PROCÉDÉS D'ASÀLVSE PAR FERMENTATION

uièlie OU hibe pradué et Terme A l'une àe ses exli-étnilés. On remplit ce tube d'urine et de levure de bière, puis on le retourne sur une couche â mercure. L'acide carbonique, en se déjugeant, s'accumule dans l'eudiomètre et déprime le liquide. Celte dépression, qui est en raison la Termentation, ne se limite que loi'squ'elle est achevée ou arrêtée.

Il faut pour obtenir la fermentation se placer dans des conditions spéciales de chaleur et d'humidité. La température qui parait la plus favorable à son développement est une température de 25" à 30°. A une température plus élevée on pourrait avoir à redouter le développement de la fermentation lactique, ou la suspension de toute t'ermenlalion, Il faut en outre que le liquide fermentescibic ne soit pas trop concentré, que la quantité de sucre ne dépasse pas 15 pour lOt), suivant Leconle. Si la quantité en est plus considérable on devra donc l'étendre d'eau avani de le soumellre à la fermcDlation. Lorsque la dilution est trop étendue pour que la fermentation donne des résultais satisfaisants, certains auteurs ont conseillé de concentrer l'urine. Mais il faut se garder d'avoir recours à ce moyen, attendu que l'urée de l'oxalate d'urée, en excès dans un liquide, s'oppose à son développement (Bence Jones). Il est préférable dans ces cas d'avoir recoui's A un autre procédé d'analyse.

Il est parfois essentiel, comme le conseille Lehmann, d'ajouter à cette urine un peu de taitrate de potasse. On prévient ainsi la fermentation acétique.

La fermentation peut se développer spontanément dans un liquide sucré. Il trouve dans les milieux ambiants les sporules, destinées à agir comme ferment. Mais pour que cette fermentation ait son vrai caractère, pour qu'elle se développe rapidement, it faut la provoquer, en ajoutant au liquide fermentesrible de la levure de bière. Il faut se garder toutefois d'en ajouter une trop gj'ande quantité, attendu que pour le dosage cet cncès de levure pourrait donner lieu à l'erreur. Pasteur pL Lieliig ool démontré en

effet que si la levure est en excès, après avoir provoqué la fermentation des substances fermentescibles, elle subit ellemôme la fermentation et fournit à ses dépens de Tacide carbonique qu'on pourrait, dans le cas particulier, regarder à tort, comme provenant du sucre.

Seegen a fait sur Turine et sur des solutions aqueuses, plus ou moins saturées de sucre, des expériences nombreuses qui confirment toutes ces assertions. Pour que la fermentation qui se développe dans une urine ait, au point de vue du sucre, une valeur diagnostique importante, il faut enfin et tout d'abord qu'elle se produise rapidement. Une urine qui dans les deux premières heures de l'expérience ne donnerait pas 20 et 30 7* de gaz, ne devrait pas être regardée comme une urine sucrée (Leconte).

Lorsqu'elle ne se produit que lentement, elle doit paraître suspecte et peut tenir au développement de gaz qui résulte du dédoublement d'une tout autre substance que le sucre. Neubauer, Seegen et Van Deen n'ont-ils pas démoniré que l'urée était susceptible de se dédoubler et de donner lieu à de l'acide carbonique. D'autre part on sait que l'albumine en se décomposant peut donner lieu à des gaz. Aussi doit-on s'assurer dans ces cas que le gaz formé est bien de l'acide carbonique et non de l'hydiogène carboné (Hupperl), et que le liquide contient de l'alcool.

Pour reconnaître. la nature du gaz acide carbonique on a généralement recours à la propriété qu'il possède d'éteindi'e les corps en ignition. On plonge alors une bougie allumée dans l'eudiomètre qui le contient. Si la bougie continue à brûler., il faut rejeter toute idée d'acide carbonique. Il peut se faire qu'elle s'éteigne au bout d'un certain temps el que réprouvette contienne encore, bien que diminuée, une certaine quantité de gaz; c'est qu'il s'est formé dans le cours de la fermenlxition un peu d'hydrogène carboné. On peut aussi |reconuaître ce gaz, à l'aide de la potasse en crayon qui, en se combinant avec lui, permet au liquide de remonter jusqu'à l'extrémité fermée de l'eudiomètre.

PROCÉDÉS PflYSlQt'ES. 99

Quel que soit le procédé qu'on emploie pour examiner Turine, à l'aide de la fermentation, il est de toute nécessité, lorsqu'elle contient de l'albumine de l'en débarrasser, si l'on veut se mettre à l'abri des erreurs que peut produire le gaz résultant de sa décomposition (Huppert). Il n'est pas moins nécessaire de la débarrasser de l'urée.

Le dégagement de l'acide carbonique n'est pas la seule preuve qu'on ait du développement de la fermentation. II en existe une autre dans la présence de l'alcool qui reste dissous, en proportion définie, dans le liquide qui a servi à la fermentation, et dont on peut constater la présence, môme en quantité insignifiante, à l'aide de l'îodoforme de Liebcn, ainsi que l'a fait voir Iluizinga. Mais, quoi qu'il en soit, il est des cas où la fermentation est insuffisante pour le dosage qualitatif de l'urine sucrée; ce qui tient au coefficient d'absorption du liquide pour le gaz produit, ce coefficient augmentant par la pression, et la production de l'alcool. Aussi pourra-t-on n'avoir que des quantités insignifiantes d'acide carbonique, lorsque le sucre est en petite quantité. Pour que la fermentation donne un résultat significatif il faut que l'urine coutienne au moins 0,50 centigramme de sucre par 1000 (Garrod) (i). Lorsqu'il n'en est point ainsi, il faut avoir recours à des procédés plus sensibles.

