CULTURE DES MICROBES A.N AÉROBIES

6 La culture terminée, pour la retirer du tube, flamber et briser avec une pince l'une des extrémités de celui-ci, a, et aspirer le liquide dans une pipette Pasteur.

D. Tube de Pasteur, Jouberl et Chambeiiand. Cel appareil permet de faire deux cultures successives en pratiquant le réensemencement à l'abri du contact de l'air. Il est constitué

(fig. 73) par un tube en U renversé dont chaque branche porte une tubulure effilée; de la convexité de l'U part une troisième tubulure où est disposé un tampon d'ouate entre deux étranglements.

lo Stériliser le tube au four Pasteur, les deux effilures a et b ayant été préalablement scellées dans la ilamme.

2° Après refroidissement, flamber l'effilure a, en casser la pointe, la plonger dans le bouillon ensemencé, aspirer par C de manière à faire pénétrer le liquide dans La branche A. Fermer de nouveau l'effilure a au chalumeau.

3° Flamber l'effilure b, en casser la pointe, la plonger dans un tube de bouillon stérile, aspirer ce bouillon dans la branche B. Fermer la pointe de b au chalumeau.

Fig. 73. — Tube de Pasteur, Joubert el Cliamberland pour la cullurc desanaéro-

bies. Dans les temps 2 et 3, veiller à ce

que les liquides des deux branches ne se mélangent "pas ; cliaque branche ne doit être emplie qu'au tiers.

4° Relier la tubulure C à la machine à vide ; priver d'air l'appareil, pratiquer deux ou trois lavages à l'hydrogène; sceller dans le \ ide au niveau de l'étranglement c.

rlo Porter le tube à l'étuve en le maintenant vertical ; la cullurc se produit dans la branche A, le bouillon de la branche B reste clair et sert de témoin.

0° Quand la culture est terminée en A, incliner l'appareil pour faire pénétrer dans la branche B quelques gouttes du contenu de A, placer de nouveau à l'étuve et le bouillon B se (rouble à son tour.

DISPOSITION DES CULTUHliS ANAÉRUD1KS.

K. Tube tl<- Pasteur. — Ce tube est une simplification du précédent (iig. 74) ; il est constitué par une seule branche du tube en V que nous venons de décrire.

Après stérilisation du tube aspirer par l'effilure. a le bouillon

ensemencé; fermer l'effilure, faire le vide par B, sceller en b et porter à l'étuve.

F. Procédé du ballon à long col. — Ce procédé est utilisé pour obtenir de grandes quantités de culture.

1° Un ballon à long col, rempli au tiers de bouillon, est bouché à l'ouate et stérilise à l'autoclave (fig. 7b).

2° Après refroidissement, enlever pure-

Fig. 74. — Tube de Pasteur pour la culture des anaérobics.

Fig. 75. — Disposition pour la culture des anaérobies dans les ballons à long col.

ment le tampon d'ouate et ensemencer le bouillon à l'aide d'une pipette à longue effilure. Le bouchon d'ouate est remis en place et repoussé jusqu'à la partie moyenne du col.

3° Etrangler légèrement le col au-dessous du tampon d'ouate, en A, puis étirer son extrémité supérieure B.

4° Relier le col eflilé, B, à la trompe à eau; faire le vide et laver à l'hydrogène; sceller le col au chalumeau, sous le vide. Porter à l'él uve.

o° Pour retirer la culture du ballon, couper le col au niveau du bouchon d'ouate (Voy. p. 47) ; enlever ce bouchon et aspirer la culture dans une pipette ou un matras répartiteur stérilisés.