CHAPITRE V

ISOLEMENT DES GERMES

L'obtention d'une culture pure est la première condition des recherches bactériologiques : pour étudier la morphologie et la biologie d'un microbe, il faut commencer par l'isoler des autres germes, des impuretés, auxquels il peut se trouver mélangé.

Étant données les petites dimensions des microbes, on ne peut songer à prélever isolément un de ces êtres pour le reporter dans un milieu de culture, il faut donc recourir à des procédés plus compliqués. Les méthodes d'isolement employées en bactériologie sont nombreuses; pour la commodité de l'étude, on peut les ramener à deux groupes. Les premières sont d'ordre purement mécanique, elles comportent la dilution et la dissémination ; les secondes utilisent les propriétés biologiques du microbe qu'on se propose d'isoler.

Les procédés du premier groupe conviendront pour isoler chacune des espèces bactériennes que contient un produit donné; les procédés biologiques, au contraire, s'appliquent spécialement à la recherche de tel ou tel microbe que l'on présume exister dans le produit mis en expérience et dont on connaît à l'avance les propriétés capitales.

Avant tout, quand on se propose de pratiquer un isolement, il faut distinguer les microbes aérobies des anaérobics stricts; suivant que l'on se propose d'obtenir les bactéries du premier ou du second groupe, on fera les cultures en présence ou à l'abri de l'air. Dans les cultures à l'abri de l'air on isolera les différents microbes anaérobies par les procédés que nous étudierons plus loin. Pour le moment nous nous occuperons uniquement de la séparation des microbes aérobies.

Bksson. — Techn. microb., ic édit.

ISOLEMENT DES GEKMES.

Article I. PROCÉDÉS MÉCANIQUES.

S 1 'r. — DILUTION DANS LES LIQUIDES.

Ce procédé, imaginé par Lister, appliquépar Nœgeli et par Miqucl, estpeu employé aujourd'hui.

Soit à isoler les microbes contenus dans une goutte d'eau. Portons cette goutte d'eau dans un tube contenant 10 centimètres cubes de bouillon stérile (tube A) et mélangeons par agitation. Les germes que renfermait la goutte d'eau se trouvent dilués dans Les 10 centimètres de bouillon; un centimètre cube correspondant à 20 gouttes, chaque goutte de bouillon contiendra 20 X 10, c'est-àdire 200 fois moins de germes que la goutte d'eau mise en analyse. Reportons maintenant une goutte du mélange (tube A) dans un nouveau tube de bouillon stérile et répétons cette opération avec un certain nombre de tubes (B, B', B", etc.). Si notre goutte d'eau

contenait 200 germes, chaque goutte du tube A contenait -^j

= 1 germe; ce microbe unique se développera dans chacun des tubes B, B', B", etc., et donnera une culture pure. La goutte d'eau ne contient-elle que 50 germes, un tube sur quatre donnera une culture; la goutte d'eau renferme-t-elle un plus grand nombre de germes, il sera nécessaire de la diluer davantage de façon à arriver à un mélange dont une goutte contienne au plus un germe, on portera par exemple 10 gouttes du tube A dans un tube de bouillon tl avec une goutte duquel on pratiquera une série d'ensemencements G, G , C , etc.

Ce procédé d'isolement est très rigoureux, mais il a l'inconvénient d'être long et pénible, aussi lui préfère-t-on d'ordinaire la méthode suivante.