PROCÉDÉS A PPLICA BL ES A UX F PO T TIS
Procédé de Ziehl-Nelsen.
Procédé recommandé.
Principe. — Étant donné un frottis coloré par la fuchsine
phéniquée, si on le traite par un acide minéral dilué, le fond et tous les microbes, sauf celui de la tuberculose, se décolorent, le Bacille tuberculeux reste coloré en rouge ; si on fait alors agir sur la préparation une solution aqueuse de bleu de méthylène, le fond et les bacilles incolores se teintent en bleu, le Bacille tuberculeux restant rouge.
Opération. — 1° Sur la lamelle séchée et fixée comme à l'ordinaire, tenue par un de ses angles avec la pince de Cornet, on dépose une grosse goutte de fuchsine de Ziehl. On porte la lamelle sur une petite flamme (veilleuse du bec Bunsen), et on chauffe très douce-
Fi
226. — Bacille tuberculeux dans les crachats. Méthode de Ziehl, double coloration (Rcich. ; Obj. 1/12 imm. ; Oc. II).
dernier par la virulence et les caractères des cultures. Le fait que la plupart de ces bacilles, inoculés au cobaye, donnent des lésions locales, nettement tuberculeuses, mais sans tendance à la généralisation, ne permet pas, .jusqu'à plus ample iurormé, de les rejeter catégoriquement du cadre des Bacilles tuberculeux.
ment, jusqu'à production de vapeurs, pendant environ deux minutes, en évitant d'atteindre l'ébullition et en veillant à ce que la solution colorante ne se dessèche pas sur la lamelle.
2° Rejeter la solution colorante et la remplacer par quelques gouttes d'acide azotique au tiers (eau distillée, 2 volumes; acide azotique pur, 1 volume) ou d'acide sulfurique au quart (eau distillée, 3 volumes; acide sulfurique pur, 1 volume). Laisser en contact quelques secondes; la préparation devient jaunâtre.
3° Laver alors à grande eau, une légère teinte rose reparaît. La lamelle doit être colorée en rose pâle ; si la décoloration n'était pas suffisante, on ferait alors agir de nouveau la solution acide.
4° Après le lavage à l'eau, verser sur la préparation quelques gouttes d'alcool absolu, pour achever la décoloration ; après action de l'alcool, la teinte rose doit être faible, à peine visible.
Ce temps permet de pousser très loin la décoloration, sans avoir à redouter l'action trop énergique de l'acide qui, à la longue, décolorerait même les Bacilles tuberculeux ; de plus, l'action de l'alcool permet d'éliminer le Bacille du smegma qui se décolore dans les mêmes conditions.
5° Laver à grande eau, puis déposer sur la préparation un peu de solution aqueuse de bleu de méthylène; laisser quelques instants en contact.
6° Laver à l'eau ; sécher ; monter dans le baume.
Remarque. — Quand on fait simplement la recherche du Bacille tuberculeux, il y a grand avantage à ne pas recolorer le fond après l'action de l'alcool : les bacilles apparaissant en rouge foncé sur le fond incolore ou à peine rose sont beaucoup plus visibles.
On arrête l'opération au temps 4 inclus; après lavage, la préparation est examinée dans l'eau ; si, après examen, on la juge bonne Fig. S27. -Bacille tuberculeux dans les crachats a conserver, on peut la soumettre - Méthode de Ziehl ■ simple coloration (Reich • à l'action du bleu de méthylène et Obj. 1/18 imm. ; Oc. II). terminer comme il est dit plus haut.
Cette simplification est surtout utile quand les bacilles sont peu nombreux dans la préparation; les débutants tireront un grand profit de son emploa; en tous cas, elle rend la recherche plus rapide
LE fiÀCÏLLE DE LA TUBERCULOSE.
Procédé de Gabbé.
Le procédé de Gabbé n'est qu'une modification de celui de Ziehl, mais est moins sûr et plus délicat à exécuter que ce dernier.
1° Colorer à la fuchsine phéniquée comme plus haut.
2» Opérer à la fois la décoloration et la recoloration du fond en plongeant la lamelle pendant une minute dans la solution suivante :
. Bleu de méthylène 2 grammes.
Acide sulfuriquc au quart 100 centimètres cubes.
3° Laver, sécher, monter.
Les procédés de Stocquart et de Pithion et G. Roux (de Lyon) sont des modifications sans intérêt du procédé de Gabbé.
Procédé d'Ehrlich.
