CHAPITRE XXI

LE BACILLE D'EBERTH ET LE BACTERIUM COU LEUR RECHERCHE DANS LES E VU\, LES FÈCES, ETC. ET LEUR DIAGNOSTIC

L'isolement du Bacille typhique dans les milieux où il se trouve mélangé à de nombreuses espèces microbiennes et particulièrement au Bacterium coli présente des difficultés que l'on peut ramener à quatre ordres de faits :

t° Sur la gélatine, à la température ordinaire, les colonies du Bacille typhique se développent lentement (quarante-huit heures environ) ; avant elles, poussent les microbes saprophytes qui liquéfient rapidement la plaque et arrêtent la recherche.

2° Quand on ensemence un mélange de Bacterium coli et de Bacille d'Eberth, le plus souvent le développement du Colibacille empêche celui du Bacille d'Eberth et ce dernier microbe passe inaperçu : il y a là une véritable action empêchante mise en évidence par Grimbert. Différentes espèces microbiennes jouissent dans les milieux artificiels de la même propriété empêchante vis-à-vis du Bacille d'Eberth (Besson).

3° Bemy, qui n'admet pas la réalité de l'écrasement du Bacille d'Eberth parle Colibacille, insiste sur la difficulté de déceler le Bacille d'Eberth dans un milieu où ces deux microbes sont mélangés; il montre que la vie en commun peut modifier profondément les propriétés des deux bacilles : le Bacille d'Eberth perdant parfois sa sensibilité vis-à-vis du sérum agglutinant, le Bacterium coli ses propriétés fermenlatives et indolformative.

4° La méthode des plaques de gélatine ordinaire ne permet d'ensemencer qu'une très petite quantité de l'eau suspecte : on conçoit dès lors que si le bacille se trouve dans l'eau en faible proportion, il puisse passer inaperçu.

Aussi les bactériologistes se sont-ils ingéniés à imaginer des procédés permettant de déceler sûrement la présence du Bacille

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typhique dans les eaux. Tous ces procédés s'appliquent également à la recherche du Bacterium coli. Nous passerons en revue les principaux.

Article 1. — RECHERCHE DU RACILLE D'ERERTH ET DU

BACTERIUM COLI.

§ PROCÉDÉS ANCIENS

Nous plaçons sous cette rubrique un certain nombre de procédés, utilisés jusqu'à ces dernières années, mais ne fournissant que des résultats aléatoires, impuissants à déceler le Bacille d'Eberth quand il se trouve mélangé au Colibacille et à peu près abandonnés aujourd'hui-

a. Procédé de Rodet. — Rodet a montré que le Bacterium coli et le Bacille typhique se développent rapidement à 45° alors que la plupart des autres bactéries ne cultivent plus à cette température, et il a basé sur ce fait un procédé de recherche de ces microbes; une certaine quantité (20 à 100 centimètres cubes) de l'eau suspecte est versée dans un mat ras contenant du bouillon de bœuf ordinaire stérilisé ; puis le matras est placé à l'étuve à 45°. Si le bouillon est trouble au bout de vingt à vingt-quatre heures, il y a de fortes présomptions pour que ce trouble relève de la présence du Bacterium coli ou du Bacille d'Eberth. Un examen delà culture et au besoin un isolement sur plaques de gélatine permettent de lever tous les doutes.

Ce procédé permet de découvrir le Bacille d'Eberth quand il n'est pas associé au Bacterium coli; mais dans les cas les plus fréquents, où le Bacille d'Eberth existeà l'état de mélange au Bacterium coli, l'isolement du premier de ces microbes est impossible.

b. Procédé de Chantemesse et Widai.. — Chantemesse et Widal montrent que le Bacterium coli et le Bacille d'Eberth se développent dans les milieux de culture additionnés de 1 p. 400 d'acide phénique, et appliquent ce principe à la recherche des deux microbes dans l'eau.