Les procédés physiques sont basés, comme nous l'avons dit, sur la propriété que possède le sucre d'augmenter la pesanteur spécifique des liquides qui le tiennent en dissolution, ou bien sur la propriété qu'il communique à ces liquides de dévier la lumière polarisée (Roberts)(2). Ces procédés sont loin d'avoir toute la valeur qu'on leur a prêtée

(I) Garrod A., loc. cit.

ii) Roberts, On ur'mary and rénal diseases. London, 1870.

Procédé d'analyse par densimétrie.

La pesanteur spécifique de l'urine chez les diabétiques est généralement augmentée. Aussi a-t-on cru pouvoir utiliser cette modification de l'un des caractères de Furine pour afiirmer la présence du sucre. Mais celte prétention n'a pu tenir devant les obsei'xations récentes qui ont démontre' que la pesanteur spécifique d'une urine peut être notablement augmentée, sans qu'elle contienne trace de sucre. II en est ainsi par exemple dans les cas d'azoturie.

Il n'est pas rare en effet de voir des malades atteints d'azoturie, dont l'urine non sucrée marque 1030, 1045 et même 1050 à l'aréomètre. Celle augmentation de la pesanteur spécifique est même si prononcée dans l'azoturie; elle en constitue un caractère si marqué, qu'elle a inspiré à Haugliton l'idée de construire des tables, permettant de doser la quantité de l'urée, en se basant sur les modifications que cette substance imprime à la pesanteur spécifique. En admettant que ce caractère puisse être utilisé pour reconnaître la présence du sucre dans une urine il n'aurait donc, par ce fait seul qu'on peut le rencontrer dans d'autres circonstances, qu'une valeur tout à fait secondaire. Ce qui diminue encore l'importance de ce caractère, c'est qu'il peut se faire aussi que des urines diabétiques, bien que sucrées, n'aient qu'une pesanteur spécifique peu marquée. II en est ainsi lorsque la polyurie est intense, le sucre rendu par le malade est dilué dans une grande quantité d'urine, et ne peut alors lui communiquer qu'une pesanteur spécifique relativement peu élevée (Môsler) (1). Nous aurons à revenir sur la valeur de ce procédé, à propos des dosages du sucre, mais disons dès maintenant que si, au point de vue de l'examen

(1/ Md>lcr. Zur Thérapie des Diabètes mellitus. Art. des Ver. f. Gemeinschaft Arbeiten. GoUingen, IHST).

PROCÉDÉS D*ANALYSB PAR LE POLARIMÈTRE. 101

qualitatif, la pesanteur spécifique élevée d'une urine permet de soupçonner Texistence de la glycosurie, elle n'autorise nullement à Taffirmer, comme ont pensé pouvoir le faire certains auteurs.

Procédés d'analyse par le polarimètre.

C'est Biot (1) qui le premier a conseillé l'usage du polarimètre pour reconnaître dans un liquide la présence du sucre. C'est lui qui le premier a fait voir que si les substances inorganiques sont impuissanteç à agir sur la lumière polarisée, il n'en est pas de même des. substances organiques, telles que le sucre, le mucus, et l'albumine. La polarisation constitue un moyen très-utile et très-expéditif pour reconnaître la présence de ces substances dans un liquide et pour en apprécier les changements. L'expérimentation est fort courte, et elle a l'avantage de ne pas entraîner de perte de liquide.

Une des premières conditions que réclame l'examen d'un liquide, à l'aide du polarimètre, c'est qu'il soit décoloré car si la couleur jaune permet encore cet examen, bien qu'en l'empêchant d'être tout à fait exact, les teintes foncées rouges ou brunes s'y opposent complètement.

Lorsque l'urine ne se présente pas à l'état de décoloration et de pureté relatives que nous avons supposées, il faut donc, avant de la soumettre à l'action du polarimètre, lui faire subir les opérations nécessaires pour obtenir sa décoloration, et la débarrasser des substances étrangères, qui pourraient modifier les résultats de la polarisation. La décoloration peut s'obtenir à l'aide de l'acétate de plomb ou de charbon. Bouchardat conseille ce dernier moyen recommandé par Cl. Bernard. Seegen, comme Robiquet, préfère de beaucoup avoir recours à l'acétate de plomb et à l'ammoniaque, qui

(i) Biot, Gaz. méd. de Paris, 1845.

iùi DIABÈTE SUGRÊ.

n'auraient pas l'inconvénient du charbon, cette dernière substance, en décolorant l'urine, lui enlevant une partie du sucre, qu'elle contient. Mais le précipité de plomb entraioant du sucre, l'acétaledeplombnousparîiîtenrore inférieur audiarbon.

