OPÉRATIONS PRÉLIMINAIRES

La maliëre à l’élat naturel ne se trouve pas toujours en position d’être observée ; il faut lui faire subir alors préalablement des manipulations, appropriées aux différents cas qui peuvent se présenter, que nous allons passer rapidement en revue, nous en tenant ici aux généralités, renvoyant, afin d’éviter les redites, à la technique spéciale pour les cas particuliers.

Fixation des formes. — Cette opération est nécessitée soit par la prompte altération de certains éléments après leur mort, soit par la contraction qu’ils éprouvent pendant l’ag-onie. On emploie dans le premier cas des substances coagulantes : l’alcool absolu, la solution alcoolique de bichlorure de mercure à 2 0/0, l’acide chromique ; dans le second un poison foudroyant : quelques grammes d’acide osmique en solution au centième L

2° On est souvent forcé en histologie végétale de s’adresser à des échantillons desséchés qui résistent au rasoir ou se brisent au moindre choc si l’on n’a soin de leur rendre préalablement leur consistance première. On y parvient quelquefois de la façon la plus simple par une macération plus ou moins prolongée dans l’eau froide (fleurs); l’infusion est préférable

1. L’acide osmique se réduit très rapidement au contact des substances organiques. Il l'aut, pour obtenir une solution stable, rincer le flacon à l’émeri dans lequel on fera la solution 1° à l’acide sulfurique concentré, 2° à l’alcool, 3° à l’eau distillée. On nettoiera de meme l’extérieur du petit tube scellé à la lampe, renfermant l’acide, que l’on précipite contenu et contenant, après l’avoir ouvert avec une pince, dans l’eau distillée pesée cl récemment filtrée qui doit servir à la solution.

TRAITÉ PKATlnUE DE MlERüGR A PlllE

pour les tissus plus résistants : feuilles coriaces, tiges, racines. Je préfère cependant de beaucoup la macération plus ou moins prolongée dans le liquide suivant: Eau 70, lessive des savonniers 5, glycérine 25; sous son inlluence, le tissu s’imbibe également, reprend toute son élasticité, et, chose importante, le ligneux ramolli se laisse entamer avec une facilité surprenante; il faut, avec ce liquide, se tenir en garde contre Faction de la soude sur le contenu des cellules.

3° Précipitation. — Le corps se trouvant àl’élat de solution doit être précipité et, autant que faire se peut, à l’état cristallin. Il est possible d’y arriver: i° par la dessiccation (saccharose, inuline) ; 2*^ parle déplacement, du dissolvant par un liquide dans lequel la matière est insoluble (précipitation de l’inuline par macération dans l’alcool à 90°) ; 3° en formant une combinaison insoluble ou peu soluble de la substance (urée précipitée à l’état d’azotate d’urée).

4° Dissolution et précipitation. — La substance étant amorphe et engagée au milieu de matières étrangères est traitée par un dissolvant approprié qui l’abandonnera soit par évaporation (recherche de la cholestérine), soit par l’action d’un réactif (recherche de l’acide urique dans un calcul). Le corps prendra l’état amorphe ou cristallin selon la rapidité avee laquelle le dépôt se sera effectué.

5° Dissolution et destruction. — Certains matériaux inutiles deviennent incommodants soit par leur fluidité, qui leur permet de se répandre sur toute la préparation et de l’obscurcir, soit parleur masse impénétrable aux rayons; on s’en débarrasse par des dissolvants ou des réactifs appropriés. L’alcool, l’éther, le chloroforme sont employés pour dissoudre les huiles grasses et essentielles, les résines, la cire, la chlorophylle ; l’acide acétique dissout le protoplasma; les acides étendus font disparaître l’amidon avec le concours de la chaleur, etc.

La décalcification doit être placée ici bien que son but soit différent. Elle consiste dans l’enlèvement par des acides étendus des incrustations calcaires (os, dent, coralline) qui empêchent Faction du rasoir.

La dé lignification^ qu’on obtient par la macération des tissus végétaux dans une solution étendue de soude ou de potasse, est opérée dans la même intention.

6° On a recours à la pulvérisation lorsque le corps homogène et bien sec présente des éléments assez résistants pour être simplement dissociés par le choc (fécules granulées, noyaux scléreux).

