CHAPITRE XXIII

LE BACILLE DE L'INFLUENZA

Le Bacille de l'influenza a été découvert par Pfeiffer ; les travaux de Pfeiffer ont été confirmés par ceux de Weichselbaum, Iluber, Borchardt, Klein, Baumler, etc.

L'influenza est une maladie exclusivement humaine ; le bacille spécifique existe dans les crachats, le mucus nasal, les voies respiratoires. Dans le poumon il peut déterminer la production de foyers de broncho-pneumonie présentant des caractères histologiques spéciaux. Le bacille persiste dans les crachats pendant des semaines après la guérison et plus longtemps encore au niveau des lésions chroniques (tuberculeuses, etc.) du poumon. Les symptômes de la maladie relèvent d'une intoxication plus que d'une infection généralisée. Pfeiffer n'a jamais pu déceler le bacille dans le sang des malades; Meunier l'a trouvé, pendant la vie, quatre fois sur huit, dans le sang des grippés ; Bosenthal enfin dit que dans tous les cas à Bacille de Pfeiffer terminés par la mort il a, à l'autopsie, trouvé le microbe dans le sang du cœur, en grande abondance (1).

Les expérimentateurs ont parfois échoué à déceler le Bacille de Pfeiffer dans l'influenza. Pfeiffer ne l'a pas trouvé dans la grippe de 1899; nousmême dans une épidémie très bruyante de grippe, à Rennes, en 1897-1898, ne l'avons décelé quedans 80p. lOOdescas observés ; Achalme,Rosen thaï, etc., ont fait des constatations analogues. De là à nier la spécificité du Bacille de Pfeiffer, il nous semble qu'il y a quelque témérité. C'est pourtant à cette conclusion qu'arrive Rosen thaï, écrivant que « le coccobacille hémophile (ou de Pfeiffer) est un microbe ordinaire de la flore pathologique du poumon, il n'est pas le bacille de la grippe ». Ce que nous avons dit de la persistance du Bacille de Pfeiffer dans les lésions pulmonaires chroniques explique, sans qu'il soit besoin de nier sa spécificité, qu'on puisse le rencontrer dans la flore des cavernes, des bronchites tuberculeuses, etc. ; d'ailleurs nous ne répugnons pas à admettre qu'il soit susceptible, en

(1) Le microbe que Canon et Bruschettiui ont rencontré dans le sang des grippés diffère absolument du Bacille de Pfeiffer; il est probable que Canon et Bruschettini se sont trouvés en présenco d'une bactérie existant sur la peau et qui a souillé le sang au moment du prélèvement ; ce microbe est un petit streptocoque poussant très bien sur les milieux ordinaires de culture et pathogène pour le lapin.

Besson. — Techn. microb., 2e édit.

LE BACILLE DE L'INFLUENZA

certaines circonstances, de vivre d'une vie saprophylique dans l'organisme humain : c'est ce que l'on observe chaque jour pour le Pneumocoque, le Bacille de Lôfller, peut-être le Bacille d'Eherth, dont on ne songe pas cependant à mettre en doute la spécificité.

Dans l'influenza, et spécialement au niveau des lésions pulmonaires, le Bacille de PfeifTer est fréquemment associé à d'autres germes pathogènes, particulièrement au Pneumocoque et au Streptocoque. Ce sont en général ces associations, sur lesquelles nous aurons à revenir, qui jugent de la gravité de la maladie.

Article I. — MALADIE EXPÉRIMENTALE.

De ses recherches Pfeiffer a tiré cette conclusion que les espèces animales, sauf le singe, sont réfractaires au Bacille de l'influenza. 11 y a peu à ajouter à ces données.

Chez le singe, l'inoculation d'une culture pure ou de crachats de grippés, dans la trachée, le poumon ou les fosses nasales, détermine une maladie analogue à l'influenza humaine et se terminant d'ordinaire par la guérison ; une fois la mort est survenue avec des lésions pulmonaires analogues à celles de l'homme ; le bacille se trouvait en petite quantité dans les sécrétions bronchiques, le mucus pulmonaire et le sang.

Le rat, le cobaye, le porc, le chat, le chien, le pigeon, sont entièrement réfractaires.

La souris succombe à l'injection intrapéritonéale de culture pure; il en est de même du lapin qui succombe parfois à l'inoculation de fortes doses de cultures pures (deux à trois cultures sur tube de gélose-sang, délayées dans du bouillon et injectées dans la veine auriculaire) ; mais chez ces animaux le bacille ne pullule pas et l'animal meurt de l'intoxication causée par les produits solubles injectés en même temps que le bacille : le fait que les cultures tuées par le chloroforme amènent également la mort confirme cette manière de voir. Pfeiffer n'a jamais obtenu chez les animaux autres que le singe « une multiplication des bacilles inoculés, une véritable infection (1) ».

Cependant Meunier ayant inoculé sept lapins avec des cultures, a obtenu deux fois la mort avec pullulation du bacille dans le sang (Exp. I) et dans les lésions broncho-pulmonaires et rénales (Exp. III}. Cantani est arrivé à tuer le lapin avec de petites doses de cultures injectées dans la substance cérébrale.