La pureté de l'urine n'est pas moins nécessaire à la netteté des résultats que sa décoloration. Il est en effet telle ou telle substance que peut contenir l'urine, qui dévie la luraièi'e polarisée dans le même sens que le sucre, comme les acides biliaires. Il en est d'autres qui la dévient en sens contraire, comme l'albumine, et la quinine (Jordaô) (1). Si on ne procédait pas à l'extraction de ses substances, on pourrait dans le premier cas attribuer au sucre une étendue de déviation qui lui serait tout à fait étrangère, et dans le deuxième cas on pourrait être porté à nier l'existence du sucre, par le fait seul qu'il existe en excès dans l'urine une substance qui, en agissant sur le polarimètre, dans un sens tout à fait opposé à celui du sucre, en neutralise complètement les effets. Il est des cas enfin dans lesquels le polarimètre est insuffisant quelque précaution que l'on prenne.

Lehmann, Kuhne, et Winogradow qui ont appelé l'attention sur ces cas de diabète, où l'urine souvent bien qu'assez sucrée ne donne au polarimètre que des résultats incomplets ou insijîniliants, pensent qu'ils sont dus à cette substance encoi*e indéterminée qu'ils ont décrite chez le diabétique et qui s'opposerait à l'action du siicre sur cet instrument.

Seegen alllrme qu'en tout état de cause il est impropre à déceler des quantités de sucre inférieures à 0,20 ou 0,30 pour 1000 d'urino.

Ces faits établis, il nous reste à signaler que l'étendue de la déviation dépend de la température extérieure, de l'ancienneté de l'urine qu'on examine, des manipulations auxquelles on l'a soumise, à mentionner aussi qu'elle est moins considérable, si l'urine a été chauffée.

il) Jonl<iu, loc. cit.

PRO(*i:DÊS CHIMIQUl!;S. 103

Les polarimèlres qu'on emploie le plus souvent sont ceux de Mischerlich et de Soleil. Iloppe-Seyier etNeuschler(l), leur préfèrent l'appareil de Wild (2).

Dosage ou examen quantitatif des urines sucrées.

Les différents procédés que nous venons d'indicpier pour reconnaître dans une urine la présence du sucre, sei'vent également à en apprécier la quantité. Lorsqu'ils sont utilisés à ce point de vue, ils prennent le nom de procédés de dosage. Il y a donc des procédés de dosage chimiques et physiques, c'est-à-dire des procédés de dosage par l'emploi des réactifs chimiques, des procédés de dosage par fermentation, par densité spécifique et par polarisation. Nous allons indiquer sommairement quel est le mécanisme opératoire de ces différents procédés. Nous verrons ensuite quelle en est la valeur respective.

Procédé Fcsiiiias. — Les résultats que donne le dosage des substances sucrées à l'aide de la liqueur de Fehling, qui n'est autre que le réactif de Trommer modifié, seraient suivant quelques auteurs, Beale par exemple, préférables à ceux que fournissent et la fermentation et la polarisation. Entouré de moins de chances d'erreur, lors même que ce réactif est manié par une main inexpérimentée, ce procédé donnerait des résultats plus exacts. Il suflit, pour utiliser ce procédé de dosage, d'être fixé sur la capacité de réduction de la liqueur qu'on emploie. Or, la liqueur de Fehling est préparée de telle sorte que 10 centimètres cubes de cette liqueur sont réduits par 5 centigrammes de glycose.

(1) Neuwhlcr, Edm., Ueber optische Hamtuckerprobfn. (Arcli. f. physiol. Hcilk. N. F. Il, 185S). — BeÀtrag iur KenntnûfS der einfachen uni der ZuçkerfuhreruUn Hamruhr. (Arch. f. gemein. Arbeitcn. Gœlliiigen, 1861.)

(t) Wild, The ioccharo^lariscope. (Microscop. journal, XIIUI, 1860.)

lOi DIABÈTE SUCRÉ.

Pour opérer, on charge de ce réactif une burette de Mohr; on cliauiïe, dans une capsule ou dans un matras, une quantité déterminée d'urine à analyser; on y laisse couler goutte à goulte la liqueur de Fehling, et Ton agite de temps en temps le mélange. On ne doit s'arrêter que lorsque de nouvelles gouttes de la liqueur de Fehling arrivant sans se décomposer dans le liquide, ce liquide commence à se colorer en bleu. Il suffît alors, pour connaître la quantité de sucre renfermée par l'urine, de voir quelle quantité on a employée de liqueur de Fehling. Le liquide urinaire expérimenté contiendra autant de fois 5 centigrammes de sucre qu'on y a versé de fois 10 centimètres cubes du réactif. Que celte urine ait nécessité 20 centimètres cubes pour que tout le sucre en soit réduit, c'est qu'elle contenait 10 centigrammes de sucre. Comme on a, au préalable, déterminé la quantité de l'urine employée, si, par exemple, on a pris 50 centimètres cubes, la totalité de l'urine, rendue par le malade en 24 heures, contiendra autant de fois 10 centigrammes de sucre qu'elle contient de fois 50 centimètres cubes d'urine. Si le malade en rend 10 litres, la quantiié de sucre contenu dans cette urine sera de 20 grammes par jour.

On a apporté quelques modifications à ce procédé. Pour obtenir des résultats plus précis, on conseille de laisser tomber goulte à goutte l'urine à examiner dans le mélange litre de soude et de liqueur de Fehling. On évite ainsi les perles en sucre que ne peut manquer de produire l'alcalinité du mélange, tombant goutte à goulte dans l'urine.

