CULTURES ET INOCULATIONS

OU une lochiiiqiio de coupes à main levée assez perfectionnée pour arriver à trancher les tissus sans les dilacérer. Le parasite, en effet, détermine souvent autour de lui une zone de nécrose qui isole plus ou moins complètement le grain jaune des éléments voisins et lui permet d'en être détaché par la simple poussée du rasoir. A plus forte raison ne faudra-t-il pas laisser les coupes immergées longtemps dans de grands récipients avant leur coloration, s'il ne s'agit pas de coupes incluses dans la paraffine ou dans la celloïdine. Ce sont là, on le voit, des conditions réalisables lorsqu'on dispose de l'outillage d'un laboratoire, mais incompatibles avec les nécessités habituelles d'un diagnostic de pratique médicale. Quoi qu'il en soit, la technique de la coloration du parasite dans les coupes peut être exactement la môme que celle que nous avons décrite ci-dessus pour les grains isolés, moins l'immersion préalable dans la potasse qui altérerait les cellules du tissu intéressé. Avec le picro-carmin et une des couleurs d'aniline appropriées, on obtient même des colorations triples : cellules animales avec une teinte qui varie du rouge franc au rose, massues en orangé, mycélium en bleu ou violet (1).

Cultures et inoculations. — Nous ne nous étendrons pas beaucoup sur les méthodes de niUnre de \Actinomyces^ ni sur les procédés d'inoculation aux animaux. Ces expériences de laboratoire, toujours délicates à diriger, demandent une éducation spéciale et constituent rarement des moyens de contrôle à la portée des cliniciens. Aussi enregistrons-nous surtout des résultats sans entrer dans le détail des procédés.

Lorsqu'on ensemence directement un grain jaune dans un bouillon à l'air asepsie, il y a de grandes chances pour que la culture qui se développe soit impure ; \ Actinomyces se trouve mélangé presque constamment avec des microbes de la suppuration, qui vont se développer plus rapidement que lui et non seulement ralentir son évolution, mais souvent même le faire disparaître assez rapidement du milieu où on l'a ensemencé (six à dix jours) (2).

(1) Voy. IsRAicL, Ueber Uoppelfarbung mit Orcein, Virc/ioin's Archiv, Bd 10."), l.SSC. Voici le procédé de Coloration de TActinomyces dans les coupes (d'après Birsch-

IIlRSCHl'EM)) :

lo'' temps : Première coloration générale au carmin lithiné comme pour une préparation ordinaire; 2" temps: Immersion dans la fuchsine phéniquée de Zielil à 5 p. 100 durant cinq minutes; 3« temps : Lavage peu prolongé à Talcool; 4" temps : Immersion à chaud dans une solution de krystall-violet à 1 p. 100 durant quinze minutes; h" temps : Immersion durant une minute dans une solution alcoolique d'acide picnque à ïj'î p. 100; G" te7nps : Éclaircir à l'essence de girolle, monter dans le baume au xylol (Dou).

(2) Ce défaut de résistance du parasite vis-à-vis des organismes inférieurs rend

L'ensemencement exige donc des précautions minutieuses contre les infections associées, et l'on a successivement préconisé les cultures dans le vide (0. Budjwid) (1), ou sur plaques d'agar (Guermonprez et Bécue ) (2), ou dans l'œuf (Israël) (3), ou, enfin, sous une cloche renfermant un corps avide d'oxygène [acide pyrogallique (0. Budjwid)]. Tous ces procédés sont basés sur la propriété que possède l Actinomyces de vivre comme un aérobie ou un anaérohie^ suivant les nécessités du milieu, tandis que les microbes qui se trouvent avec lui sont gênés dans leur développement, soit par la privation d'oxygène (surtout les microbes de la suppuration), soit par l'excès de ce gaz (surtout les saprophytes).

Ordinairement il est suffisant de faire ces cultures anaérobies dans les premiers tubes ensemencés directement avec les grains jaunes, pour continuer les cultures ultérieures à l'air libre. 11 peut arriver cependant, alors, que les microbes associés au champignon ne soient pas encore détruits en totalité et reprennent au contact de l'air une reviviscence suffisante pour se développer à nouveau parallèlement à lui, ainsi que M. Dor nous l'a fait observer à plusieurs reprises. Aussi une méthode plus sûre et plus rapide consiste-t-elle à pratiquer les premiers ensemencements des grains jaunes sur des plaques d'agar peptonisé ou de pomme de terre, et de suivre jour par jour le développement des colonies, en triant dans le nombre, au bout de cinq à six jours, celles qui paraissent indemnes de moisissures ou d'autres bactéries, pour les repiquer sur de nouveaux milieux. On reconnaîtra les colonies pures à leur aspect lenticulaire, à leur coloration blanc soufré et à leur surface un peu terne ; il sera prudent de contrôler cette pureté au microscope.

Milieux de culture. — Tous les milieux habituels de culture usités en bactériologie conviennent à \ Actinomyces.

En bouillon peptonisé, il donne d'abord des granulations d'un blanc terne, dont le volume augmente progressivement sans qu'elles déterminent de trouble appréciable dans le liquide. Plus tard, de

compte de ce fait, que, dans certains cas d'actinomycose, revêtant toutes les allures cliniques de l'affection, mais à foyers ulcérés et suppures, il soit impossible de retrouver un seul grain jaune, alors même que la lésion semble encore progresser et que, quelque temps auparavant, à la première ouverture des collections, on en ait recueilli des quantités. Cette constatation impose aussi la nécessité d'examiner le plus tôt possible les grains et de ne pas les laisser auparavant, pendant plusieurs jours, exposés aux souillures de l'atmosphère ou d'un vase tnal stérilisé.

(1) 0. Bldjwid, Ueber die Reincultur des Aktinomyces, Centmlblnlt fiir Bakleriologie und Paruyilenkunde, 1889, p. (i'M).

(2) GuERMO.NPREz et BÉCLE, Actinoiivjcose, biblioth. Charcot-Debove.

(3) Israël, loco citalo.