(i) Le microbe de Canon et de Brusclieltini est pathogène pour le lapin et augmente de virulence par les passages en série chez cet animal, mais, comme nous l'avons dit, il n'a rien de commun avec le Bacille de Pfeiffer.

Rosenthal, inoculant dans le poumon du lapin un mélange de cultures de Bacille de Pfeifl'er-et de Staphylocoque doré non virulent, a vu l'animal mourir « de congestion pulmonaire, en général avec septicémie ... Mais l'auteur ne nous apprend rien sur la nature de cette septicémie et sur la recherche des microbes chez ses animaux; ses expériences méritent d'être développées et confirmées.

RECHERCHE DU BACILLE DE L'INFLUENZA

Le Bacille de la grippe existe dans les crachats et le mucus nasal ; la recherche portera de préférence sur les crachats ; Pfeiffer insiste sur leurs caractères macroscopiques; ils sont d'une couleur jaune verdâtre, épais et purulents, ordinairement concrétés en petites masses compactes. Le bacille siège entre les cellules de pus et à l'intérieur de celles-ci. La recherche sera faite par l'examen microscopique et par les cultures (Voy. plus loin).

Article II. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.

§ 1er. ASPECT MICROSCOPIQUE.

Le Bacille de Pfeiffer se présente sous l'aspect d'un très petit bâtonnet et même d'un coccobacille : c'est une des plus petites espèces microbiennes connues. 11 est isolé ou réuni en chaînettes de deux ou quatre éléments; dans les crachats on le trouve en véritables amas ; il siège quelquefois à l'intérieur des leucocytes, mais jamais dans leurs noyaux. Dans les cultures il est un peu plus volumineux que dans les crachats ; quelquefois même il y prend la forme de minces bâtonnets à bouts arrondis. Klein insiste sur la fréquence dans les cultures de longs filaments streptobacillaires et de bacilles à vacuole centrale ; il a observé également des formes oVinvolution : formes allongées, sinueuses, simulant parfois l'enchevêtrement, filaments recourbés, bacilles renflés, ovalaires ou en massue.

Le Bacille de l'influenza est immobile.

Coloration. — Le Bacille de Pfeiffer se colore assez difficilement par les couleurs basiques et ne prend pas le Gram. Le procédé de choix pour le colorer consiste à employer la fuchsine de Ziehl diluée et il est nécessaire de laisser agir le colorant pendant une dizaine de minutes. On peut utiliser de la même manière Je bleu de méthylène phéniqué ou le violet de Nastikow ; la coloration s'opère plus vite à chaud.

a. Crachats. Cultures. — Prélever une petite parcelle au sein d'un crachat et en préparer des lamelles qui seront colorées pendant dix minutes avec le Ziehl dilué. Opérer de même pour les lamelles préparées avec les cultures.

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b. Coupes. — Les coupes passant par les foyers de broncho-pneumonie grippale contiennent de nombreux bacilles ; Pfeiffer conseille de les traiter de la façon suivante :

Fixer à l'alcool, monter à la celloïdine (nous préférons la paraffine);

Fig. 210. — Bacille de la grippe. — Cra- Fig. 211. — Bacille de la grippe. — Culture chats. — Fuchsine de Ziehl diluée (Reich.; sur gélose-sang. — Fuchsine de Ziehl di- Obj. 1/12 imm.; Oc. IV). luée (Reich. ; Obj. 1/12 imm.; Oc. IV).

colorer les coupes pendant une demi-heure dans la fuchsine de Ziehl diluée ; au sortir du bain colorant, les traiter pendant quelques secondes par de l'alcool absolu très faiblement acidulé avec de l'acide acétique. Dès que la coloration rouge foncé des coupes a fait place à une teinte rose violet uniforme, porter celles-ci dans l'essence de girofle et le xylol, puis monter dans le baume. Sur ces préparations les bactéries sont fortement colorées en rouge sur un fond faiblement rose.

Dans notre édition de 1897, après avoir décrit le Pseudohifluenzabaci/Ii/s de Pfeiffer, différencié par sa taille un peu plus grande et sa propriété de donner des filaments dans des cultures, nous nous prononcions pour son identité avec le Bacille de l'influenza. Cette identité est aujourd'hui admise par tous les bactériologues et par Pfeiffer lui-même ; il faut également confondre les deux formes A et B décrites par Grassberger. Enfin, Elmassian a étudié un bacille ayant tous les caractères morphologiques de celui de Pfeiffer, mais poussant bien sur agar-ascite; nous accepterions volontiers de confondre les Bacilles de Pfeiffer et d'Elmassian si ce dernier ne se montrait très pathogène pour le cobaye : l'injection de 2 à 4 centimètres cubes de culture en bouillon-sérum de quarante-huit heures tue le cobaye avec une péritonite généralisée et le microbe pullule dans les exsudats péritonéal, péricardique et dans le sang du cœur.