Lorsqu'il s'agit de doser, à l'aide de ce procédé, de faibles quantités de sucre, il est essentiel avant de procéder à l'opération de débarrasser l'urine de toutes les substances qui pourraient nuire à l'exactitude des résultats. Nous ne mentionnerons pas à nouveau ces substances que nous avons énumérées plus haut, à propos de l'analyse qualitative de l'urine. Nous n'examinerons pas en ce moment les moyens à employer pour a •! iver à leur élimination, nous nous conten-

fROCRDËS CRIMIQCES.

terons sculetnpnl de ilire que i^'esl loi'squ'on s'esL mis dans ces conditions, lorsqu'on a suDisammenl rlilué l'urine, qu'on est à même d'obtenir de la liqueur de Fehling, les n''sullals les plus précis, et, ces résultats alors même qu'ils n'approchent en rien de ceux qu'obtenait Tron:rner ilaos ses expérimentations sur la réduction du cuivre par des solutions de glyrose, sont sulfisanls toutefois pour permettre de reconnaître de faibles quantités de sucre,

Trommer a cherché en effet, voulant préciser la valeur de ce procède, a lormuler par des chiffres la quantité de sucre qu'il permet de reconnaître. Pour cet auteur on pourrait encore avec ce procédé constater un dépôt d'oxydulc dans un liquide qui ne contiendrait que 1/100 000 de sucre et une modiliciition de la teinte, alors que la proportion de sucre tomberait A l/I 000 000. La nénéralilé des auteurs n'est point arrivée à de tels résultats, toutefois on s'accorde ^énéi-alcmentA vanter la valeur de ce procédé. Ainsi Lange (\) et SchifF ont vu qu'à l'aide de ce procédé on pouvait reconnaître dans un liquide de 1/20 à 1/30 pour 100 de sucre (0,0!ï à 0,0.'ïr>), à une température inférieure â IVbuUitron et même 1/80 pour 100 (0,015) en prolongeant quelque peu l'ébuUition.

Lorsque c'est dans l'urine qu'on recherche (e sucre, i\ l'aide de ce procédé, on est loin de constater un tel degré de précision. Dans une urine normale on ne peut guère constater plus de 0,25 â 0,35 de sucre pour 1001); dans une urine aqueuse on peut arriver A reconnaître 0,15 (1/7 0/0), (Bence et Jones Neubauer) et même 0,05 (1/2 0/0). C'est à peu prés A la même conclusion qu'est arrivé Seegen. Il résulte en eUel de ses recherclies qu'on ne peut guère espérer de découvrir le sucre dans une urine, A l'aide de ce piocédé, lorsqu'il ne s'y trouve pas au moins dans la proportion de 0,02 A 0,03 pour 100. Lorsque la quantité de sucre est in-

(tj Lange, Diabetea iiullilut. iDeaUcbe Klinik, 185 .)

106 D1ABÊT£ SUCRÉ. •

férieure à 0,02 pour 100 on n'obtient plus qu'une décoloration (licliroïquc tout à fait insuffisante pour le dosage.

Procédé Wo^ei. — Le procédé que conseille Yogel pour apprécier la quantité de sucre que contient une urine e$t basé sur la teinte plus ou moins foncée que communique à un liquide le sucre, traité par la potasse. C'est un dosage par coloration. Voici comment il procède : il prépare des types de coloration connus, et établit avec ces types une échelle de coloration graduée de telle sorte que la coloration de tel type (Correspond, par exemple, à i centigramme de sucre par centimètre (*ube ; celui qui vient au-dessous d'une coloration par conséquent moins vive, ne renfermerait que 5 milligrammes de sucre par centimètre cube. On peut continuer, de cette manière, à avoir des types de coloration ascendants ou descendants. Une dizaine suffit.

Pour construire celte échelle de types de coloration, on prend des tubes ayant tous le même diamètre, la même capacité. Vogel prend des tubes de 250 à 500 centimètres cubes. Ces tubes choisis, on prépare une solution de sucre contenant, par exemple, 1 centigramme par centimètre cube. On trail(î cette solution par la potasse, et l'on obtient une coloration brune. Cette coloration est celle que la potasse donne à un liquide qui contient 1 centigramme de sucre par centimètre cube. Si avec ce liquide on remplit la moitié seulement du tube suivant, et qu'on Tétende d'eau, de manière à ce que le tube soit entièrement plein, on aura un tube contenant un liquide dont la coloration est de moitié moins intense que celle du tube précédent. Ce liquide ne renferme plus que 5 milligrammes de sucre par centimètre cube, et sa coloration est en rapport avec la quantité de sucre qu'elle contient. On peut, on le compœnd, multiplier à rinlini le nombre de ces tubes, dont la coloration variera, avec la quantité plus ou moins grande de sucre, contenu dans la solution. On a ainsi des tubes colorés dont le liquide

