CULTURE DES MICROBES A.N AÉROBIES
I). Tube d'Eeinarcb modiflé par Roux. —Procédé recommandé- — 1° Dans un Luhe à essai de 3 centimètres de diamètre environ et rétréci à sa partie supérieure (fig. 85), verser avec un entonnoir à tige effilée quelques centimètres cubes de gélatine ; fermer l'oritice du tube avec un tampon d'ouate; stériliser à l'autoclave; laisser refroidir.
2° Liquéfier la gélatine à basse température, enlever le tampon d'ouate, ensemencer avec le fil de platine (ensemencer plusieurs tubes par le procédé des dilutions successives), replacer le tampon, le repousser dans le tube et étrangler celui-ci en a et en b.
3° Relier le tube à la trompe à eau ; faire le vide ; laver à l'hydrogène; sceller en a, le tube étant rempli d'hydrogène.
4° Porter sous un robinet d'eau froide et enrouler la gélatine.
Pour les prélèvements, on coupe le tube circulairement à sa partie supérieure et on fait pénétrer un fil de platine par l'ouverture.
E. Tube à hydrogène. — Cet appareil est constitué par un tube de verre long de 25 centimètres, ayant 3 à 4 centimètres de dia-
Fig. 86. — Tube de Roux pour culture en plaque dans l'hydrogène.
mètre et portant à chacune de ses extrémités un tube, a et b, de petit diamètre, recourbé à angle droit et bouché à l'ouate (fig. 86 . 1° Stériliser l'appareil au four Pasteur.
2° Enlever le tampon d'ouate de la branche a, et par cette branche introduire avec une forte pipette Pasteur la gélatine ensemencée en quantité suffisante pour remplir la moitié inférieure du tube A.
3° Étrangler les deux tubes a et b de part et d'autre du tampon d'ouate; plonger le tube A dans un vase plein d'eau à 35-40° pour maintenir la gélatine liquide.
4° Relier a au générateur d'hydrogène ; le gaz circule dans le tube, barbote dans la gélatine et sort par b ; au bout de quelques minutes aisser refroidir la gélatine, le gaz continuant à passer, et scellera, et b au niveau des étranglements.
On peut encore utiliser le tube représenté par la figure 87; le maniement est Je môme que pour le précédent.
F. Tube de Vigual. — Procédé recommandé^ — i° Prendre un
DISPOSITION DES CULTUKES AIS'ÀÉKOBŒS.
tube de verre de 3 à 4 millimètres de diamètre et de 1 mètre de long; en effiler une extrémité, boucher l'autre avec un tampon d'ouate et faire un étranglement à 3 ou 4 centimètres au-dessous (fig. 88, partie gauche). Stériliser le tube ainsi préparé en le chauffant fortement dans la flamme.
2° Porter à l'ébullition (après coloration facultative par le sulfoindigotate de soude) un tube de gélatine stérilisée; le laisser refroidir sous un courant d'hydrogène (Voy. p. 107); avant solidification, ensemencer en continuant à laisser passer le gaz inerte; mélanger par un mouvement rapide de rotation entre les deux mains.
Fig. 87. — Tube pour culture en plaque dans l'hydrogène. Fig. 88. — Tube de Vignal.
3° Ramber et casser la pointe effilée du tube de Vignal ; plonger cette pointe dans la gélatine et aspirer par la partie supérieure de façon à remplir le tube jusqu'à l'étranglemenl A. Agir avec précaution pour ne laisser pénétrer aucune bulle de gaz dans le tube; sceller au chalumeau l'effilure, puis l'étranglement A.
Les colonies se développent bientôt, disséminées dans la gélatine
Besson. — Techn. microb., i" fidiL 8
CUI/riJItlï DES MICMOHks ANAÉROBIBS.
pour effectuer les prélèvements, flamber légèrement le tube ou lé laver au sublimé puis à l'alcool au niveau delà colonie ù étudier; le couper à ce niveau cl prélever avec l'Ose.
g 3. - EMPLOI DES ÉTUVES A VIDE.
Poyir la culture des anaéroLies, on peut Utiliser les vases à cullures ordinaires, à la condition d'enfermer ces vases dans une éluve spéciale où Ton fait et maintient le vide. L'étuve à vide devra toujours contenir une couche d'eau pour empêcher la dessiccation des milieux de culture; on remplace avec avantage l'eau par la solution de pyrogallale de potasse, qui a la propriété d'absorber l'oxygène.
A propos de l'isolement sur plaques, nous avons décrit l'utilisation de la cloche à vide de Roux. On peut encore employer les appareils suivants :
1° Appareil de Trétrop. Convient pour les cultures à la température ordinaire. II se compose d'un cylindre en verre fermé
pjg §9, — Appareil île Trétrop pour cultures dans le vide.
par un couvercle de bronze muni d'un manomètre à vide et d'une tubulure à robinet (fig. 89).
(t. Garnir le fond de l'appareil avec la solution de pyrogallate de potasse; disposer les vases de culture ; placer et luter le couvercle.
b. Relier la tubulure à la trompe à eau, faire le vide, pratiquer
DISPOSITION DES CULTURES A.N AÉROBIES. 11b
des lavages à l'hydrogène, puis fermer le robinet sous le vide.
J" Étuve à vide de Wiesnegg. — Cet appareil constitue une véritable étuve de Roux, à parois résistantes, hermétiquement close au moyen d'une porte A à joint de caoutchouc et munie d'un régu-
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Fig. 90. — liluve à vide de Wiesnegg.
lateur et d'un brûleur ((ig. 90). Il est utilisable pour toutes les températures. On dispose sur les tablettes de l'étuve les vases de culture et une cuvette contenant la solution de pyrogallate de potasse; on ferme, l'ait le vide et pratique les lavages à l'hydrogène. Le réglage de la température se fait comme pour l'étuve de Roux.
