MÉTHODES DEXÂMEN. — GRAINS JAUNES

d'ailleurs très laborieux et ne donne qu'une dissociation insuffisante des éléments (1).

Par conséquent, la première précaution à prendre, pour examiner des liquides ou des tissus suspects, est de les étendre sur une lame de verre polie, à l'aide d'une aiguille à cataracte ou d'une curette en écaille qui les étalera en une couche mince sans rien écraser, et les dissociera grossièrement. De cette façon, les grains, même peu nombreux, seront mis en évidence, et surtout séparés des éléments étrangers ou inorganiques qui les enrobaient. Les grains ainsi recueillis seront ensuite transportés par groupes de trois ou quatre sur d'autres lames porte-objet, et on pourra les examiner directement au microscope. Mais, pour les reconnaître sans autre préparation, il faut une grande habitude de ces recherches ; et en tous cas, il est préférable d'avoir recours à l'une des nombreuses méthodes rapides de coloration qui ont été indiquées.

Le principe général de ces colorations est le suivant :

Dans le grain jaune, les filaments mycéliens prennent avec élection les couleurs d'aniline (violet de gentiane, bleu de méthyle, etc.) et gardent le Gram, tandis qu'ils sont décolorés par les aci<les forts dans la méthode d'Ehrlich (2). Au contraire, les massues de la couronne périphérique, comme nous l'avons déjà dit, peu sensibles à ces colorants, sont fortement teintées en jaune orangé par le picro-carmin, en rose par le carmin, et en rouge rosé par l'éosinc.

Les spores se distinguent par leur éclat réfringent et par leur coloration limitée à l'enveloppe; elles réagissent vis-à-vis des éléments colorants comme le mycélium.

La forme et la disposition des massues étant suffisamment caractéristiques par elles-mêmes, on pourra pour les recherches (dini(|ues extemporanées s'abstenir de prali(juer des doubles colorations, et l'on arrivera en quelques minutes à terminer un examen.

La technique qui a été adoptée par M. Dor au laboratoire de la clinique, et dont nous avons fait l'épreuve avec succès sur la plupart des cas observés dans le service est la suivante :

Lorsque les grains sont imparfaitement dissociés, immersion

(1) On peut traiter ces grains par des acides forts au quart, qui les débarrassent des sels calcaires sans altérer beaucoup le parasite lui-uièiue.

(2) Cette décoloration par l'Ehrlich est un élément de distinction capital entre l'actinomycose et les formes mycéiiennes de la tuberculose. (Voy. p. 327.)

A. PONCET et L. 15ÉRARD. — ActitioDvjcose. 2

rapide dans la potasse à 30 p. 100, pour détruire toutes les particules animales qui les souillent, puis lavage à l'eau, qui entraine l'excès de potasse et les substances étrangères. Cette pratique aura parfois pour efîet de détruire entièrement la granulation que l'on prenait pour une masse aclinomycosique et qui, en réalité, était constituée par des débris de tissus malades : elle sera donc une métbode de diagnostic précieuse, dans certains cas. mais, parfois aussi, dangereuse, car si le grain jaune vrai que l'on observe a déjà été morcelé par la phagocytose, l'eau du lavage, après l'immersion à la potasse, entraînera à la fois les débris de leucocytes et les éléments fragmentés du grain.

Dans la majorité des cas, donc, il sera suffisant de faire tomber sur la lame où reposent les grains isolés une goutte de picrocarmin vieilli, qu'on laissera en contact pendant cinq à dix minutes. Au bout de ce temps, et sans nouvel artifice, la préparation, recouverte délicatement d'une lamelle, sera examinée d'abord à un faible grossissement (2 Vérick ou B Zeiss), puis à un grossissement plus considérable. Le poids de la lamelle suffit à écraser légèrement le grain et à étaler un peu vers la périphérie la couronne festonnée irrégulièrement des massues dont les contours et la nuance orangée sont caractéristiques, tandis que le centre est teinté confusément en jaune, sans distinction de détails (1).

Veut-on obtenir une double coloration rapide, il suffit de traiter préalablement le grain que l'on aurait alors écrasé, par la méthode de Gram, avant de le soumettre à l'action du picro-carmin. Pour un diagnostic extemporané, la méthode au picro-carmin seul, d'une simplicité élémentaire, donne des résultats très suffisants d'ordinaire : néanmoins il peut arriver que, dans un foyer récent, avec un parasite très vivace, les massues soient encore rares et qu'on s'expose à laisser VActinomyces inaperçu en ne cherchant pas à colorer le mycélium. Il est aussi absolument nécessaire de le faire si l'on veut étudier les rapports du mycélium et des massues.

Ces procédés sont naturellement applicables à l'étude des cullures sur les différents milieux.

Dans les coupes, la recherche du parasite n'est malheureusement pas aussi simple et n'offre des chances de succès que si l'on a d'excellents matériaux de durcissement rapide et des microtomes

(1) Naturellement, si l'on voulait conserver ces préparations, il faudrait, après la coloration au picro-carmin, laver à l'eau pure ou légèrement alcoolisée, puis immerger dans la glycérine picro-carminée et luter au baume.