PROCÈDES aiIMIQUes. 1U7

cOQtienL, par centiiuèti-e cube, 5 œntiprammes de siine, 1 ceDli^rammo 5 miUigraniincs, elc. Lorsqu'oa veut, à l'aide de cette ét!tielle de cotoialioo graduée, doser la quantité de sucre contenu dans une unni> on prend une quantité détet'liiinéc de cette urine, 10 centimètres cubes, par exemple; on les cbaufle avec de la potasse, et l'on obtient une coloralion dont il s'agit d'apprécier la valeur. On mot cette urine lolorce dans un tube analo(;ue à ceux qui contiennent ces diflérentcs solutions de sucre, préparées à l'avance. Il est i-are que celte coloration soit tout à fait la même que celle dt* l'un ou lie l'autre de ces tubes. Elle est, par exemple, moins intense que celle des tubes qui contiennent ô centigrammes de sucre par centimètre cube. Elle l'est plus que celle des tubes qui contiennent 1 centigramme par c«nlinièU'e cube. On étend d'eau le mélange, qu'on expérimente jusqu'à ce que sa teinte soit celle du liquide qui contient uu centigramme de sucre par centimètre cube. Si, par exemple, on a été obli(;é d'ajouter 20 centimètres cubes pour arriver à ce résultat, c'est que l'urine dont on veut connaître la rapacité sucrée, contient 3 centigrammes de sucre par centimètre cube, c'est-à-dire 30 grammes de sucre par litre.

Ce procédé a l'avantage, les types de coloration constitués, d'être trés-expéditif, et son exactitude est d'ordinaire sutlisanle pour apprécier tes variations qui peuvent subvenir d'un jour à l'autre, dans une urine sucrée. Le seul travail un peu lon^ qu'il nécessite ent la construction de ces didérfiils types de coloration, qui, une lois étidtlis, peuvent se conserver très-longtemps, des mois, des années, lorsqu'on a la précaution de tenir ces tubes fermés, dans un endroit froid, et, à l'abri de la lumière.

Toutefois on ne saurait dans tous les cas se contenter de ce mode opératoire. U faut comme pour le précédent lorsqu'il s'agit d'apprécier de fail)les quantités de sucre, débarrasser l'urine qu'on veut examiner de toutes les substances qui pourraieat nuire à l'opération. Mais alors même qu'on

a pris ces précautions il ne faut pas s'attendre, à Taide de c^} procédé, à un degré de précision aussi gi*and qu'avec le procédé précédent. Gaillard cependant n'hésite pas à le regarder comme d'une sensibilité presque îiussî grande que le procédé de Trommer. Pour nous il est bien inférieur à ce dernier procédé. Aussi ne le plaçons-nous qu'en seconde ligne. On ne peut guère l'employer que lorsque l'urine contient une assez grande proportion de sucre. Garrod a démontré qu'elle devait en lîontenir au moins 0,50 à 0,75 pour iOOO pour qu'on puisse à l'aide de ce procédé en doser la quantité.

FeraicBtatioB. — La fermentation qui, ainsi que nous l'avons vu, peut être utilisée pour reconnaître dans une urine la présence du sucre peut servir également pour en doser la quantité. Les résultats que donne la fermentation sont basés sur ce fait qu'un équivalent de sucre diabétique représenle 2 équivalents d'alcool et 4 équivalents d'acide carbonique. En déterminant dans une quantité d'urine donnée, la quantité d'acide carbonique, résultant de la fermenlation, on pourra arriver à en déduire la quantité de sucre contenue dans celte urine, sachant que 100 parties d'acide carbonique correspondent à 204,54 parties de sucre.

Pour faciliter le développement de la fermentation et pour en utiliser les résultats on peut avoir recours à de nombreux procédés. Le plus simple de tous est sans contredit celui qui consiste dans l'emploi de Teudiomètre doni nous avons déjà parlé, à propos de l'analyse qualitative.

Ce procédé très-simple consiste à mettre dans un tube qui, pour l'analyse quantitative, doit être calibré et gradué un mélange déteririiné d'urine cl de levilre de bière. On retourne ce tube fermé à l'une de ses extrémités sur une couche à meicure, et l'on attend les résultats de cette fermentation. Ces résultats ont pour caractère lorsqu'ils tiennent à un dédoublement du sucre de se produire rapidement. Au fur el à mesure que se développe le gaz acide carbonique il gagne

PROCËDËS CBIHIQGES. 109

Ii's parties supérieures du tiibi; et dûprime le liquide con- U;nu dans le tube. L'opération lorininée, ce donl on peut ôlre assuré lorsqu'on ne voit plus autcEnentcr la dépression du liquide, on mesure la quantité de g'az développé dans le tube, à l'aide des graduations qui sont marquées sur ses parois. Pour se mettre à l'abri de toute cause d'erreur, il faut tenir compte dans cette détermination de la pression barométrique et du degré de température auquel on opère. Mais ces précautions ne suilisent pas, il faut encore, si l'on veut obtenir des résultats certains cl tout à fait exacts s'assurer d'abord que loul le gaz développé est bien formé d'acide carbonique, on en a la preuve en introduisant dans l'eudiomètre un crayon de potasse. Si tout le gaz est formé d'acide carbonique, il est proiuptement absorbé par la potasse. S'il n'csL qu'incomplètement résorbé c'est qu'en riiêine temps qu'il s'est produit de l'acide carbonique il s'est dégagé du liquide un autre gaz, de l'hydrogène carboné par exemple et il faut en tenir compte.