Ensemencement. — Choisir un crachat hien compact, le laver plusieurs fois à l'eau distillée stérile (méthode de Kitasato ; Voy. p. 192); prélever purement une petite parcelle au centre du crachat lavé, l'émulsionner dans un peu de bouillon stérile et avec l'émulsion ensemencer en surface des plaques de gélose au sang préparées comme nous le dirons plus loin.

Conditions de culture. — Le Bacille de Pfeiffer ne cultive pas 'sur les milieux ordinaires; pour se développer il exige la présence d'hémoglobine dans les milieux nutritifs; exclusivement aérobie, il se développe de 4- 26° à 42°, la température optima étant 37°.

Quand on ensemence sur de la gélose ordinaire une émulsion de crachats préparée comme nous venons de le dire, on obtient d'ordinaire une culture grêle, mais les réenseinenecments de cette culture sur gélose restent stériles; le crachat avait apporté en petite quantité les matières nécessaires au développement de la première culture; pour les ensemencements successifs il faut employer la gélose ensanglantée. 11 est important que la gélose employée soit neutre ou très légèrement alcaline, une faible exagération de l'alcalinité compromettant le résultat des cultures.

Gélose au sang. — La gélose addionnée de sang constitue le milieu le plus favorable à la culture du Bacille de Pfeiffer. Pour la préparer on coule delà gélose liquéfiée dans une boîte de Pétri, et, après refroidissement, on dépose à la surface du milieu nutritif une grosse goutte de sang que l'on étale en couche aussi mince que possible; on peut encore étaler le sang sur la surface inclinée de la gélose en tube à culture. Les sangs, humain, de lapin, de pigeon, recueillis aseptiquement donnent les meilleurs résultats. La gélosesang de Bezançon (Voy. p. 58) constitue également un milieu favorable.

L'ensemencement en surface d'une émulsion de crachats donne lieu, dès la vingt-quatrième heure à 37°, à un développement abondant de petites colonies très fines ne pouvant guère êtres vues qu'à la loupe, jamais confluentes et ayant l'aspect de gouttellettes transparentes. De très rares colonies peuvent atteindre les dimensions d'une tète d'épingle. Quelquefois le développement est plus tardif et ne commence que vers le deuxième jour.

Pfeiffer, en réensemençant ces colonies sur des tubes de gélose inclinée recouverte d'une mince couche de sang, a pu obtenir pendant plusieurs mois des passages successifs.

Gélose à l'hémoglobine. - Pfeiffer ayant démontré que, dans le sang, c'est l'hémoglobine qui favorise le développement du Bacille

tl() LE BACILLE DR L'INFLUENZA.

de l'inlluenza, lluber a proposé de remplacer dans les cultures le sang par de l'hémoglobine; il a obtenu ainsi des cultures analogues à celle que nous venons de décrire.

Huber utilise l'hémoglobine commerciale du Dr Hommels; ce liquide, de couleur rouge foncé, est additionné de potasse jusqu'à réaction fortement alcaline (pour éviter la coagulation pendant le chauffage), puis stérilisé à 100°. Le produit obtenu est mélangé à de la gélose stérile liquéfiée et refroidie à 50° ou 60°, en quantité suffisante pour que celle-ci prenne une teinte rouge-groseille ; on incline les tubes et on les laisse se solidifier. Ce procédé donne en général de mauvais résultats; il en est de même de la gélose additionnée de jaune d'œuf, de Nastikow.

Milieux liquides. — Dans le bouillon additionné de sang de pigeon , le Bacille de la grippe se développe en produisant de légers flocons blanchâtres peu caractéristiques.

Le développement est plus abondant dans le sérum coloré par l'hémoglobine, obtenu en laissant au contact du caillot le sérum du lapin; ce sérum dissout de l'hémoglobine et constitue alors un excellent milieu (Rosenthal).

Le Bacille de Pfeiffer ne cultive pas sur gélose glycérinée ; les cultures décrites par Kitasato, celles de Bruschettini et de Canon, n'ont rien de commun avec le Bacille de l'influenza.

Article 111. - PROPRIÉTÉS RIOLOG1QUES.

Le Bacille de l'influenza est très sensible à l'action de la chaleur et de la dessiccation. En milieu humide, dans les crachats préservés de la dessiccation, par exemple, il peut garder son activité pendant quatorze jours; au contraire, des crachats ensemencés après une dessiccation de trente-six à quarante heures à la température ordinaire ne donnent pas de culture.

Sur la gélose au sang le bacille vit de sept à douze jours, et trentehuit à quarante jours, d'après lluber, sur la gélose à l'hémoglobine. La dessiccation tue les cultures en deux heures à 37°, et en vingtquatre heures à la température ordinaire. En repiquant les cultures sur gélose-sang tous les quatre ou cinq jours, en peut conserver le bacille vivant pendant plusieurs mois. En sac de collodion, dans le péritoine du lapin, Dujardin-Beaumetz a pu conserver le microbe vivant pendant près de deux mois.

Agglutination. — Le Bacille de Pfeiffer n'est pas agglutiné par

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

Mi-

le sérum des malades atteints d'influenza et présentant le bacille dans les crachats (Meunier).