CHAPITRE IV

DÉCALCIFICATION

Pour pouvoir en faire des coupes, on débarrassera de leurs sels calcaires les os et les tissus contenant des parties calcifiées ou ossifiées, en observant les règles suivantes :

1° Les pièces seront durcies compretement avant d'être traitées par le liquide décalcifiant, qui altérerait les tissus d'une manière trop marquée. Le durcissement s'opère dans l'alcool, ou mieux dans le liquide de MiiUer dont on complète ultérieurement l'action par l'alcool.

2° Le liquide décalcifiant sera employé avec abondance et' souvent renouvelé.

3" Lorsque la décalcification est complète, on lave soigneusement les pièces dans l'eau pendant deux ou plusieurs jours, afin d'enlever tout le liquide qui pourrait rester à l'intérieur des tissus et les altérer.

4°^ Les fragments étant complètement lavés, on les durcit à nouveau dans l'alcool; ils peuvent alors être coupés.

Le temps nécessaire à la décalcification dépend non seulement de la concentration du liquide, mais encore de l'épaisseur et du volume de la pièce anatomique: les os du nouveau-né et du fœtus seront décalcifiés plus facilement et plus rapidement que ceux de l'adulte.

En règle générale, on ne prendra pas de morceaux trop volumineux. On reconnaît <j[ue la décalcification est complète en enfonçant dans la pièce une aiguille montée ou un scalpel.

Méthodes de décalcification les plus employées :

1. Acide chromique et ses sels. — Le liquide de Millier a une action légèrement décalcifiante, mais seulement dans le cas de petits fragments osseux ou d'os embryonnaires. La durée serait trop longue pour les autres objets. Mais on peut la diminuer, d'après Haug, en ajoutant au liquide, cliaque fois qu'on le remplace, tous les trois, cinq ou huit jours, 1 cent. c. d'acide nitrique pour 200 à 300 grammes. L'avantage du liquide de Millier est de bien conserver les tissus.

DÉCALCIFICATION 21

Vacille cliromiciue pur en solution à 2 % décalcifie lentement; on en accélère l'action par un mélange de :

Acule chromique 1

Acide nitrique 1

Eau 100

D'après Haug, les résultats sont très bons sur les os jeunes. MÉTiionE DE A^'aldeyer :

1° Fixation de l'objet frais dans l'acide chromique à 1 p. 600; il"" Durcissement dans l'acide chromique à 1 p. 400 et, après, à 1 p. 200; 3" Décalcification dans un mélange renouvelé tous les six jours et composé de :

Acide chromique (l/200~ 100 cent, cubes

Acide nitrique pur 2 —

Lavage soigné. Durcissement dans l'alcool.

La durée de la décalcification est de trois mois et plus.

Liquide de Fol :

Acide chromique (1 0 '0) 70 parties

Acide nitrique 3 —

Eau 200 —

Méthode de Hauc, recommandée pour les objets très délicats:

Acide osmiquc à 1 0/0 10 cent, cubes.

Acide flu'omique à 1 0 0... 2rj »

Eau distilk-e 6o »

Laver à l'eau. Durcir dans l'alcool à 70".

'2. SoLi TioN SATL'HÉE AOï KLSE d'acide pichique. — On cmploic surtout la solution aqueuse contenant un excès d'acide picrique. Elle durcit, fixe et colore à la fois.

Le tibia d'un nouveau-né, non coupé, est décalcifié en trois semaines environ ; pour les os plus volumineux et i)lus durs, il faut même plusieurs mois. Mais les combinaisons à l'acide sulfiirique ne sont pas stables parce qu'elles déterminent la formation de sulfates calcaires presque insolubles.

Pourtant, plusieurs auteurs recommandent le liquide de Kleinenberg :

Eau distillée 100 volumes

Acide sulfuricpie 2 —

Mêlez et ajoutez de facide picrique jusqu'à saturation; ajoutez trois volumes d'eau. On peut prolonger l'immersion jusqu'à vingt-quatre heures et plus. Les pièces y sont plus rapidement fixées que par l'acide picrique seul.

Il y a aussi la liqueur deFle.mming, qui donne de très bons re'sultats dans beaucoup de cas ; elle suffit pour les fragments de petites dimensions.

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3. Acide lactique en solution a 10 % et plus concentrée. — Il décalcifie un peu plus rapidement que l'acide picrique et attaque moins les tissus.

4. Vinaigre de bois (acide pyroligneux pur). — Il a été recommandé en nature par Haug pour le tissu osseux fœtal, pour celui des animaux inférieurs et i^our les tumeurs osseuses et cartilagineuses. Il agit en même temps comme durcissant. Mais il ne convient pas pour les os adultes.

5. Acide ciiloriiydrique. — La forme sous laquelle on l'emploie ordinairement est le liquide de von Ebner :

Acide chlorhydrique 2.. 5 cent, cubes

Alcool 500 »

Eau distillée • 100 »

Chlorure de sodium ; . 2.5 gr.

Ce liquide agit lentement, mais est plus inoffensif pour les tissus que la solution de 1 ou de 10 % autrefois employée. On peut accélérer la décalcification en élevant la quantité d'acide à 5 % , et d'une façon correspondante celle du chlorure de sodium.

Les pièces traitées par ce liquide seront enrobées dans la celloïdine et au besoin traitées à nouveau par la même méthode. On obtient ainsi une décalcification plus complète des couches superficielles. Avant de couper, on peut enlever l'acide dans l'alcool à 75°.

Solution de chlorure de palladium, recommandée par Waldeyer :

Chlorure de palladium 0.01

Acide chlorhydrique à 1 0/U 1000

Après lavage soigné, durcir successivement dans l'alcool à SO*', 60° et 90°.

6. Acide nitrique pur. — On emploie la dilution de trois, cinq, neuf parties pour cent d'eau. Il est surtout indiqué pour les os adultes.

Les solutions aqueuses simples d'acide nitrique modifient moins encore les rapports de structure que les solutions correspondantes d'acide chlorhydrique. Haug recommande, pour empêcher le gonflement déterminé par un séjour prolongé dans la solution aqueuse, le mélange suivant :

Acide nitrique pur 30. à 90

Alcool absolu 700

Eau distillée 300

Chlorure de sodium 2.5

La solution agit rapidement et est inoffensive. Elle convient tout autant pour les os du fœtus que pour ceux des adolescents et des adultes. Il est très recommandable de fixer au préalable les objets dans le sublimé, mais la coloration se fait également bien avec les autres procédés.

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Voici une modification nouvelle de ce procédé :

7. Méthode de la phloroglucine. — La phloroglucine n'a pas pour but de décalcifier, mais de protéger les pièces avant que les acides n'agissent, ce qui fait qu'on peut élever le degré de concentration de ces derniers; de telle sorte que des fragments peu volumineux sont complètement décalcifiés au bout d'une demi-heure, et les autres après quelques heures. Mais il est nécessaire de contrôler l'action du liquide d'une façon continuelle.

La solution se prépare comme suit.

On dissout 1 gr. de phloroglucine en chauffant, avec. 'précaution^ dans 10 gr. d'acide nitrique non fumant.

On ajoute à cette solution mère, colorée en rouge rubis, 100 cent, cubes d'une solution aqueuse d'acide nitrique à 10 % .

Si l'on veut employer de plus grandes quantités de liquide, il faut naturellement préparer une plus grande quantité de solution mère.

Le liquide suivant agit un peu plus lentement :

Phloroglucine . . 1

Acide nitrique 5

Alcool 70

Eau distillée 30