Il faut tenir compte en outre de la somme d'acide carbonique qui reste dissous dans le liquide. Pour établir cette proportion il suffit de se rappeler le coelHcienl de dissolution de l'eau alcoolisée pour l'acide carbonique. Or on sait que le coefficient de dissolution qui pour l'eau pure est (l,969à 16°B est trois fois plus considérable pour l'alcool. On pourra donc regarder comme rationnel de supposer que la quantité d'acide carbonique, absorbé par le liquide, est au moins égal au volume du liquide expérimenté. I La détermination alcalim étriqué qu'on peut l'aire à l'aide l>de l'appareil de Will-Fresenius donne des résultats trop P* imparfaits pour que nous Je conseillions.

L'appareil de Scegen nous semble préférable. Gel appareil qui n'est autre que celui de Liebi^, consiste en une curnue

k fermée bcrmétiquement par un bouclion de liège ou de caoutchouc. r.c bouclion est percé de deux trous. Par l'un àe ces trous passe un lube fermé i!i son extrémité supérieure

1 10 DIABËTE SUCRÉ.

et dont rextrémité ouverte plonge jusqu'au fond du liquide. L'autre trou donne passage à un tube recourbé qui communique avec un autre tube renfermant du chlorure de calcium, traversant un appareil de potasse liquide et contenant enfin à son autre extrémité de la potasse en crayons. On met dans cette cornue une quantité déterminée d'urine à examiner et de levure de bière. De ce liquide s'échappe du gaz acide carbonique qui passe dans le tube ouvert ou qui s'accumule dans le tube fermé.

L'opération terminée on casse l'extrémité supérieure du tube fermé et Ton aspire par le tube ouvert. On chauffe en* suite lentement de manière à chasser du liquide de la cornue tout le gaz qui s'y trouve. Cette opération terminée, on pèse la potasse liquide et la potasse en crayons déjà pesées avant l'opération. La différence de ces deux pesées indique la quantité d'acide carbonique absorbée par la potasse et par suite la quantité de sucre correspondant à la somme d'acide carbonique produit.

On pourrait encore avoir recours aux procédés de Leconte, de Bernard, de Lchmann, et de Brucke. Nous n'entrerons pas dans la description de chacun de ces procédés.

Neubauer et Vogel pour produire la fermentation alcoolique rejettent l'eudiomètre et lui préfèrent un appareil qui du reste porte leurs noms. Ils prennent deux ballons en verre de même grandeur. Ils mettent dans l'un de ces ballons une quantité déterminée d'urine ; par exemple 20 à 30 ce. d'urine, ils y ajoutent de la levure et un peu de tartrate de potasse. Ils remplissent le deuxième ballon jusqu'à sa moitié d'acide sulfurique pur destiné à débarrasser l'acide carbonique, venant de la fermentation, de toute l'eau qu'il peut entraîner avec lui. Ces deux ballons sont fermés par des bouchons qui laissent passer d'une part un tube en U qui les met en rapport, mais de telle sorte que la branche du tube qui pénètre dans le ballon à urine n'arrive qu'à la surface de ce liquide, tandis que l'autre branche qui pénètre dans

PROCÉDÉS CHIMIQUES. Ht

l'autre ballon plonge dans l'acide sulfnrîqin' qu'il ronlîent. Ce tube en U est destiné à permellre à l'acide rarbooique, formé dans le premier ballon , de s'ccbapper dans le deuxième ballon et de s'y laver dans l'acide sulfurique.

Les bouchons qui ferment, ces ballons sont d'autre part percés chacun d'une deuxième ouverture qui sert de passage dans le premier ballon à un tube en verre qui plonge jusqu'au fond du liquide. Ce tube tégi^rement fermé à la cire est destiné à prévenir la rupture du ballon, rupture qui pourrait risuller d'une fermentation trop considérable. La lieuxième ouverture du deuxième ballon contient un autre tube qui n'arrive qu'à l'entrée du ballon et qui ne plon^je point dans le liquide. Ce tube desliné à la sortie de l'acide carbonique qui s'est formé dans le premier ballon et qui s'est ensuite débarrassé de son eau dans l'acide sulfurique du deuxième ballon, contient dans son intérieur un peu de chlorure de calcium desliné à empêcher l'entrée de l'air et h prévenir l'Jiuinidité qui pourrait modifier l'étal anhydre de l'acide sulfurique concentré.

L'appareil ainsi préparé on le pèse puis on soumet le premier de ces ballons qui contient l'urine sucrée k une température de 30° à 40". La fermentation se développe rapidement et dans la plupart des cas est complètement terminée au bout de deux à trois jours. On chauffe alors doucement le premier de ces ballons pour en chasseï" tout l'acide carbonique qu'il peut encore contenir; on soulève le tube de siireté de ce premier ballon, de manière A en amener l'extrémité infé-. Heure au-dessus de la surface du liquide, puis on aspire à l'aide de ce tube l'air contenu dans l'nppareil jusqu'à ce qu'on ne sente plus la saveur aifjrelette de l'acide carbonique. On

fpèse de nouveau l'appareil et la différence qui existe entre le ivemier et le second pesafje représente en poids la quantité d'acide carbonique formé. Or on sait que 'iOA,M parties de nrre donnent 100 parties d'acide carbonique. Si l'urine contient de l'albumine il faut l'en débarrasser

It^i DIABÈTE SUCRE»

par la coclion pour prévenir la formation de gaz qui peuvent résulter de sa décomposition. C'est également, pour prévenir la fermentation acétique, que Lehmann conseille d'ajouter le tartrate de potasse à la levure de bière et c^ rurine.

