PROCÉDÉ D'ELSNER

Cette méthode permet de déceler le Bacille typhique dans les milieux (eaux, fèces, etc.) où il est associé au Bacterium coli; elle est basée sur ce fait que le Bacille typhique et le Bacterium coli se déve-

486 LE BACILLE D'EBBRTH ET LE KACTER1UM COLI.

loppent à l'exclusion do la plupart des autres microbes sur une gelée de pommes de terre additionnée d'iodure de potassium. On opérera de la façon suivante :

1° On prépare une série de tubes à essai contenant 19 centimètres cubes de macération de pomme de terre gélatinisée(Voy. p. 41) et on les stérilise àl'autoclave. D'un autre cotéon stérilise la solution suivante :

Eau distillée f>0 grammes.

Ioduro de potassium 10 —

2° Au moment du besoinonajoute à ebaque tube de gelée <k; pomme, de terre liquéfiée à douce chaleur 1 centimètre cube (20 gouttes) de la solution iodurée. On obtient ainsi une gélatine iodurée à I pj 00.

3° Chacun des tubes ainsi préparés est ensemencé avec quelques gouttes de l'eau suspecte; puis le contenu du tube est coulé dans une boîte de Pétri et abandonné à la solidification ; on doit préparer un grand nombre de boîtes, au moins six à huit, étant donnée la petite quantité d'eau qui sert à faire chaque ensemencement.

4° D'après Elsner, sur ces plaques le Bacterium coli donne à 20°, dès le deuxième jour, des colonies arrondies opaques et légèrement brunâtres; les colonies du Bacille d'Eberth au contraire apparaissent seulement vers le quatrième jour et sont plus petites, transparentes, à peine visibles ; les autres bactéries ne se développent pas.

En réalité, diverses bactéries, et même des liquéfiantes, se développent sur les plaques, et les caractères des colonies du Bacille d'Eberth et du Bacterium coli ne sont pas aussi différenciés que l'a dit Elsner ; il faut bien savoir que le milieu d'Elsner ne possède aucune propriété spécifique qui lui permettrait d'assurer le développement du Bacterium coli et du Bacille d'Eberth à l'exclusion des autres microbes; son seul avantage est de permettre le développement du Bacille d'Eberth à côté de celui du Bacterium coli.

On devra par conséquent étudier avec soin toutes les colonies non liquéfiantes et non chromogènes qui se développent sur les plaques ; ces colonies seront prélevées avec une ose de platine forte et reportées dans des tubes de bouillon à 37°. Au bout de vingt à vingtquatre heures, l'examen des cultures en bouillon renseignera sur la morphologie des microbes isolés; on ne retiendra, pour les soumettre aux épreuves que nous énumérerons plus loin, que les cultures produites par de courts bacilles à bouts arrondis.

Si une de ces cultures suspectes présentait une impureté, on pratiquerait un nouvel isolement sur gelée d'Elsner: une ose de la culture serait portée dans un premier tube, dont une goutt e servirait à. ensemencer un t ube n° 2 dont 3 gouttes serviraient à ensemencer un tube n° 3 (Voy. la méthode générale, p. 84).

RECHERCHE DU BACILLE D'EBERTII ET DU BACTERIUM COLI. 457

La recherche du Bacterium coli et du Bacille typhique dans les matières fécales serait pratiquée d'une manière analogue : un tube de gélatine iodurée est ensemencé avec une trace de matières fécales; après agitation une goutte du contenu de ce tube sert à ensemencer un tube n° 2, dans lequel on prélève enfin 2 ou 3 gouttes pour ensemencer un tube n° 3. Sur les plaques préparées avec le contenu de chacun de ces tubes on étudie les diverses espèces de colonies non liquéfiantes comme il a été dit plus haut.

Remarque. — La méthode d'EIsner, telle qu'elle vient d'être exposée, donne lieu à de fréquents mécomptes, tantôt les plaques sont liquéfiées rapidement et la recherche est interrompue, tantôt on échoue à retrouver du Bacille d'Eberth que l'on a introduit, à litre de contrôle, dans une eau, un mélange de cultures, etc. Aussi de nombreux expérimentateurs ont-ils cherché à modifier et à améliorer le procédé.

PROCÉDÉ DE GRIMBER T.

Grimbert attribue les insuccès de la méthode d'Elsner à l'inconstance du milieu employé (variation de composition chimique de la pomme de terre) et à l'indétermination de son .degré d'acidité. L'addition d'iodure de potassium n'est d'ailleurs pas indispensable. A la condition de maintenir une acidité telle que 10 centimètres cubes du milieu soient neutralisés par 4 à o centimètres cubes d'eau de chaux, on peut utiliser simplement la gélatine ordinaire au bouillon de viande. Grimbert préfère employer un milieu de coinposition chimique constante, préparé ainsi qu'il suit :

Dissoudre dans 1000 centimètres cubes d'eau :

Maltose 1 gramme.

Amidon soluble 2 grammes.

Asparagine

Phosphate neutre do potasse

Sulfate de potasse 2 grammes.

Sulfate de magnésie 2 —

Bimalate d'ammoniaque... 2 —

Carbonate de magnésie. .. . 1 gramme.

Dans le mélange dissoudre 15 p. 100 de gélatine. Clarifier au blanc d'œuf, chauffer à 115°, filtrer. Essayer la réaction.

Pour vérifier la réaction de la gélatine, en prendre 10 centimètres cubes, les verser dans 50 centimètres cubes d'eau distillée chaude, ajouter quelques gouttes de solution alcoolique de phénolphtaléine, puis, avec la burette de Mohr, faire tomber dans le mèkage de l'eau de chaux jusqu'à teinte rose persistante. Si la neutralisation exige plus de 5 centimètres cubes d'eau de chaux, on ajoute à la gélatine de petites quantités de solution normale de soude jusqu'à ce que la neutralisation de 10 centimètres cubes soit obtenue avec 5 centimètres cubes d'eau de chaux. Ce degré d'acidité correspond à un millième d'acide sulfurique.

Au moment du besoin le milieu peut être additionné de I p. 100 d'iodure ou de bromure de potassium.

*68 LE BACILLE D'ERERTII ET LE RACTERIUM COLI.

Le milieu de Grimbert s'emploie comme celui d'Elsner; l'apparition des colonies y ost plus lente, les premières ne se montrent pas avant le troisième jour. Ce procédé n'a guère d'avantages sur le procédé primitif d'Elsner.