1° Colorer la lamelle à chaud pendant cinq minutes avec le violet aniliné (p. 140).
Pour cela on dépose une goutte de matière colorante sur la lamelle et on chauffe sur la veilleuse à gaz; on peut aussi plonger la lamelle dans une petite capsule contenant la solution et chauffer jusqu'à production de vapeurs.
2° Décolorer pendant quelques secondes à l'acide nitrique au tiers. 3° Laver; achever la décoloration à l'alcool absolu. 4° Colorer pendant quelques instants à froid dans une solution aqueuse saturée de vésuvine.
'6° Laver, sécher, monter.
Les Bacilles tuberculeux sont colorés en violet, le fond est teinté en brun par la vésuvine.
Procédé de Fraenkel.
l°Colorerles lamelles à chaud pendant cinq minutesavec lafuchsine anilinée (préparée comme le violet aniliné en remplaçant la solution alcoolique de violet de gentiane par la même solution de fuchsine).
2° Au sortir de la fuchsine anilinée, placer les lamelles pendant une minute dans la solution suivante :
Alcool à 90" «*0 centimètres cubes.
Eau d'aniline 30
Acide azotique pur 20
Solution alcoolique saturée de blou de méthylène. Q. S. pour obtenir une teiule
bleu intense.
3° Laver à l'eau distillée; sécher et monter.
CARACTÈRES i&^^^^sT Y QF L.E€t>S.
Procédé d'Herman.
Préparer les solutions suivantes :
, Krystall violet 1 gramme
A i Alcool à 90° 30 centimètres cubes.
( Carbonate d'ammoniaque 1 gramme.
j Eau distillée 100 centimètres cubes.
' Au moment du besoin, verser dans une petite capsule quelques centimètres cubes de solution B, y ajouter de la solution A en quantité suffisante pour qu'une goutte du mélange déposée sur du papier à filtrer y laisse une teinte très foncée.
1° Chauffer le bain colorant jusqu'à ébullition commençante et y plonger les lamelles pendant une minute.
2° Porter les lamelles pendant quatre à cinq secondes dans une solution d'acide nitrique au dixième.
3° Laver à l'alcool absolu pour achever la décoloration.
4° Porter les lamelles pendant trente secondes dans la solution suivante :
Éosine 1 gramme.
Alcool à 60» 100 centimètres cubes,
5° Laver très rapidement à l'alcool; sécher, monter. Les Bacilles tuberculeux sont colorés en violet; le fond est teinté par leosine.
Procédé de Lustgarten modifié.
En modifiant légèrement la méthode indiquée par Lustgarten pour la coloration du prétendu Bacille de la syphilis, Sabouraud a obtenu un procédé qu'il déclare être d'une extrême sensibilité pour la recherche du Bacille tuberculeux. On opère comme il suit :
lo Colorer la lamelle à froid pendant une à deux heures, ou à 50° pendant quinze minutes avec le liquide de Ziehl.
2° Faire agir sur la lamelle pendant une à trois secondes une solution de permanganate de potasse à 1,5 p. 100.
3° Plonger immédiatement la lamelle dans une solution aqueuse fraîche et saturée d'acide sulfureux, pendant quelques secondes, jusqu'à décoloration.
On obtient aisément la solution d'acide sulfureux, au moment du besoin, en faisant barboter dans l'eau distillée le gaz qui se dégage d'un siphon d'acide sulfureux liquéfié, tel qu'on en trouve dans le commerce.
4° Laver à l'eau, puis colorer le fond pendant une à trois minutes avec la solution aqueuse de bleu de méthylène. 5° Laver à l'eau; sécher, monter dans le baume.
LE HACILLE DE LA TUBERCULOSE
Procédé de Koch.
Ce procédé, le premier employé pour la recherche du Bacille tuberculeux, a surtout un intérêt historique.
1° Placer les lamelles pendant un jour à la température ordinaire, ou pendant quelques heures à 45° ou 50° dans le bain suivant :
Solution alcoolique saturée de bleu de méthylène.. 1 centimètre cube.
Solution aqueuse de potasse à 10 p. 100 2 centimètres cubes.
Eau distillée 200 —
2° Plonger les lamelles dans une solution aqueuse saturée de vésuvine; au bout d'un quart d'heure environ, une teinte brune se substitue à la coloration bleue primitive, sauf en ce qui concerne les Bacilles tuberculeux qui conservent leur teinte bleue.
