POISSONS

573. Poissons osseux. — L'œuf de beaucoup de Poissons osseux peut être étudié à Tétat vivant par transparence ; mais celui des Salmonidés doit être durci et dépouillé de sa membrane d'enveloppe, si Ton veut étudier les formes extérieures de Tembryon. Enfin tous les œufs doivent être fixés avec soin et durcis lorsqu'ils sont destinés à être mis en coupe.

Pour l'étude de la forme extérieure de l'embryon, les œufs sont mis pendant quelques minutes dans de l'eau acidulée par l'acide acétique (1 à 2 p. 100), puis dans une solution d'acide chromique à 1 p. 100. Au bout de trois jours, on enlève la capsule de l'œuf au

moyen de petites pinces fines, en ayant soin d*entamer la capsule du côté opposé au germe ou à l'embryon, pour ne pas les endommager. L'œuf dépouillé de sa membrane est mis dans Teau distillée pendant vingt*quatre heures, puis dans Talcool faible et finalement dans Talcool à 90o. Les embryons ainsi préparés ne sont pas déformés, et leurs éléments histologiques sont à peu. près bien conservés. Mais la masse vitelline devient rapidement très dure et très cassante, ce qui est un grave inconvénient pour la pratique des coupes.

Les procédés suivants donnent d'excellents résultats au point de vue de la préparation des embryons destinés à être coupés.

Les œufs sont placés pendant quelques minutes dans une solution d'acide osmique à 1 p. 100 ; lorsqu'ils ont pris une coloration brun clair, on les transporte dans un vase renfermant de la liqueur de MûLLER. Dans ce liquide chaque œuf est ouvert avec des ciseaux fins; le vitellus, qui se coagule immédiatement au contact de l'eau, se dissout au contraire dans le liquide de MUller ; le germe et la couche corticale peuvent être extraits de la capsule de l'œuf. Le germe ou l'embryon sont laissés dans de la liqueur de Mûller propre pendant quelques jours, puis lavés avec soin dans l'eau pendant vingt-quatre heures ; on les met ensuite dans l'alcool faible^ puis dans l'alcool fort.

Un autre procédé, qui nous a toujours bien réussi, consiste à fixer les œufs dans le liquide de Kleinenberg additionné de 10 p. 100 d'acide acétique. Au bout de dix minutes, les œufs sont ouverts dans de l'eau renfermant 10 p. 100 d'acide acétique qui dissout le vitellus. Les embryons extraits des œufs sont mis pendant quelques heures dans le liquide de Kleinenberg pur, puis dans l'alcool à 60^ à 70^ et à90^

Les embryons durcis sont colorés en masse par le carmin aluné acide, le carmin boracique ou Thématoxyline, et enrobés dans le collodion ou la paraffine.

574. Méthode de Kollmann. — KoUmann recommande beaucoup pour flxer les œufs de Téléostéens un mélange contenant :

Bichromate de potasse 5 p. 100 '

Acide chromique 2 —

Acide nitrique concentré 2 —

(Nous citons textuellement. Nous supposons qu'il faut entendre un mélange de 5 parties de bichromate, 2 d'acide chromique, 2 d*acide nitrique, et 91 d'eau; et non point un mélange à volumes égaux de solutions de ces substances aux titres indiqués.) Les œufs doivent y rester douze heures. On les lave à Teau pendant douze heures. On enlève alors le chorion, et on les

met dans de Talcool, à 70 degrés. KoUmann fait observer qu'il est important que ces œufs soient fixés très rapidement. Voyez VArch, /*. Anat. u. PhyitioL, de His et Du Bois-Reymond, 1885, p. 296.

575. Méthode de Kupffkr (Arch, f. Anat. u. EntwicL, 1884, p. 20).— KupfTer place les œufs dans une solution d'acide chromique à 1/3 p. 100, pendant vingt-quatre heures, puis pour deux heures dans Teau distillée. On enlève la capsule de Tœuf. Eau. Alcool. Coloration. Coupes.

576. Méthode de Rabl (voir n® 553). — Méthode de Perenyi (voir no 51).

577. Méthode cTAgassiz et Whitman {Proceed, of the American Acad, of arts and sciences, XX, 1884). — Les œufs sont placés dans un verre de montre, dans quelques gouttes d'eau de mer à laquelle on ajoute une quantité égale d*une solution d'acide osmique à 1 p. 100. Après cinq à six minutes, les œufs sont transportés dans le liquide de Merkel, modifié par Eisig (n*^ 53). On les y laisse pendant vingt-quatre heures ou plus. On peut alors séparer le blastoderme du vitellus à Taide d'aiguilles. Pour les stades plus avancés du développement, les auteurs préfèrent Temploi du liquide de Perenyi. Voir aussi WmiMAN, Methods, etc., p. 152, et Journ.Roy. Mie. Soc, 1883, p. 912.

678. Méthode de GoRONOwiTScn {Morph. Jahrb,, X, 1884, p. 381).

— Pour obtenir des vues en surface, l'auteur met les œufs dans une solution d'acide nitrique à 5 p. 100 jusqu'à ce que l'embryon devienne visible à travers la membrane (au bout de trois minutes), puis il les place dans une solution d'alun à 5 p. 100. Au bout d'une heure le vitellus est transparent et l'embryon se détache sur lui en blanc. On coupe la membrane de Tœuf dans la solution d'alun et on la sépare de l'embryon. Si Ton veut conserver la préparation, on la monte dans la glycérine à 10 p. 100, à laquelle on ajoute une petite quantité de sublimé.