CULTURE DES MICROBES &NAÉROBIES
soude duime le sulfo-indigonate do sonde qui, en présence d'un excès d'alculi, est facilement décoloré par les agents réducteurs. (>n réduit d ordinaire ce produit par Vhydrosul/ile de soude obtenu en versant sur de la poudre de zinc une solution concentrée de bisulfite de soude B&tarée d'anhydride sulfureux. L'hydrosulfile de soude est un réducteur énergique; il fixe l'oxygène de l'air eu se transformant en bisulfite et décolore L'indigo bleu.
On s'assure qu'un gaz ne contient pas d'oxygène en le luisant barboter, à l'abri de l'air, dans la solution d'indigo blanc.
Quant on veut s'assurer qu'un milieu de culture ne renferme plus d'oxygène libre, on peut y ajouter quelques gouttes d'une solution
2 p. 1 000 de sulfo-indigolate de soude, jusqu'à obtention d'une colo- : ration bleue très nette, puis 1 p. 100 en poids d'une solution normale ; de soude et 1 p. 100 de glucose. Dès que l'on a extrait tout l'oxygène du milieu, la coloration bleue disparaît, le glucose réduisant l'indigo ' dans ces conditions.
Si l'on ajoute simplement à un milieu de culture quelques gouttes de la solution de sulfo-indigotate de soude, puis qu'on le prive d'air et qu'on y ensemence un microbe anaérobie, la coloration bleue se détruira à mesure du développement de la culture, la décoloration commençant par les points en contact immédiat avec les colonies : le microbe emprunte l'oxygène combiné, qui lui est nécessaire, aux corps qui Tavoisinent et joue le rôle de réducteur.
Article 11. — DISPOSITION DES CULTURES AIVAÉROBIES.
§ 1er. MILIEUX LIQUIDES.
A. Procédé de Pasteur. — Ce procédé, utilisé par Pasteur, dans ses recherches sur les fermentations, est abandonné aujourd'hui ; c'est le plus ancien des procédés de culture des anaérobies et à ce titre il mérite d'être décrit.
On remplit exactement avec le bouillon nutritif un grand ballon muni de deux tubulures (fig. 74 ) ; la tubulure recourbée B plonge dans une capsule de porcelaine aux trois quarts pleine du même liquide. Le robinet R étant fermé, on porte à l'ébullition pendant une demi-heure simultanément le ballon etla capsule. L'air dissous est ainsi chassé; on laisse refroidir l'appareil en place puis on transporte l'extrémité du tube recourbé dans un vase plein de mercure. On remplit l'entonnoir E d'anhydride carbonique, puis on y fait passer, à l'abri de l'air, le liquide à ensemencer. On ouvre alors le robinet R et on laisse écouler la semence dans le ballon en ayant soin qu'il reste un peu de liquide dans l'entonnoir, ce qui met à
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l'abri de tout accès d'air dans le ballon. On porte alors à l'étuve.
1!. Procédé du tube à essai. - 1° Prendre un tube à essai ordinaire et en étirer l'extrémité supérieure dans la flamme du chalumeau.
2° Remplir le tube de bouillon ; le stériliser ouvert, et, à la sortie de l'autoclave, en sceller la pointe au chalumeau. Porter le tube ainsi fermé à 35° pendant quelques jours pour faire disparaître les traces d'air qui ont pu y rester.
3° Au moment de pratiquer l'ensemencement, flamber et briser "l'extrême pointe, introduire dans le tube un fil de platine chargé de semence et refermer immédiatement au chalumeau.
G. Pipette de Houx. — Procédé recommandé. — 1° Prendre une pipette Pasteur stérilisée, l'étrangler sur la petite flamme du chalumeau, immédiatement au-dessous du tampon d'ouate (a, fig. 72).
Pig. 71. — Appareil do Pasteur pour la culture des anaérobies.
Fig. 72. — Préparation de la pipette de Roux.
2° Flamber et casser la pointe de la pipette; plonger l'extrémité ouverte dans un tube de bouillon ensemencé avec le microbe à cultiver ; aspirer le liquide dans la pipette de façon à emplir celle-ci aux trois quarts.
3° En inclinant la pipette de façon à élever la pointe, fermer celle-ci sur une petite flamme.
4° Relier l'extrémité supérieure de la pipette à la machine avide. Pratiquer le vide et plusieurs lavages à l'hydrogène.
Il suffira souvent, le vide étant fait, de provoquer l ébullition du liquide comme nous l'avons dit. page (.)9. Dès que l'on chauffe la pipette, même très légèrement, le liquide bout violemment et tend à passer dans le tube d'aspiration: on évitera la production de ce phénomène en commençant par chauffer la partie supérieure de la pipette au-dessus du niveau du liquide.
5° Le vide étant fait, sceller la pipette à la flamme au niveau de l'étranglement a. Recouvrir les pointes du tube obtenu avec un peu de cire Golaz pour augmenter leur résistance. Porter à l'étuve.