Si Ton emploie le procédé dQ Seegen qui nous parait assez simple, on évite cette cause d'erreur que nous avons signalée à propos de l'eudiomètrc. Il n'y a point de gaz restant dissous dans le liquide; il n'en échappe aucune trace à l'expérimentateur. Mais il est d'autres erreurs qu'il ne permet pas plus d'éviter que ceux de Leconte, Bernard, et qui ne sont pas moins {graves.

Ainsi il résulte de recherches récentes que le sucre en solution dans une urine ne se convertit qu'incomplètement par la feririentaliou en acide carbonique. On n'obtient guère que les 7/ 10 de l'acide carbonique qu'on devrait obtenir. Toutes les urines sucrées ne subissent pas également bien la fermentation alcoolique. Lorsque la quantité dé sucre est très-considérable la fermentation ne se produit pas ou plutôt est bientôt arrêtée. Pour Bence Jones, cette résistance à la fermentation serait due à la présence de l'urée en excès. Il est probable qu'elle est due plutôt à l'excès de l'alcool qui bientôt sature le liquide, et, s'oppose à l'action de la levure. Aussi doit-on bien se garder de concentrer par l'évaporation, comme le conseillent certains auteurs, l'urine qu'on veut soumettre à la fermentation. II sera même bon, dans certains ras, d'en diminuer la densité par l'addition d'eau distillée.

Il est enfin des circonstances dans lesquelles on obtient une quantité de gaz supérieure à celle qu'aurait dû fournir le sucre soumis à la fermentation alcoolique (Neubauer et Van Deen (1). Il en est ainsi lorsque la quantité de sucre, contenue dans l'urine, au lieu d'être considérable ne s'y trouve qu'en minime proportion. On s'est demandé, quelle pouvait être dans ces cas la provenance de l'acide carbôni-

(1) Van Decn, loc* cil.

que. Les uns ont pensi' que cet acide cai'bonimie pouvait venir de la levure qui, après avoir agi comme corps cnlalyptique, se décomposerait posuite, en subissant la rermenlation alcoolique, ainsi que l'ont démontré Pasteur, Liebip;. Mais la quantité de levure employée est trop faible pour rendre compte de la quantitc^ d'acide carbonique formé. Tout porte à croire que cet acide carbonique vientde la transformation d'une des substances constitutives de l'urine, de l'urée probablement. Du reste van Deen, Neubauer et Seegen ont mis ce fait hors de doute, puisqu'ils ont démontré qu'une solution d'urée, avec ou sans levure, donnait lieu à la long^ue à la production d'acide carbonique.

Bence Jones, Huppert et See;^en ont cherché à déterminer à quel defjré de précision on peut arriver, A l'aide de la fermentation, dans l'appréciation du sucre. Or ils sont d'avis que si la fermentation donne encore des résultats satisfaisants, quand on opère sur une solution aqueuse, alors que In quantité do sucre est égale à 0,02iï mm. pour !Ofl, elle doit être supérieure à ce chiffre pour pouvoir être appréciée lorsqu'il s'agit de l'urine, aloi-s même qu'on s'est placé dans les meilleures conditions, pour procéder à l'opération. Pour que la rermenlation se développe, le sucre doit être au moins de 0,05 (Garrod), 0,10 pour 100 (Seegen). La fermentation ne donne donc plus de résultais, alors que la liqueur de Fehling produit encore un précipité.

PROCÉDÉS PHÏSIOUES.

pMaaiMir spécinqMc. — Henri Prout (1), M. Proul (3), Jordaô (;îi, lïosenstein (-4) et Seegen crurent pouvoir doser

ll| H. Proul, 1° An inquiry info Ihe nature and treatmenl o/ DiAetet i/elliitu, 1835, l^ndan. — i' On ilomacli atvt rénal diteaiei, IB-IO, London.

(Sf M. Proiit. in nobcrli.

'3; Jordao, loe. cit.

(4) nc»enalc!in, Ein Fall, von DIabeta tlrlUlni (Vireli'i Arch., ISRT). Deber ien Einfluit tmiger GetraïUte auf die Koclaali, llarmloff und Zuckerauueheidung tu Ham beiDiabeie* mtl (V'i r. path. An., 1858).

1 1 i DIABÈTE SUCRÉ.

la quantité de sucre d'une urine, en se basant sur Taugmenlation de densité que présente habituellement toute urine sucrée Mais leurs procédés qui, dans certains cas, n'ont pas eur raison d'être puisqu'il arrive parfois que la densité de l'urine est diminuée, loin d'être augmentée, ne peuvent donner, lorsqu'ils sont susceptibles d'être employés, que des résultats tout à fait inexacts. Nous en dirons tout autant de celui de Bouchardat. Le sucre chez les p^lycosuriques n'esl pas la seule partie constitutive de l'urine qui soit augmentée et qui soit susceptible d'en faire varier la densité. Si le sucre était toujours dans des rapports réjçuliers avec la somme de l'urée éliminée, on pouri-ait peut-être penser à tirer parti de cette augmentation de la pesanteur spécifique, due à l'excès d'urée, au point de vue du dosage du sucre; mais il n'en est rien, et, tel malade diabétique rend des quantités considérables d'ui'ée qui ne rend que de faibles proportions de sucre et vice versa.

