Milieu de II. Mouton. — Ce milieu se prépare avec

Gélose 10 gr.

Bouillon de veau 100 cc.

Eau distillée . . . 900 cc.

Von Wasielewski et Hirschfeld remplacent le bouillon de veau par du bouillon de bœuf.

4. Milieu à la gclose au sang de Nicolle. — Franchini et Raspaolo ont indiqué que ce jnüieu est un des meilleurs pour les cultures des amibes du foie.

On prépare d’abord le mélange suivant :

Gelose 14 gr.

Sel marin . . 6 gr.

Eau 900 cc.

Sans alcalinisation ni neutralisation on répartit dans des tubes à essai, qu’on stérilise ensuite à l’autoclave. On peut conserver une provision de tubes de gélose en ayant soin de les mettre à l’abri de la dessiccation.

Quand on veut ajouter le sang, on fond la gélose, puis on la laisse refroidir aux environs de 48 à 5o° et on met dans chaque tube un tiers de sang de lapin pour deux tiers de gélose. On mélange intimement en roulant les tubes entre les doigts et 011 les laisse solidifier en position inclinée. Lorsque la gélose a fait prise, on met à l’étuve à 37° durant a à 3 jours, puis on conserve à l’obscurité et à la glacière.

G. Isolement d’uue espèce d’amibe. — Quand on veut faire 1 étude d’une espèce d’amibe, il faut partir d’un kyste unique.

L’isolement d’un kyste peut se faire de plusieurs façons :

i" Musgrave et Clegg ont imaginé un moyen très ingénieux.

On examine au microscope une culture d’amibes enkystées sans recouvrir d’une lamelle de verre. Lorsqu’on a repéré un kyste isolé et suffisamment éloigné des autres kystes, on abaisse I objectif jusqu’à son contact de façon à ce qu’il adhère à la lentille frontale. Le kyste est ensuite reporté sur un milieu de culture.

2° Noc procède de la manière suivante :

Sur une lame de verre flambée il dépose une petite lamelle ronde egalement flambée. Il prépare une émulsion de kystes amibiens et avec une pipette effilée il en prélève une gouttelette aussi petite que possible. Avec l’objectif faible il s’assure qu’il n’v a qu’un seul kyste, sinon il recommence l’opération. Le résultat

obtenu, il lait glisser la lamelle dans un tnbe de gélose sans peptone tout récemment ensemencé avec une bactérie quelconque. Avec le liquide de condensation il étale les microbes et le kyste à la surface du milieu.

I). Cultures pures mixtes d’amibes. — A l'exception de A. Williams, qui aurait réussi à cultiver les amibes sur des milieux stériles, la grande majorité des auteurs s’accorde à reconnaître que sans bactéries vivantes les amibes ne poussent pas ou très mal et pendant peu de temps.

Aussi a-t-on cherché à obtenir des cultures d’amibes dites « pures mixtes », c’est-à-dire ne contenant qu’une seule espèce d’amibes et une seule espèce bactérienne.

Le procédé employé par II. Mouton consiste à déposer une goutte de la culture amibienne impure contenant diverses espèces bactériennes au centre dune boîte de Pétri. A partir du point central on lait une série de stries rayonnantes avec une culture du microbe que l’on veut substituer à tous les autres. Les amibes cheminent le long de ces stries et se débarrassent peu à peu des anciens microbes, tandis que la nouvelle bactérie devient prépondérante.

Lorsque les amibes sont parvenues à l’extrémité périphérique de la strie, on en reprend une partie que l’on reporte sur une nouvelle boîte de Pétri.

L’expérience a montré à H. Mouton qu’après plusieurs opérations semblables on obtient le plus souvent une culture pure mixte.

On peut avoir recours au procédé dit « des cercles concentriques » .

Au centre d’une boîte de Pétri on ensemence la culture amibienne avec les diverses bactéries qu’elle entraîne avec elle.

Tout autour de la zone d’ensemencement on trace des cercles concentriques avec un fil de platine chargé de la bactérie que l’on veut substituer.

Les amibes en progressant s’éloignent du centre de la boîte. Au fur et à mesure qu’elles franchissent les cercles elles abandonnent une partie des 'bactéries qu’elles portent, avec elles et s’emparent de l’espèce qui s’est multipliée sur les stries.

On recommence l’opération un certain nombre de fois jusqu’à obtenir une substitution complète.

Pour purifier les kystes amibiens de bactéries on peut opérer soit comme Frôsch, en faisant agir sur la culture d’amibes une solution de soude à 20 0/0, pendant trois jours à la température du laboratoire, soit comme Tsujitani en substituant d’abord le vibrion cholérique aux bactéries, puis en imbibant avec la culture

"TECHNIQUE POUR L’ÉTUDE DES AMIBES 365

amibienne des fils de soie stérilisés qu’on laisse ensuite dessécher

stérilement. ,

Je ne m’étendrai pas davantage sur la technique des cultures.

Je signalerai la revue très complète de Wallcer (1912) où Ion trouvera de nombreux renseignements sur la composition des milieux de culture, l'ensemencement et l’isolement, les conditions physiques et chimiques, les caractères des cultures. Dans des tableaux synoptiques sont résumés les résultats obtenus par les expérimentateurs et les caractères des amibes cultivées.