A des tubes contenant 20 centimètres cubes de gélatine ordinaire liquéfiée à une douce chaleur on ajoute 1 centimètre cube de solution phéniquée à 5 p. 100 et quelques gouttes de l'eau à analyser; puis on coule le contenu des tubes dans des boîtes de Pétri. Sur les plaques obtenues par ce procédé il se développe malheureusement un certain nombre de bactéries liquéfiantes qui entravent rapidement la recherche. Il est d'ailleurs nécessaire d'ensemencer pour chaque analyse un grand nombre de plaques, étant donnée la petite quantité d'eau utilisée pour chaque ensemencement; enfin ce procédé échoue à permettre l'isolement du Bacille d'Eberth quand il est mélangé au Bacterium coli.

c. Procédé de Vincent. — Vincent, en combinant les résultats des observations de Rodet d'une part, de Chantemesse et Widal d'autre part, a composé un procédé mixte, qui a longtemps été le procédé de choix.

Vincent pratique les ensemencements <l;ms du bouillon phéniquéà 1 p.l 000 et fait la culture à 41°, 5 ou 42°.

En pratique, on prépare six tubes contenant 10 centimètres cubes de bouillon ordinaire; au moment du besoin on ajouté à chacun d'eux 5 à 6 gouttes d'une solution phéniquée à 5 p. 100 et 1/2 à 1 centimètre cube de

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l'eau suspecte-- chaque tube est muni d'un capuchon de caoutchouc audessus du tampon d'ouate, pour éviter l'évaporation de l'acide phénique. Les tubes sont placés à l'étuve à 41°,5 ou 42°. S'il se produit un trouble vers la douzième-vingtième heure on réensemence le contenu des tubes troublés dans de nouveaux tubes de bouillon phéniqué que l'on place également à 41° 5 Ce second passage donne en général une culture pure de Bactenum coli quand l'eau contenait ce bacille; cependant il faut savoir que quelques saprophytes (Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, Bacillus luteus, Streptocoque blanc de l'eau, Proteus vidgaris, etc.) se développent dans ces conditions. On ne peut songer à se débarrasser de ces microbes par des passages successifs en milieux phéniqués : une fois accoutumés aux milieux phéniqués, ils s'y développent aussi bien que le Colibacille. - La présence d'un trouble à ondes soyeuses dans les tubes constitue un bon signe du Colibacille ou du Bacille typhique, mais il faudra toujours compléter la recherche par l'examen microscopique et au besoin par un isolement sur gélatine. Le microbe isolé sera soumis à toutes les épreuves que nous énumérerons plus loin.

Il faut savoir que dans le bouillon phéniqué le Bacterium coli et le Bacille d'Eberth se présentent souvent sous la forme de cocco-bacilles accouplés par deux et immobiles.

Le procédé de Vincent ne permet pas l'isolement du Bacille typhique quand il se trouve mélangé au Bacterium coli.

d. Procédé de Péré. — Le procédé de Péré n'est qu'une modification du précédent, modification dont le but est de permettre l'ensemencement de grandes quantités de l'eau à examiner.

On prépare un bouillon très fortement nutritif (viande 1 000, eau 1 000, peptone 50). Ce bouillon est réparti dans des fioles de Vivien à raison de 50 centimètres cubes par fiole. On stérilise à l'autoclave, puis, au contenu de chaque fiole on ajoute 3 centimètres cubes de solution phéniquée à 5 p. 100 et une quantité d'eau à analyser suffisante pour faire 150 centimètres cubes. On prépare ainsi 5 à 6 fioles qu'on placé à l'étuve à 41°. — Dès qu'un trouble se produit (quinzième-vingtième heure) on ensemence, avec le contenu desfioles troublées, des tubes de bouillon phéniqué à 1 p. 1 000 et l'on place ces tubes à l'étuve à 41°. On termine la recherche comme dans le procédé de Vincent.

e. Procédé de Pouchet et Bonjean. — Variante du procédé de Vincent. Dans des ballons contenant 100 centimètres cubes de bouillon stérilisé, on verse 150 centimètres cubes de l'eau à analyser et 5 centimètres cubes de solution phéniquée à 5 p. 100. On porte à l'étuve à 42°; si un trouble se produit, on fait trois passages en bouillon phéniqué à l p. 1 000a l'étuve à 42°, puis on ensemence en bouillon ordinaire. La culture en bouillon ordinaire, après huit jours de séjour à l'étuve à 3G°, est inoculée à un cobaye (0CC,3 p. 100 grammes d'animal); si l'animal succombe, on fait des cultures avec le sang du cœur, la pulpe des viscères, etc.