VII - DISSECTION DES MOUSTIQUES. EXAMEN EN COUPES

Extraction des glandes salivaires. — Maintenant que nous connaissons l’anatomie interne du moustique, il nous sera facile de procéder à la dissection de ces insectes.

Nous avons vu que les glandes salivaires sont contenues dans la partie antérieure du thorax sans relations solides avec les organes voisins. Nous savons qu’elles sont suspendues à deux tubes résistants qui traversent le cou et vont se réunir dans la tête en un tube unique fortement attaché à l’hypopharynx. Il nous devient donc aisé de comprendre comment, d’un seul mouvement, on peut extraire les glandes salivaires . Pendant qu’une aiguille à dissection fichée dans la partie postérieure du thorax d’un moustique le maintient sur le flanc, clans une goutte de solution physiologique de chlorure de sodium déposée sur le porte-objet, une autre aiguille, passant en arrière du cou, sépare la tête du thorax. Le tube digestif est rompu à l’union de l’œsophage avec le pharynx, les glandes salivaires suivent la tête. On peut assurer encore plus complètement la sortie des glandes salivaires, en fendant, préalablement, l’enveloppe chitineuse du thorax sur sa partie dorsale jusqu’au cou.

Cette manœuvre est rarement suivie d’échec; si cependant les glandes restent dans le thorax, on peut aller les y chercher. Avec un couteau à cataracte, on enlève la moitié dorsale et la moitié postérieure du thorax. Les glandes salivaires restent dans le fragment conservé, d’où ou ïes retire en maniant avec délicatesse deux aiguilles a dissection. L aide du microscope est indispensable pour vérifier de temps en temps, a quel point on en est de l’opération.

Extraction du tube digestif. — L’extraction du tube digestif est aussi simple que celle des glandes salivaires. Avec des aiguilles délicatement maniées, on sépare le 6e segment abdominal du 7®. On tire doucement avec une aiguille fichée dans les derniers seo-ments, pendant que l’autre maintient la partie dorsale du thorax. Si 1 intestin est vide, il sort avec la plus extrême facilité, accompagné de scs trois diverticules œsophagiens. Les tubes de Malpig n apparaissent comme un pinceau de filaments blancs nacrés attachés à la partie postérieure de l’intestin moyen. Avec un peu de soin, on arrive sans peine à fendre le 7® et le 8® seo-menls abdominauxet à libérer entièrement le tube digestif jusqu’eU’anus.

‘ I intestin est plein de sang, il est bon de séparer le thorax de 1 abdomen flans un premier temps, de détacher le 7® segment

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abdominal du 8'* dans un 2' temps. La parlle tlioraci(jue de l’inlestin est dégagée d’une part, l’exlrémilé anale e.st libre d’autre part. Dans la })artie (|ui paraît alors la plus distendue, on sépare deux segments abdominaux et on lait glisser les segments antérieurs vers un bout, les segments postérieurs vers l’autre. On peut observer ainsi facilement la vacuité ou la plénitude du sacaérien. Sans être difficile, cette manœuvre exige cependant une certaine habitude. Il faut veiller à ne pas déchirer l’intestin moyen avec la pointe de l’aiguille.

Matériel opératoire. — Il convient de s’aider,pour ces opérations, d’une bonne loupe montée, loupe de Brucke sur pied articulé, et d’une plaque de verre sous laquelle on a disposé d’un côté une feuille de papier blanc, de l’autre une feuille de papier noir. Les organes extraits apparaissent bien plus nettement sur fond noir. Au contraire, l’insecte ressort mieux sur fond blanc.

Il faut toujours opérer dans une solution de chlorure de sodium à 9 0/00. On passe ensuite dans une solution de formol à

L’emploi d’un microscope binoculaire rendra la dissection considérablement plus facile.

Le formol fixe les tissus ; aussi convient-il de n’immerger les organes détachés dans cette .solution que lorsqu’on les juge suffisamment préparés.

On examine de temps en temps, sous la platine du microscope, le détail des tissus qu’on prépare.

11 est bon aussi, avant de commencer la dissection d’un moustique, de lui couper les ailes et les pattes et avec un pinceau de le débarrasser de toutesses écailles. Ces ornements, si on ne prenait

cette précaution, viendraient constamment se mélanger aux organes disséqués et souvent masquer des détails importants.

Quand on veut rechercher les parasites du paludisme, il vaut mieux n’employer que des Anophèles infectés depuis 12 jours et

conservés à 27°.

Examen des glandes salivaires. — Après les avoir séparées de la tête, on les place entre lame et lamelle et on les écrase légèrement. Les sporozoïtes sortent des glandes; on peut les voir nager dans le liquide en les examinant avec un objectif à sec un peu fort ou avec l’immersion.

