Bichlorure de mercure (sublimé corrosif). — Ce sel se

trouve dans le commerce sous forme de poudre cristalline parfaitement stable. Sa solution aqueuse saturée à froid contient environ o p. 100 du chlorure. Il est plus soluble dans Talcool que dans Teau, et en employant de Talcool de 50 à 60 degrés, on obtient des solutions bien plus fortes.

Sa solubilité dans l'eau ou l'alcool est augmentée par l'addition d'acide chlorhydrique, de chlorure d'ammonium, de camphre ou d'iode. Avec du chlorure de sodium il forme un sel double beaucoup plus soluble; Peau de mer peut en dissoudre jusqu'à 15 p. 100 (de là la composition du liquide de Lang).

Les solutions aqueuses se détériorent assez rapidement par la formation d'un précipité pulvérulent très fia. Je ne connais aucun moyen sûr de prévenir la formation de ce précipité. Cependant, pensant qu'il peut être dû en partie à l'ammoniaque de l'air, j'ai pris le parti depuis quelque temps d'additionner mes solutions d'un peu d'acide nitrique, et je m'en suis bien trouvé.

Néanmoins, toutes les fois qu'on veut déployer toute la puissance fixatrice du sublimé, il sera bon de n'employer que des solutions récemment préparées ; et même pour le travail ordinaire il est bon de ne pas préparer de grandes provisions de ce réactif à la fois.

Pour les fixations nous recommandons (et nous croyons que c'est la pratique générale) de prendre des solutions aussi concentrées que possible. La solution aqueuse saturée à froid sufQra le plus souvent ; mais pour les Arthropodes il faudra souvent prendre une solution

alcoolique^ et pour les animaux très contractiles (Goralliaires, Planaires) il faudra souvent avoir recours à des solutions chaudes, même bouillantes.

Il y a très souvent utilité à acidiGer les solutions par l'acide acétique. On peut ajouter sans crainte 1 p. lOO de cet acide (liquide de Këiser). Une solution saturée de sublimé dans de Tacide acétique à 6 p. 100 m'a donné de très bons résultats poMr les animatix marins. Van Beneden a employé une solution saturée dans de l'acide acétique à 25 p. 100.

Il est bon en règle générale, du moins si Ton a employé une solution concentrée, de ne laisser les objets dans la solution que juste le temps nécessaire pour qu'ils en soient pénétrés. La pénétration se constate facilement à la vue de Topacité blanchâtre qui se produit dans les tissus. Elle est très rapide ; les petits objets (et autant que possible on ne doit pas en prendre de gros) sont fixés en quelque minutes ; nous avons trouvé que pour pénétrer une glande salivaire de Chironomus il ne faut pas plus de trois secondes.

On lave à l'eau ou à l'alcool. Nous pensons que l'alcool vaut presque toujours mieux.

Nous ajouterons qu'il est souvent important de ne pas prendre l'alcool trop faible, mais de commencer les lavages par l'alcool d'au moins 70 degrés. On peut y ajouter un peu de camphre, ce qui facilite l'extraction du sublimé. Ou bien ce qui vaut mieux, à cet effet on ajoute à l'eau ou à l'alcool de lavage de la teinture d'iode^ et on en renouvelle l'addition jusqu'à ce que les objets n'en absorbent plus, c'est-à-dire jusqu'à ce qu'ils ne décolorent plus le mélange au bout de quelque temps. Cette pratique a l'avantage de diminuer la tendance qu'a le sublimé à rendre les tissus cassants. Elle sert aussi dans certains cas à faciliter les colorations. On ne doit pas prendre la solution d'iode dans l'iodure de potassium (voy. n** 66).

Il peut arriver que si l'extraction du sublimé a été insuffisante, ce sel vienne à former des cristaux dans les coupes, après le montage dans le baume. On prévient facilement cela en traitant les coupes pendant un quart d'heure par de la teinture d'iode. Si l'on a préféré cette manière de faire, Taddition d'iode à l'alcool de lavage après fixation est superflue, à moins que les pièces ne doivent être gardées longtemps dans l'alcool avant la confection des coupes.

La croyance qu'il est nécessaire de laver par Veau les objets qui ont été traités par le sublimé est une erreur. Il importe que les lavages soient scrupuleusement faits, autrement les tissus deviendront granuleux et cassants. Il faut aussi, autant que possible, ne pas laisser les

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objets trop longtemps dans ralcool, autrement ils peuvent devenir cassants.

