettes que Ton porte, après scellement, pendant quinze à vingt minutes dans un bain-marie à 86°. Après le chauffage, on ensemence des plaques de gélatine, en boîtes de Pétri, avec le contenu des pipettes. Les plaques sont observées avec soin, on examine toutes les colonies suspectes, on les ensemence sur les divers milieux et on inocule au cobaye et à la souris les cultures obtenues.

Au cours de ces opérations, les microbes pyogènes sont détruits par le chauffage à 8à°, et les cultures sur plaques éliminent les espèces anaérobies, telles que le vibrion septique, dont la présence fausserait les résultats de la recherche. Dan? le procédé primitivement employé par Pasteur, le dépôt obtenu par lévigation était inoculé aussitôt après le chauffage, sans isolement des colonies, mais ce procédé est moins rigoureux.

En employant une méthode analogue à celle que nous venons de décrire Diatroptoff a isolé la bactéridie dans la vase du fond d'un puits.

BACTÉRIDIE ASPOROGÈNE.

Pasteur a vu que dans les vieilles cultures en gélatine la bactéridie perd parfois la propriété de former des spores.

Dans le bouillon ensemencé avec du sang charbonneux et mis à l'étuve à 42°,5, la bactéridie se développe, mais ne sporulepas : dans l'intérieur des bâtonnets on peut voir quelques granulations brillantes, ce sont les fausses spores de Chauveau qui n'ont aucune des propriétés de la spore. Les bactéridies asporulées ainsi obtenues, réensemencées dans un milieu porté à la température optima, ne tardent pas à donner de nouveau des spores. On peut obtenir une bactéridie définitivement asporulée, en employant un des procédés suivants :

A. Procédé de Roux à l'acide phénique {Procédé recommandé). —

(1) Arloing a montré que, dans les cultures, les spores résistent moins à faction de la lumière sola.re que les bacler.dies asporulées; on explique ce fait en disant que la lumière solaire ag.t plus énergiquement sur les bacilles jeunes issus des spores que «ir la bactéridie adulte. Besson. — Techn. microb., 2« édit. 16

242 LA TiACTÉRIDIE CHARBONNEUSE.

1° Répartir dans de nombreux (30 à 50) tubes à essais, du bouillon de veau peptonisé, légèrement alcalin, à raison de 10 centimètres cubes par tube.

2° Diviser ces tubes en plusieurs séries de 10 chacune. Dans chaque série, les tubes sont numérotés 1 , 2, 3. . . 10 ; à chaque tube, on ajoute une proportion d'eau phéniquée à 1 p. 100 (sans alcool), telle que :

Le tube n° 1 contienne 2/10 000 d'acide pliénique, soit 0«,20 de la solution. n° 2 — 4/10 000 — o«,40 —

n° 3 - 6/10 000 — — 0«!eo -

no 10 — 20/10 000 — — 2«,00 —

3° Les tubes sont bouchés à l'ouate et leur extrémité est scellée à la lampe au-dessus de l'ouate, pour empêcher l'évaporation de l'acide phénique, puis ils sont stérilisés à l'autoclave.

4° Après refroidissement, chaque tube est ouvert et ensemencé avec une goutte de sang charbonneux; on doit avoir soin de ne pas déposer de sang sur la paroi du tube, hors du bouillon.

5° Après l'ensemencement, les tubes sont munis d'un capuchon de caoutchouc et placés àl'étuveà 33°-37°.

6° Vers le dixième jour, on examine les cultures; un certain nombre de tubes n'ont fourni aucun développement : ce sont ceux où se trouvent les plus fortes doses d'acide phénique (tubes 7 à 10 par exemple) ; les premiers tubes (de 1 à 3, par exemple) contiennent des bactéridies et des spores ; enfin les tubes 3, 4, 5, 6 pourront renfermer des bactéridies à l'exclusion absolue des spores. Mais on n'obtient pas toujours des résultats satisfaisants, aussi est-il nécessaire d'opérer simultanément sur plusieurs séries de tubes.

Recherche des spobes dans les cultubes. — Pour vérifier si le contenu des tubes ne renferme plus de spores, on en aspire une petite quantité dans de très fines pipettes Pasteur, étranglées au-dessous du tampon d'ouate (fig. 51). On ferme à la lampe les deux effilures de la pipette, et on place les tubes scellés obtenus dans un bain-marie à 65°-70u pendant environ quinze minutes. Si la bactéridie n'est pas sporulée, elle est détruite par ce chauffage et les tubes de bouillon neuf ensemencés avec le contenu des pipettes restent stériles; ces tubes cultivent au contraire si la bactéridie est sporulée.

Ce procédé de préparation du charbon asporogène ne donne pas dans tous les cas des résultats satisfaisants : tantôt aucun des tubes ne contient de bactéridie asporogène, tantôt on obtient bien des bactéridies asporogènes, mais elles reprennent la faculté de donner des spores après quelques passages en bouillon à 33°-37°.

Surmont et Arnould ont montré que la faculté de devenir asporogènes varie beaucoup pour les bactéridies de diverses provenances : une bacté-

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

ridie venant de l'institut Pasteur devenait facilement asporogène entre les mains de ces expérimentateurs, tandis qu'ils échouaient quand ils s'adressaient à une bactéridie recueillie par eux dans un cas de charbon humain.

B. Procédé de Chamberland et Roux au bichromate. — Ce procédé, antérieur au précédent, donne des résultats inconstants; le bichromate est employé d'après les mêmes règles que l'acide phénique, mais en proportions différentes : la solution dans le bouillon à 1 p. 2 000 est celle qui convient le mieux.

C. Procédés divers. — Nous ne citerons que pour mémoire les procédés de Behring à l'acide rosolique et à l'acide chlorhydrique et celui de Phisalix basé sur l'emploi de la chaleur (cultures successives à 42°, 5). Ces méthodes donnent des résultats très incertains.