II. - TECHNIQUE DES CULTURES

Lorsqu’on ensemence sur des milieux nutritifs appropriés des selles humaines, normales ou pathologiques, on obtient toujours dans une certaine proportion des cultures d’amibes, non pathogènes, appartenant au genre Vah.lkarnpjia.

Bien qu’on ait échoué jusqu’ici à obtenir la multiplication m vitro d’ E. dijsefiierian , nous donnerons quelques indications sur la technique des cultures. L’étude des amibes Umax est d’ailleurs un exercice excellent que nous ne saurions trop conseiller pour se préparer à l’étude des entamibes.

A. Obtention de cultures d’amibes du type Umax. — Rien n’est plus facile que d’obtenir des cultures abondantes de ces protozoaires, car, sous forme de kystes, ils se trouvent extrêmement répandus dans la nature (sol, air, eau). Les kystes ingérés par l’homme, soit avec les aliments, soit avec l’eau de boisson, traversent le plus souvent le tube digestif sans subir de modifications. Replacés dans des conditions favorables, ils germent et se multiplient.

Pour avoir des cultures amibiennes, il suffit donc de faire quelques ensemencements de selles de provenances diverses (homme, animaux). Au bout de quelques jours, on constate que des amibes se sont développées dans un certain nombre de tubes ensemencés.

Mais si l’on veut obtenir à coup sûr et rapidement des amibes en abondance on pourra avoir recours à l’un des procédés suivants.

a) A 1 exemple de 11. Mouton, on délaie un peu de terre dans de l’eau. On laisse déposer les grosses particules et avec le liquide trouble obtenu on ensemence largement des boîtes de Pétri contenant de la gélose à 2 0/0 appauvrie par plusieurs lavages à l’eau distillée. A la surface de la gélose, parmi de très maigres colonies bactériennes, apparaissent des amibes que l’on repiquera ensuite sur d'autres milieux.

b) Gomme Musgrave et Clegg on pourra mettre tout simplement dans un ballon 100 à 5oo cc. d’eau à laquelle on ajoute environ 1 cc. de bouillon. Après 1 à 3 jours, il se forme à la surface du liquide un voile qui contient des amibes. On prélève des fragments de ce voile et on les porte sur de la gélose nutritive.

B. Milieux de culture. — Quand on ensemence directement des selles il faut employer des milieux très pauvres en éléments nutritifs afin de ne pas avoir une multiplication excessive de bactéries qui étoufferaient les protozoaires.

Beaucoup de formules ont été indiquées pour fabriquer des milieux de culture. Je n’en donnerai que quelques-unes choisies parmi les plus simples et les plus pratiques.

1. Milieu à la gélose au lui cle Pinoy. — Pour un litre d’eau on prend 20 grammes de gélose et 5o grammes degraines de lin. On chauffe à 1170. On répartit ensuite dans les vases de culture et on stérilise à 1 r5° pendant un quart d’heure.

Ce milieu ne peut être filtré. Pour le débarrasser de ses impuretés ou procédera de la façon suivante. Après le premier chauffage on verse la gélose dans un large entonnoir et on met le tout à l’étuve à 37° de façon à ce que la gélose mette plus longtemps à se solidifier. Tous les corps étrangers tombent au fond, et dès que la gélose a fait prise, on la détache en bloc de l’entonnoir, on coupe le sommet du cône qui contient toutes les impuretés. On fond de nouveau la gélose, on la distribue et on stérilise une fois encore.

2. Milieu de Musgrao'è et Clegg. — Sa composition est la suivante :

Gélose

Chlorure de sodium Extrait de bœuf. . .

Eau distillée

20 grammes.

0,30 à 0.50 cgr.

0,30 à 0,50 cgr.

1000 cc.

On dissout le sel et l’extrait de bœuf dans l’eau distillée ; on ajoute peu à peu la gélose en chauffant sur un feu doux. Quand la gélose est dissoute, ou neutralise en prenant comme indicateur la phénolphtaléine. Lorsque la neutralisation est obtenue, on aléa-

TECHNIQUE POUR L’ETUDE DES AMIBES

linise en ajoutant 10 ce. de solution normale de carbonate de soude à iooo cc. de milieu.

On a ainsi un milieu alcalin à i o/o à la phénolphtaléine.

On porte à l’autoclave, on filtre, on répartit et on stérilise.