7° Quand on veut étudier isolément les éléments d’un tissu et que l’on ne peut avoir recours à la pulvérisation, il faut s’adresser aux isolants ou dissociants. Nous renvoyons au corps du livre pour les dissociants spéciaux, nous en tenant ici aux procédés généraux.

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On fait on histologie animale nn usage courant de la macération dans la liqueur de Midler composée de : Eau 100, bichromate de potasse 2, sulfate de soude 1 ; on fera bien dV ajouter quelques gouttes, par litre, de jdiénol ou de thymol pour empêcher le développement des végétations qui envahissent assez rapidement les pièces plongées dans son intérieur. Ce liquide est en même temps conservateur (à ce titre il peut servir à ménager l’alcool) et durcissant. L’alcool à dO*" centésimaux est également un bon dissociant.

En histologie végétale, on emploie le procédé de Sc/iultze qui consiste à faire bouillir dans un tube pendant quelques minutes des fragments de lissus additionnés I" de leur volume de chlorate de potasse; cristallisé, 2® d’acide nitrique en quantité suffisante pour submerger le tout. Les fragments sont ensuite lavés à grande eau, puis dans l’alcool bouillant.

Il faudra compléter, le plus souvenl, l’action des dissociants soit par le grattage au moyen du scalpel, soit par la dilacération au moyen des aiguilles.

8° Durcissement. — Le corps est trop mou, il fuit sous le rasoir; il faut lui donner de la consistance. L’alcool à 9 '5° est seul employé, ou peu s’en faut, par les botanistes; on fait plus particulièrement usage pour les tissus animaux de la liqueur de Muller, de l’alcool à 90°, de la solution aqueuse saturée d’acide picrique, enfin de la dessiccation.

9” \J encollage spécial à l’bistologie animale. Il est destiné à communiquer à la pièce une résistance qu’elle ne peut acquérir par la simple immersion dans les durcissants. La pièce, étant découpée en cubes ayant au plus 1 centimètre de côté, est durcie r par une macération de vingt- quatre heures dans l’alcool à 90°, 2" par une seconde macération pendant un temps égal dans une solution aqueuse saturée d’acide picrique. Elle est ensuite plongée, pendant plusieurs jours, dans une solution sirupeuse de gomme arabique de façon à s’en pénétrer complètement; l’on précipite ensuite la gomme au milieu des tissus par l’immersion des cubes dans l’alcool à 95". La coupe obtenue, on élimine la gomme par une macération dans l’eau.

W Encastrement . — Si le corps, étant mou, ne se prête pas aux manipulations précédentes, ou s’il est trop petit pour être tenu à la main, on l’emprisonne dans un milieu résistant qui fournira un point d’appui.

La matière la plus employée est la moelle de sureau dont les bâtons, fendus longitudinalement et également à la scie, seront creusés sur leurs faces planes d’anfractuosités un peu moins volumineuses que Tobjet, mais de même forme, de telle façon que l’objet, étant placé dans ces cavités, subisse une légère compression par le rapprochement des deux moitiés du bâton (tiges, racines, pétioles).

S’il s’agit d’une membrane un peu résistante (limbe de feuille), on ne

fendra que partiellement la moelle de sureau de façon à la transformer en une pince à branches immobiles entre lesquelles on introduira la membrane ; on la maintiendra en place par une légère pression de la main sur les branches. On se sert aussi de cire et de paraffine que Ton coule dans un petit moule de papier ou de métal mouillé, au centre duquel on a préalablement placé robjet.

Les filaments (textiles, etc.) seront disposés parallèlement en mèche et plongés ensuite, à plusieurs reprises et à quelques minutes d’intervalle, dans un bain de paraffine fondue, tenue près de son point de solidification. La petite bougie refroidie se laissera manier facilement. On ne se débarrassera, la coupe obtenue, de la paraffine que si la chose est absolument nécessaire ; l’opération se fera alors sur leslide, la préparation maintenue par le cower, au moyen de benzine ou d’éther dont on fera passer un courant entre les deux lames.

Les corps pulvérulents ou peu volumineux que l’on voudra sectionner seront fixés à la surface d’un bâton de sureau au moyen d’une solution peu épaisse de gomme arabique. En sectionnant la moelle en tranches très minces, on obtiendra en même temps des coupes de l’objet. On peut dans quelques cas remplacer la gomme par le collodion (ovules durcis dans l’alcool).