Si on désire les conserver, il suffit de faire glisser la lamelle sur la lame en appuyant doucement. On laisse sécher, on fixe a l’alcool absolu et on colore au Romanowsky, Gieinsa, Leishmau,

etc. (Voir plus loin, pages 89 et suivantes).

Il est bon de faire une préparation des spermatozoïdes retirés des spermathèques pour les comparer avec les sporozoïtes.

S’il s’agit seulement de dépister l’infection des glandes salivaires

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chez un grand nombre d’insectes, les frères Sergent recommandenl de retirer la tète et de faire sur lames des frottis en promenant à plusieurs reprises sur le verre la surface de section thoracique.

Examen de l’estomac. — Quand on retire l’estomac d’un moustique infecté, on constate assez facilement qu’il porte à sa surface de nombreux kystes enboutons. Entrelame et lamelle, on voit les kystes sous la membrane musculo-élastique, entre les fibres musculaires. Au-dessous, se disting’uent nettement les cellules épithéliales dont quelques-unes se détachent et flottent dans le liquide sous forme de boules réfringentes, dans lesquelles on voit les g-ranulations protoplasmiques ag-itées de mouvements browniens.

On peut, en faisant varier le point, apercevoir la couche de cellules épithéliales opposée et même, par-dessous, la membrane élastico-musculaire de l’autre côté.

Les kystes mûrs sont souvent rompus et vides. C’est d’ailleurs un processus normal chez le moustique infecté. Les sporozoïtes sont entraînés avec le liquide de la cavité générale.

Schaudinn(i) a reconnu qu’ils sont aussi doués de mouvements actifs à l’aide desquels ils pénètrent dans les glandes salivaires. 11 recommande, pour faire ces observations, de se servir du liquide qu’on retire des Anophèles. On coupe un certain nombre de moustiques par le milieu et on exprime la petite quantité d’humeur qui sourd de l’une et l’autre des deux parties. Une dizaine d’insectes suffisent à obtenir une goutte assez grosse dans laquelle on peut observer non seulement les mouvements des sporozoïtes^ mais où on peut suivre pendant au moins 24 heures, à 28-80°, le développement des kystes dans la paroi intestinale.

Lorsqu’on veut conserver l’estomac, avec les kystes qu’il porte, on le fixe dans une goutte de formol à 2 0/0 et on le monte dans la glycérine. Cette fixation peut être faite aussitôt après l’extraction, ou quand la pièce est déjà sous la lamelle. Dans ce dernier cas, on aspire d’un côté de la lamelle avec du papier buvard le liquide qui est en dessous, pendant qu’on dépose de l’autre côté une goutte de solution formolée.

Quand on examine un moustique récemment infecté, on peut, d’après Stephens et Christophers(2), distinguer les zygotes de la

(1) SCHAÜDI.N.N, Sludicn über Rranhlieitscrren-ende Protozoen. II. Plasmodium vivax (Ghassi et Feletti) der Erre.çcr des Tcrliaiifiebers beim Menschcii. [Arb. a. d. K . Gesundh., L. XIX, fasc. 2, 1002;.

(2) .Stei'iie.ns et CinusTOPiiEiis, Du i)aludisinc et des iiarasitcs du san£^-, Irad. des frères SEaoENT, Paris, Doiii, 190G.

TuAITÉ UE PATHOLOGIE EXOTIQUE.

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tiercc'maligne, de la tierce bénigne et de la quarte par le pigment qu’ils renferment.

Dans le premier, les grains de pigment ressemblent à des

grains de poivre.

Dans le second, ils sont jaunâtres ou dorés, et disposés en traînées.

Dans le 3®, le pigment est grossier et en amas.

Quand ils sont plus avancés, les zygotes se différencient difficilement les uns des autres.

Janczo (i) trouve que les kystes des 3 parasites peuvent encore être reconnus par leur réfringence propre et par la plus ou moins grande netteté deleurs contours. Le kyste de tierce maligne est brillant, très réfringent; il a des contours très nets. Celui de la tierce bénigne paraît plus mat, se distingue mal sur le fond de l’estomac, son contour est peu accentué. Celui de la quarte est mat comme le précédent, mais son contour est très distinct.

D’après Bignami et Bastianelli (2), les kystes de tierce bénigne renferment des sporozoïtes plus gros et un reliquat de segmentation plus volumineux, disposé en masses moins nombreuses.

Coupes en paraffine . — Les organes séparés peuvent être fixés dans le sublimé saturé pendant quelques minutes. On les transporte ensuite dans l’alcool à 70“ iodé une heure, puis dans les alcools à 90° et absolu, le xylol et la paraffine fondue en les

laissant 10 minutes dans chaque bain.

