VIS , CULTURE DES MICROBES ANAÉROBIES

Sans insister sur la manœuvre de la pompe à mercure, nous rappellerons les points capitaux suivants :

1° Avoir soin de s'assurer avant chaque opération que l'appareil fonctionne bien, que les robinets ne perdent pas ; graisser légèrement ceux-ci au besoin.

2° Relier le récipient à culture à la branche B delà pompe; faire le vide jusqu'à ce que la différence entre les niveaux du mercure dans les deux branches du manomètre soit inappréciable.

3° A ce moment, la branche A étant reliée à l'appareil à hydrogène, ouvrir doucement le robinet R qui la commande, laisser l'hydrogène pénétrer lentement dans le récipient jusqu'à ce que le mercure du manomètre soit revenu à sa position première.

4° Intercepter alors la communication entre la pompe et l'appareil à hydrogène (robinet R). — Faire de nouveau le vide. — Recommencer deux ou trois fois l'opération.

5° Sceller à la lampe, sous le. vide, l'orifice de l'appareil à culture.

B. Trompe à eau. — En raison de la modicité de son prix el de la simplicité de son fonctionnement, cet appareil est le plus habituellement utilisé. Il ne donne qu'un vide approximatif et nécessite l'emploi du lavage. La trompe, métallique de préférence (modèle d'Alvergniat), doit être munie d'une rampe en cuivre portanl un manomètre et se divisant en T ainsi que l'indique la ligure 69.

Fig. GO. — Disposition d'une trompe à eau.

Le fonctionnement de la trompe exige une pression d'eau d'environ deux atmosphères. Pour faire le vide :

1° Relier, au moyen d'un tube de caoutchouc à parois épaisses, dit tube à vide, le récipient à culture au robinet R' et l'appareil à hydrogène au robinet R'. Les robinets R et R' sont fermés. Le cobinet R* reste ouvert pendant toute la durée de l'opération.

2° Ouvrir le robinet de la conduite d'eau E ; puis ouvrir progressivement Ri Suivre la marche de l'aiguille du manomètre.

3° Quand le vide a été poussé aussi loin que possible, fermer R et ouvrir R' progressivement : l'hydrogène pénètre dans le récipient.

4° Le manomètre étant retombé au zéro, fermer R', ouvrir de nouveau R, le vide se produit une seconde fois dans l'appareil.

d° Après avoir pratiqué ainsi deux à trois lavages successifs on scelle au chalumeau, sous le vide, le col du récipient.

On peut parfois se dispenser des lavages par l'hydrogène; dans ce cas on aide au déplacement de l'oxygène contenu dans le récipient en portant le liquide à l'ébullition, ce qu'on obtient facilement en élevant très légèrement la température (30° à 35°), soit en saisissant le vase de culture à pleine main, soit par immersion dans de l'eau tiède ou encore en léchant les parois du récipienl avec une pel ite flamme.

Remarque. — Quand on se sert de la trompe à eau, toutes les fois que l'on interrompt une opération on doit fermer le robinet R qui supprime la communication entre la trompe et le récipient, avant de suspendre le cours de l'eau dans la trompe. Si l'on ne prenait pas cette précaution, le vide existant dans l'appareil provoquerait l'irruption brusque de l'eau dans le récipient.

Cette irruption de l'eau dans le récipient privé d'air se produirait encore si, pour une cause quelconque, la pression venait à baisser subitement dans la conduite d'eau pendant l'opération.; aussi, doit-on toujours interposer entre la trompe et le récipient à culture un flacon de 2à3 litres de capacité, disposé comme l'indique la ligure 70. Si une projection se produit, l'eau est arrêtée dans ce flacon et ne souille pas la culture.

Fig. 70. — Flacon de s&rolé pour la trompe à eau.