DISPOSITION DES CULTURES ANA.ÉROMES

latéral B, dans lequel on place un tampon d'ouate (fig. 81). On trouve dans le commerce des tubes ainsi préparés.

Introduire un morceau de pomme de terre dans le tube et stériliser à 120° à l'autoclave.

2° Ensemencer la pomme de terre selon le procédé ordinaire, puis fermer à la lampe l'extrémité supérieure du tube A au-dessous du tampon d'ouate (tig. 81-11).

3° Relier B à la trompe, faire le vide, laver à l'hydrogène.

4° Sceller au chalumeau, sous le vide, la tubulure B au niveau de son étranglement 6' et porter l'appareil à l'étuve.

///. - ISOLEMENT DES ANAÊROBIES .

A. Procédé des plaques. — Ce procédé, d'exécution difficile, permeUd 'obtenir dos plaques semblables à celles que l'on prépare

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Fig. 82. — Cloche pour cultures et t'vaporations dans le vide.

avec les microbes aérobies et que l'on peut facilement porter sous le microscope.

110 GtfLTUftB DBS MICROBES ANAftnnwES.

1° Ensemencer avec le microbe a étudier trois tubes de gélatine stérilisée et liquéfiée et préparer trois plaques comme il a été dil pour la séparation des aérobies (p. 84).

2° Tenir préparée d'avance la cloche à desséeber dans le ride (après lavage au sublimé) ou une éluve à vide (Voy. plue loin) et placer dans son récipient à acide sulfurique une solution de pvrogallate de potasse (Voy. p. 90).

3° A mesure de leur confection, disposer les plaques sur l'étagère, à l'intérieur de la cloclie.

4o Luter la cloche, y faire le vide, pratiquer des lavages à l'hydrogène ; isoler la cloche en fermant le robinet qui la relie à la i rompe.

B. Boîte de Kitasato. —C'est une boîte de verre, plate et circulaire, des dimensions dune boîte de Pétri et portant deux tubulures

Fig. 83. — Boîte de Kilasato.

latérales A el B. La tubulure B est effilée et fermée à la lampe ; la tubulure A est bouchée par un tampon de coton. \° Stériliser la boîte au four Pasteur.

2" Flamber et casser la pointe de l'effilure B, la plonger dans un tube de gélatine ensemencée et aspirer par A de manière à faire pénétrer la gélatine dans la boite. Sceller de nouveau B et laisser solidifier la gélatine.

3" Bélier A à la trompe, faire le vide, laver à l'hydrogène, sceller au niveau de l'étranglement a.

L'appareil de Kitasato est bon, mais coûteux et fragile.

G. Tube d'Esiiiareli modifié par Fraenkel. - 1° Prendre trois tubes à essai à parois minces, de 3 à 4centimètres de diamètre et sans rebord saillant, à l'orifice; chaque tube reçoit une petite quantité de gélatine, est bouché à l'ouate puis stérilisé à l'autoclave.

2° Préparer pour chaque tube à essai un bouchon de caoutchouc à deux trous portant deux tubes de verre coudés à angle droit à l'extérieur et dont l'un plonge jusqu'au fond du tube à essai, tandis que l'autre s'arrête au-dessous du bouebon : la partie extérieure de ebaque tube porte un tampon d'ouate entre deux étranglement*

(fig. 84). Envelopper dans plusieurs doubles de papier filtre chaque bouchon muni de ses deux tubes et stériliser à l'autoclave.

3° La gélatine étant liquéfiée à basse température, ensemencer les trois tubes par la méthode des dilutions (Voy. p. 84).

Fig. 8i. — Tubo do Fraenkcl pour culture Fig. 85. — Préparation du tube do Roux pour anaérobic en plaque roulée. culture anaérobie en plaque roulée.

4° •Remplacer rapidement le tampon d'ouate de chaque tube par un bouchon de caoutchouc, sorti du papier au moment de l'employer, eu ayant soin de ne pas toucher les parties qui pénétreront dans le tube à essai. Fixer le bouchon et le recouvrir de cire Golaz.

a° Relier le tube le plus long A à l'appareil à hydrogène et faire barboter le gaz pendant cinq à dix minutes dans la gélatine (maintenue liquide par immersion dans l'eau à 35°-40°) ; fermer alors au chalumeau les étranglements en A et en D.

G" Porter le tube sous un robinet d'eau froide et faire solidifier la gélatine sur les parois du tube en plaque enroulée d'Esmareh (Voy. p. 88).