TUNICIERS

581. Ascidies (Maurice et Sciiulgin, Ann. Se. Nai.^ Zool., XVII, 1884). — Les embryons A'Amarœcium^ préalablement retirés de la cavité incubatrice de leur mère, sont colorés au carmin boracique, décolorés par l'acide chlorhydrique, puis lavés dans Talcool à 70^. Ensuite on les met pendant quinze à vingt heures dans une solution extrêmement faible de bleu de Lyon dans Talcool à 70^ additionnée de quelques gouttes d'acide acétique. Après coloration, éclaircir rapidement et inclure dans la parafûne. Ce procédé est surtout recommandable pour la facilité avec laquelle il permet de distinguer les trois feuillets de l'embryon. L'ectoderme prend une coloration beaucoup plus foncée que l'endoderme, ces deux feuillets paraissant surtout bleus, tandis que les cellules mésodermiques, à cause de leurs noyaux volumineux, semblent presque entièrement rouges.

582. Distaplia (Davidoff, Mîtth. Zool. Stat, Neapel, IX, 1, 1889, p. 118). — Le meilleur fixateur pour les œufs est un mélange de 3 parties de solution saturée de sublimé avec 1 partie d'acide acétique cristallisable. Laisser agir unedemi-heure.ou une heure, passer par l'eau et les alcools. Un autre mélange presque aussi bon consiste en 3 parties de solution saturée d'acide picrique, et 1 d'acide acétique, qu'on laisse agir pendant trois à quatre heures et porte ensuite dans l'alcool kJO p 100.

mollusques

583. Céphalopodes (Ussow, Arch. de Biologie, II, 1881, p. 88â). — Les œufs (du Loligo vulgaris) sont placés, sans qu'on ait enlevé le chorion, dans une solution d'acide chromique à 2 p. 100, pendant deux minutes, puis l'œuf est mis dans un verre de montre rempli d'eau à laquelle on ajoute une goutte d'acide acétique. Au bout de deux minutes on peut enlever facilement le chorion. Le vitellus de nutrition se répand dans l'eau ; le vitellus de formation, ou le blastoderme, qui a été seul durci par l'action rapide de Tacide chromique, reste seul et peut être coloré par le carmin et monté dans la glycérine.

346 CHAPITRE XXIY

Watasé {Journ. of Morph., IV, 1891, p. 249 ; Journ. Roy, Mie. Soc. y 1892, p. lo2) fixe dans le liquide macérateur des Hertwig, (n^ 512), et aussitôt que le blastoderme est devenu opaque il Tenlève avec des ciseaux dans de la glycérine diluée. Le liquide de Perenyi donne de bonnes images superficielles de la segmentation.

584. Hélix. — Nous avons obtenu de bonnes préparations d*embryons à! Hélix en opérant de la manière suivante : les œufs sont mis dans le liquide picro-nitrique (n^ 77) pendant quatre à six heures. Le carbonate de chaux qui incruste la membrane extérieure est dissous et Tenveloppe albumineuse de Tœuf est coagulée. On ouvre l'œuf avec des aiguilles; Talbumine se détache par fragments et on peut facilement extraire Tembryon. Celui-ci est traité successivement par l'alcool à 50^, 70® et 90<>, puis coloré par le carmin borate alcoolique ou rhématoxyline et monté dans la paraffine après avoir été déshydraté et traité par l'essence de girofle ou l'huile de cèdre.

585. Limace {Limax campestris). Méthode de Mark {BulL Mus. Comp. ZooL Hai^ard Coll., VI, 1881). — Les œufs sont traités par l'acide acétique à 1 à 2 p. 100 pendant quatre heures ou plus. On prend l'œuf entre le pouce et l'index de la main gauche, on introduit la pointe d'une paire de ciseaux fins à travers les deux membranes externes, et on pratique une ouverture suffisante pour que la membrane résistante de Talbumine s'échappe avec son contenu. On place l'œuf sur une lame de verre avec une goutte d'eau et on enlève les enveloppes extérieures. Des portions de l'enveloppe semi-fiuide restent attachées à la surface de la membrane résistante. Sous une loupe à disséquer on enfonce une aiguille à travers la membrane résistante et on maintient l'œuf, tandis qu'avec une autre aiguille on déchire la membrane pour faire sortir l'œuf avec l'albumen. On sépare l'œuf de l'albumen; on colore et on monte à la glycérine.

Pour les stades plus avancés du développement et pour pratiquer des coupes, on traite par l'acide osmique au lieu d'employer l'acide acétique, et on durcit les enveloppes albumineuses en même temps que l'œuf.

Voici les procédés recommandés par Henchman {Bull. Mus. Comp. Zool. HarmrdColl., XX, 1890, p. 171 ; Journ. Roy. Mie. Soc., 1891, p. 274) pour le traitement des embryons de L. maximus. On récolle une trentaine d'individus adultes et on les met dans un seau de ferblanc muni d'un couvercle percé de trous. On les nourrit de choux en ayant soin de les tenir très proprement. On trouve les œufs en géné-

MÉTHODES EMBRYOLOGIQLES 3 H

rai le malin, disposés par paquets. Dans un local chaud l'éclosion a lieu entre le vingt-deuxième et le vingt-septième jour. Il faut bien veiller à ce que les œufs ne se dessèchent pas. Fixation par Tacide chromique à 0,33 p. 100 ou par le liquide de Perenyi. Il vaut mieux n'enlever que l'enveloppe externe avant de mettre les œufs dans le liquide ; après un séjour de deux ou trois minutes dans le liquide, l'enveloppe interne peut être enlevée. Cependant si l'on emploie le liquide de Perenyi il est nécessaire d'éloigner les deux miembranes en premier lieu, sinon l'albumine sera coagulée d'une façon qui empêche de sortir les embryons.

Voir aussi Schmidt, Studien zur Entwickelungsgesch, d. Pulmo-naten, Dorpat, 1891 ; et Wasuburn, Amer. NaturaL^ XXVIII, 1894, p. 528, ou Joum, Roy, Mie. Soc, 1894, p. 531.

686. Gliiton. Voir Metcalf, Stud. BioL Lab. John Ifopkins Univ., V, 1893, p. 251 ; Joum. Roy. Mie. Soc., 1894, p. 129.