On pratique ensuite des coupes en série, à l’aide d’un microtome mécanique, comme celui de Minot,par exemple. Ces coupes sont soigneusement étalées sur papier, où elles attendent qu on les fixe sur lames.

Pour cette opération, on commence par déposer sur une lame propre une goutte d’albumine glycérinée (3), qu’on étale avec le doio-t en couche très mince. Sur cette albumine, on laisse tomber une"goutte d’eau. Dans cette goutte d’eau, on dispose les coupes en petits rubans coupés juste assez longs pour loger sous une lamelle et on en place plusieurs rangées les unes au-dessous^ des autres. On étale les coupes en chauffant la lame à 4o-45°- L eau s’évapore lentement et les coupes adhèrent à la lame.

Fi'’’. 45. — Figure schématique de Slcfihcns et Chrislôphers, montrant les signes caractéristiques des divers zvo-otes. De gauche adroite sont représentés des zygotês^de tierce' maligne, de tierce bénigne, de quarte et de Proleosoma.

(i) Janczo, Alti, 7, 1906.

g (..««io. e>ies, ; •»

valion%u camphre, du thymol ou mieux un peu de saheylate de soude.

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Ouand celle-ci est bien sèche, on chaude à 70“ pour coaguler ralbumine. Les coupes peuvent dès lors être passées dans les matières colorantes sans crainte de les voir se détacher.

La coloration à l’hématéine donne de bons résultats.

On peut, avec la même facilité, faire des coupes de moustiques entiers. On les asphyxie par le chloroforme, l’éther ou mieux la fumée de tabac qui les tue en extension. On enlève les ailes, les pattes et les écailles. Avec une aiguille, on fait délicatement des trous dans l’enveloppe de chitine entre les segments abdominaux, entre le thorax et l’abdomen, etc., puis on plonge les moustiques dans l’alcool, le sublimé alcoolique à chaud ou mieux le liquide de Perenyi, dont voici la formule :

Acide nilrique à 10 °/o 4 parties

Alcool absolu ‘ 3 parties

Sol.aq. d’acide chromique à 0,5 °/o 3 parties.

Ce mélange prend bientôt une teinte d’un beau violet gorge de pigeon. On y laisse les moustiques de 4-5 heures jusqu’à 24 heures. Puis, on les porte dans l’alcool à 70% delà dans l’alcool à go? et enfin dans l’alcool absolu. On les passe ensuite dans le xylol et la paraffine.

Le fixateur de Perenyi pénètre très bien, mais on peut obtenir une pénétration plus rapide et plus profonde en enlevant le dernier anneau de l’abdomen.

La paraffine à employer dans les pays chauds doit être dure. Nous avons obtenu d’excellents résultats avec le mélange de Dumège à 55°.

Les coupes sont faites et montées comme il a été dit plus haut.

Coloration. — On peut les colorer àl’hématéine, ouàl’hématoxyline au fer de Heidenhain.

Une bonne pratique est la suivante :

Quand les coupes sont collées, débarrassées de la paraffine par le xylol, on les passe à l’alcool absolu, puis à l’alcool faible et à l’eau. On les plonge alors pendant roài5 ininutesdans le mélange de Flemming, ou mieux encore dans le mélange de Borrel, dont voici la formule :

Chlorure de platine 2 ffr

Acide osmi(jue 2 *

Acide chromique 3

Acide accti([ue qq

Eau distillée ’ ' 3-Q

On les lave ensuite, pendant un quart d’heure, à l’eau courante et on les colore dans une solution aqueuse assez claire (teinte du vin) de rouge de Magenta pendant 5 ou 6 minutes à chaud.

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On lave à l’eau et on verse sur la laine du ])icro-indigo-carinin préparé en mélangeant à une solution concentrée d’indigo-carmin une solution saturée d’acide picrique jusqu’à virage de la couleurbleue au vert.

Après T minute de contact, on lave rapidement à l’eau. 11 faut agir rapidement de façon à n’enlever que l’excès de l’indigo, qui est très soluble dans l’eau. On passe ensuite à l'alcool absolu, qui fixe l’indigo, déshydrate et permet l’emploi de l’essence de girofle qui décolore. Il ne faut pas faire agir trop longtemps l’alcool, qui décolore aussi les tissus teints en rouge, mais plus brutalement que l’essence de girofle. On suit la décoloration au microscope et on monte au baume quand on la juge suffisante.

Les préparations obtenues par cette méthode sont très jolies à l'œil et très démonstratives.

Parasites divers des moustiques. — H arrivera qu’au lieu du parasite du paludisme, ou avec lui, on rencontre dans les moustiques des parasites tels que :

I. Pilaires en évolution dans les muscles, oubien développées dans le labium;