DES
CAPSULES SURRÉNALES
Notes présentées à la Société de Biologie de Paris Par F. BATTEEiIil
DOSAOE OOLORIMÉTRIQUE DE LA SUBSTAKCfi ACnVE^ DES CAPSULES SUBBÉVAÙâ.
(Séance du 24 Mai i902>
La substance médullaire des capsulessurréHalesetaoa extrait aqueux doonentt comme l'on sait, uoe coloration yerte, lorsqu'on les traite par une solution de chlorure ferrique.
Cette réaction m'a permis d'établir un procédé de dosage colorimétrique de la substance active des capsules surrénales. Ce dosage, très facile, est d'une exactitude supérieure à celui qu'on peut appeler physiologique^ consistant à calculer les richesses de l'extrait surrénal en substance active, d'après les effets que cet extrait exerce sur la pression sanguine d'un animal.
Technique du dosage colorimétrique, — Oa se sert d'une solution aqueuse de GlsFe, ayant une densité de 1090. Cette solution est employée dans la proportion d'une goutte pour chaque centimètre cube du liquide renfermant la substance active des capsules surrénales.
Supposons qu'on veuille doser la richesse en substance active d'un extrait aqueux de capsules. On prend 10 centimètres cubes de cet extrait; on en prélève 5 centimètres cubes, qu'on verse dans un tube à réaction, et on y ajoute 5 gouttes de la solution de CUFe. On constate que la colo-
ration verte est bien nette; on jette alors cette partie du liquide, qa*on a additionné de CUFe. Les antres 5 centimètres cnties d*extrait sont dilués avec une égale quantité d'eau, de manière à faire 10 centimètres cubes de liquide. On en prélève 5 centimètres cubes, auxquels on ajoute 5 gouttes de CUFe; si la coloration verte est bien marquée, on jette cette partie du liquide et on dilue les autres b centimètres cubes avec une égale quantité d'eau.
On continue ainsi jusqu'à ce qoe la teinte verte obtenue par addition de la solution de CUFe soit très peu marquée. Ce point atteint, on ne dilue plps le liquide à moitié, mais seulement à '/s, à '/«^ à Vs. etc.
Il arrive un moment où il est difficile de s'assurer si la teinte verte existe réellement, ou si Ton n'a pas à faire à la coloration jaune donnée par le CUFe. En outre, lorsque les gouttes de la solution de CUFe tombent dans l'extrait surrénal très dilué, on aperçoit une teinte verte très faible, qui disparait presque immédiatement.
C'est là le point délicat de l'opération. L'appréciation de i'existence de la teinte verte est beaucoup facilitée en plaçant le tube à réaction contre un écran blanc bien éclairé.
Dans mes dosages, je considère que la dernière limite de la dilution de l'extrait surrénal est dépassée, lorsque la teinte faiblement verte persiste moins de 4 à 5 secondes. La dernière dilution dans laquelle la solution ferrique a produit une teinte verte ayant persisté 4 à 5 secondes est la dilution limite.
J'appelle unité CUFe un centimètre cube de liquide qui possède la dilution limite.
Par exemple 50 centimètres cubes d'extrait surrénal donnent la dilution limite lorsqu'il sont dilués à Vio ; ils contiennent donc 500 unités CUFe.
J'ai préparé la substance active des capsules surrénales à l'état de base (adrénaline), d'après le procédé de Takamine, légèrement modifié par moi, de manière à obtenir la substance chimiquement pure.
Un centigramme d'adrénaline pure donne 700 à 750 unités CUFe K Un gramme d'adrénaline présente ainsi 70.000 à 75.000 unités ClsFe.
Mon dosage colorimétrique facile et rapide permet de calcu-
' Diaprés ce que j*ai exposé pins haut, ce chiffre signifie que, si Ton dissout un centigramme d^adrénaline dans 700 k 750 centimètres d*eau (légèrement acidifiée par Tacide acétique ou CIH), et si à 5 centimètres cubes de ce liquide on ajoute 5 gouttes de solution de ClsFe, on a encore une teinte verte très faible, persistant 4 ou 5 secondes au moins. Un centigramme d*adrénaline, dissoute dans 800 centimètres cubes d*eau, ne donne plus la coloration verte par le ClsFe.
1er la quantité de substance active renfermée dans les capsules surrénales d'un animal.
Cent capsules de bœuf, pesant 1780 grammes, finement broyées et soumises à des macérations successives jusqu'à extraction complète de la substance active, m'ont donné225.000 unités ChFe. Ces cent capsules renfermaient donc 3 gr. 10 d'adrénaline. Une capsule de bœuf renferme ainsi en moyenne gr- 031 d'adrénaline.
