EXPÉRIMENTATION @ IN VITRO

Mode opératoire.

Pour l’expérimentation in vitro, il faut avoir une solution aqueuse miscible aux milieux de cultures. Les sulfamides étant généralement peu solubles, il faut, pour dissoudre le S.M.T., humecter le produit avec 0,9 % de monoéthanolamine.

On obtient ainsi une solution aqueuse concentrée à 4 %, d’un pH assez élevé, mais qui, par dilution avec de l’eau distillée, ou du bouillon légèrement acidulé, est ramenée à un pH voisin de ia neutralité, aux environs de 7.

Pour étudier l’action bactériostatique du S.M.T. nous nous sommes servi de la méthode classique des dilutions successives dans des tubes à essais.

Une série de tubes est remplie avec 5 cm’ de solution à étudier. On commence par 1 % - 0,5 - 0,2 - 0,1 jusqu’à 0,001 %.

Les dilutions sont poussées suffisamment loin pour être sûr que les derniers tubes donneront des cultures positives.

Enfin, chaque série comporte 1 ou 2 tubes témoins, ne contenant que le milieu de culture sans produit à examiner.

Le milieu de culture que nous avons préconisé, après plusieurs essais (Liebig, différents extraits aminés), était un autolysat de levure à 3 %, ramené à pH 7, et qui convient surtout aux Gram négatifs.

Ce milieu de culture nous a donné des résultats constants avec tous les microbes étudiés.

La dimension de l’inoculat joue aussi un rôle très important et il s’agit de se servir toujours de la même quantité de microbes inoculés pour avoir des résultats comparables.

Re... Put

Nous nous servons d’une culture en milieu liquide de 24 ou 48 h. Par dilutions successives de cette culture, nous arrivons au 1/1 000, dont une goutte nous servait pour les ensemencements.

Tous les tubes étaient placés à l’étuve pour 24 h. Le dernier tube limpide marquait la limite de l’action bactériostatique.

Dans certains cas, nous nous sommes assuré que l’action n’était pas seulement bactériostatique, mais bactéricide, en procédant à des cultures secondaires par repiquage. sien

Pour les Gram +, la limite de l’action bactériostatique présente une démarcation très nette mais, pour les Gram - et pour les Coli en particulier, le passage entre le tube clair stérile et le tube témoin, avec culture normale, est tout à fait insensible.

Dans ces cas-là, on met une croix suivie de 1, 2, 3 ou 4 traits verticaux, qui sont interprétés comme culture à peine perceptible, extrêmement faible, faible, etc.

RÉSULTATS

Gram négatifs.

Cozr 4582.

1. 5 cm* bouillon levure à 0,5 % de S.M.T.| £ — 2: em) — 0,2 2e £ Pr 3.5 cm .— = 0,1 ae Bd le 4 5cm — — 0,05 — 2 & | — 5. 5 cm — — 0,02 — EDP TE Coma EL N 1 | ne Ep 2e 7. 5'èm’: — — 0,005 — & æ | + 111 8.-5 em — —— 0,002 —— = + 111 9, Témoin. = +

Cozr 4625.

1. 5 cm° bouillon levure à 0,5 % de S.M.T. £ —— 2. Sem. — — 0,2 — = ee PUS OT = 0,1 == 8 © | — 4 5.em? = sie 0,05 = 2 8 | + 1111 515 em, = 17 002 PA AE A 6. 5 cm — Rs | 22. Sat bte KL 7... 5 cm — — 0,005 — S © | + 11 DHESeEMi = Le 0,002 pe: = Ms 9. Témoin. | je

Cor 4944.