Le tableau suivant qu'a tracé Seegen, démontre surabondamment qu'on ne saurait pas plus s'appuyer sur la densib'* d'une urine pour juger de sa richesse en sucre que pour en constater la présence, que deux urines présentant la même densité, peuvent contenir des quantités différentes de sucre, et par contre, que des urines de pesanteur spécifique différenl<î renferment parfois autant de sucre. Il a trouvé en effet que des urines à :

1050 coiilenaient 6 Vo d^ sucre.

iOdS

lOiS

Si l'on ajoule à ces «auscs d'erreur, tenant à la diversité de constitution du liquide urinaire chez les glycosuriques,la difficulté d'obtenir un aréomètre parfaitement exact on comprendra que le dosage du sucre par des procédés basés sur

PROCÉDÉS PHYSIQUES. ItS

les modiliialions que présente la pesanteur spécîfKjue oc tienne qu'un ran^ tout à Tail secondaire. Pour avoir un aréomètre qui remplisse toutes les coodilioas d'exactitude possible, il faudoit que le tube en fût presque capillaire et très- ^galemeot calibré. C'est en effet à l'aide de ces deu\ conditions seulement qu'on peut espérer d'obtenir une certaine régularité dans les divisions, qu'on établit entre les points extrêmes qui servent à la gi'aduation de l'instrument. C'est en effet le seul moyen de rendre, aussi peu sensibles que possible, les diflércoces qui peuvent exister, quelque soin qu'on apporte à celte graduation, entre chacune de ces divisions. C'est également en espaçant, autant que laire se peut, ces divisions, qu'on peut faciliter la lecture des chiffresqui correspondent à chacune d'entre elles. Mais la petitesse du calibre peut avoir un grave inconvénient. C'est d'augmenter déme- • sûrement la longueur de l'aréomètre et de le rendre plus fragile. Pour remédier h cet inconvénient, on a pensé à établir différentes espéc(?s d'aréométi-e's ; les uns permettant de se rendre compte d'une densité inférieure à la densité physiologique, les autres ne mesurant que des densités qui lui sont sopérieures. Les aréomètres de cette deuxième espèce s'ariFlKeaL assez généralement à 1060. Nous les croyons tout Âfait lîmunisants, et, nous pensons qu'il faut à l'avenir en avoir qui donnent une pesanteur spéciriquc d'au moins 1080 à 1 10<t.

Ed. Montly (I) a dans ces derniers temps appelé l'attention sur un procédé de dosage qui se rapproche des précédents et que nous devons signaler, en passant, bien qu'il ne nous semble pas beaucoup plus utile. Par ce procédé on dose l'urine sucrée par la différence de densité qu'elle présente avant et après la fermentation, ilensley (â) aurait trouvé que chaque degré de densité, perdu par l'urine, correspoml à un gram. de sucre perdu par 30 gr. d'urine. Ce procédé qui peut être

m<-hrKlei lit. iiiiil. pliil. Socictij.

utilisé, el que recommandent Manassein (i), et Robeils (2), a Finconvénient d'être compliqué dans son application et de nécessiter au préalable la fermentation. Il est en outre douteux qu'il donne des résultats aussi satisfaisants que le pensent ces auteurs. Nous ne croyons pas qu'on puisse arriver, comme ils le veulent, à l'aide de ce procédé, à reconnaître dans l'urine des quantités inférieures à 0,50 à 1 gram. pour 100, et d'un autre côté nous sommes convaincu que cette diminution de densité n'est pas seulement en rapport avecla disparition du sucre, puisqu'il est actuellement démontré que, pendant la fermentation, l'urée se décompose en partie et forme de l'acide carbonique.

Polarisation. — Pour pouvoir utiliscr le polarimëtre au point de vue de l'appréciation quantitative du sucre, contenu dans une urine, il faut au préalable graduer l'instrument. Il ' faut qu'on sache à combien de grammes ou de centigrammes de sucre correspond chaque' degré de déviation. Cette graduation se fait à l'aide d'une solution aqueuse de sucre dont on connaît l'intensité. Cette graduation établie et tenant compte des précautions à prendre, et dont nous avons parlé à propos de l'examen qualitatif de l'urine par cet instrument, on arrive rapidement à déterminer la quantité de sucre contenue dans une urine, quel que soit Tinstniment dont on fait choix; qu'il s'agisse du polarimètre de Biot ou de Wentzke ou du saccharimètre de Soleil....

Toutefois la délicatesse de cet instrument a des limites qu'on ne saui'ait dépasser et c'est à tort qu'on espérerait arriver, à l'aide de ce procédé, à un plus grand degré de précision qu'avec d'autres procédés. Seegen croit qu'on ne

(1) Manassfîin, Ùeber quantitative Bestimmung des Zuckers im diabetiêdien Ham nach Untenchube im gj>ecifischen des Ilams vor und nach Gahrmig. ^Ikîiitsche arch. f. klin. Med. Bd. 10.)

(t) Rotierls W., On the estimation of fugar in diabetic urine by Ihe lossof density after fermentation. Manchester, 1861 ; — aod Ëd mb. med. journ.,1861.