On peut colorer avec n'importe quel colorant. II n'est pas même toujours nécessaire que le sublimé soit enlevé des pièces avant de les mettre dans la solution colorante. Ainsi, dans la pratique, il arrive souvent qu'on lave pendant quelques minutes ou une demi-heure dans l'eau, qu'on passe alors les pièces pendant une demi-heure dans du carmin au borax, du picro-carmin, du carmin à l'alun ou de Thématoxyline, et que l'on achève l'extraction du sublimé parles mêmes lavages qui servent à débarrasser les pièces de l'excès de matière colorante. On les passe alors aussi rapidement que possible à travers des alcools successivement plus forts, et, après vingt-quatre heures ou peut les enrober, couper, ou monter en préparations permanentes, selon la méthode que l'on préfère.

Nous pensons que le sublimé corrosif est un fixateur de premier ordrey pourvu toutefois que l'on observe la précaution que nous avons indiquée, de ne le laisser agir que pendant le temps voulu sur les tissus, et de l'en éloigner ensuite rapidement et complètement. 11 est d'un emploi très commode, et permet d'aller très vite. Il permet des colorations très faciles et belles avec le carmin, etc.

Le lecteur se souviendra qu'il ne doit pas employer d'instruments métalliques pour manipuler les objets contenus dans les solutions mercuriques, ces solutions se précipitant immédiatement au contact des métaux. Pour ces objets, il faut se servir d'instruments de verre, d'ivoire, de corne, de caoutchouc, de bois, de piquants de hérisson ou de porc-épic.

Les solutions de sublimé pur, de même que les mélanges mercuriques qui vont suivre, paraissent convenir pour la grande majorité des organismes, excepté les Arthropodes à squelette un peut fort, le sublimé ne pénétrant pas la chitine avec beaucoup d*énergie.

MÉLANGES MERCURIQUES

63. Liqueur de Lang [ZooL Anzeiger, 1878, p. 14). — On prend :

Eau distillée 100 parties.

Chlorure de sodium 6 à 10 —

Acide acétique 5à 8 —

Bichlorure de mercure 3 à 12 —

AluQ (dans certains cas) 0,5 —

Pour des Planaires surtout. On couche les animaux sur le dos et on les inonde du mélange versé brusquement. Ils meurent étendus. On les laisse une demi-heure dans le liquide, et on les passe dans l'alcool.

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Nous avons trouvé ce mélange excellent pour fixer des animaux pélagiques mous, tels que Salpa, Doliolum*

64. — Carnoy {La Biologie cellulaire^ p. 95) recommande les deux mélanges suivants, selon qu'on désire employer un liquide alcalin ou acide.

Liquide alcalin :

Eau distillée 100 parties.

Bichlorure de mercure 5 —

Chlorure de sodium 3 —

Liquide acide :

Eau distillée 100 parties.

Bichlorure de mercure 5 —

Acide acétique 5 —

66. — Les liquides de Harting {Micro, Diction,, art. Préservation) et de Pacini {Journal de Micrographie, IV, i880; Journ. Roy, Mie. Soc, N. S. II, 1882, p. 702) doivent être cités ici, quoiqu'ils ne constituent que des fixateurs peu énergiques et d'une application très restreinte.

Harting prend :

Sublimé 1 partie.

Eau distillée 200 à 500 —

(Pour corpuscules du sang et quelques autres éléments.)

Pacini prend :

1* Sublimé 1 partie.

Sel de cuisine 2 —

Eau 200 —

(Pour Infusoires, globules du sang, spermatozoïdes.)

2* Sublimé 1 partie.

Sel de cuisine 4 —

Eau 200 —

(Corpuscules du sang des Vertébrés.}

3* Sublimé 1 partie.

Acide acétique 2 —

Eau 300 —

Noyaux des tissus des animaux. Ne conserve pas les corps cellulaires. (Pour remploi de ces mélanges comme liquides conservateurs, voyez au chapitre des Liquides additionnels,)

Un liquide contenant 5 grammes de sublimé, 50 centigrammes de chlorure de sodium et 100 ce. d'eau a été cité sous le titre de Solution de Gaule.

66. Liqueur de Gilson {La Cellule^ 1, 1886, p. 87). — Nous don-