D'autre part, une capsule de bœuf, pesant en moyenne 18 grammes, m'a donné en moyenne 4 gr. 30 de substance médullaire, la seule qui, comme on le sait, contient la substance active. Chez le bœuf, la substance médullaire renferme ainsi 0,75 pour 100 de substance active, calculée sous la forme de la base.
Préparation de la substance active des capsules
surrénales.
(Séance du 31 Mai i902)
Takaraine a préparé la substance active des capsules surrénales à l'état de base, et il lui a donné le nom d'adrénaline. J'ai répété la méthode de Takaraine et j'ai obtenu des produits qui n'avaient pas toujours la même composition. J'ai donc cherché à perfectionner le procédé de Takamine pour obtenir l'adrénaline aussi pure que possible.
La méthode de Takamine consiste essentiellement à traiter l'extrait des capsules entière par l'acétate de plomb, puis par l'alcool, et, finalement, à précipiter l'adrénaline par un alcali. Ce procédé présente deux inconvénients principaux. En premier lieu, employant la capsule entière, on extrait aussi les substances de la partie corticale, qui ne renferme pas d'adrénaline. En second lieu, après la précipation par l'alcool, au moment oii l'on ajoute à la liqueur l'alcali pour précipiter l'adrénaline, il reste encore dans le liquide une quantité très considérable de substances qui précipitent aussi en partie par l'addition de l'alcali. En outre, la présence de ces substances empêche la précipitation d'une quantité considérable d'adrénaline.
Après de nombreux essais, voici comment je procède actuellement pour préparer l'adrénaline.
Je ferai d'abord remarquer que, lorsque le liquide renfermant la substance active est alcalin, il s'oxyde facilement à l'air etse transforrae en une substance qui n'est plus active. Il est donc préférable d'opérer h l'abri de l'air. Pour cette raison et aussi pour la rapidité des manipulations, j'éloigne le plus souvent les précipités par centrifugation au lieu d'employer la âltr&tiou.
Procédé détaillé. — La substance niédullaire de capsules fraîches de tK£uf est séparé€ avec soin du reste de la capsule. Cette substance médullaire est broyée avec du verre pilé, et on ajoute trois volumes d'eau distillée. On lai^e coacèrer pendant une heure; on décante le liquide, et on exprime le résidu à travers un linge. On répète l'opération cinq fois. Après la cinquième macération, le rénidu de substance médullaire est épnisè et ne renferme plus de .^^ûb^tance active.
On réunit les extraits des cinq macérations. On cbauffe ce liquide à 80 degrés environ pendant quelques instants. On laisse refroidir. On ajoute t grammes d'acétate de plomb pour iOOO centimètres cubes de liquide. On obtient ainsi an précipité très abondant. La filtration étant très lente, on éloigne le précipité par centrifugation. Le dépôt est lavé plusieurs fols avec de Tean distillée jusqu'à ce que Teau de lavage ne reoterrne plus de substance active.
Ces divers liquides obtenus par centrifugation sont réunis et soumis à un courant de SH*. On filtre. Un évapore le filtrat dans le vide à une température de 43 ii fîO désirés, jusqu'^'i un trentième environ du volume primitif. Le liquide devient foncé et il s'y dépose un précipité.
On iiltre. Le précipité est lavé plusieurs fois avec de petites quantités d'eau Jusqu'à épuisement de la substance active. Tons les liquides obtenus par fiitraiion sont réunis^ et on ajoute six à sept volumes d'alcool. On obtient un précipité rongeâtre.
Ou filtre. On évapore le filtrat dans le vide à une température de 40 à 45 degrés, Jusqu'au cinquième environ du volume primitif. On ajoute quatre volumes d'eau. On obtient un précipité faible.
On (iilre. On évapore le liltrat dans le vide à 4S-50 degrés, jusqu'à un cinquième environ du volume primitif.
On ajoute du bichlorure de mercure tant qu'il se produit un précipité. Ce précipite, blanchâtre, est très abondant. On centrifuge. Le dépôt est lavé plusieurs fois avec de Teau, Jasqn*à ce que l'eau de lavage ne contienne plus de substauce active. Tous les liquides obtenus par centrifugation sont réunis et «oumis i un courant de SH*. On centrifuge et on lave le dépôt ju^^qu'à complet épuisement de la substance active.
Le liquide obtenu est évaporé dans le vide à 45-50 degrés. On arrête révaporalioii lorsqu'un centiuiètre cube de ce liquide renferme environ lOQO unités Cl*Ke. On obtient ainsi un liquide avec une faible coloration jaune paille, à réaction francbement acide. .
Un tube rempli de ce liquide est mis dans la glace fondante. On y ajoute de rAzH» concentrée jusqu'à neutralisation, puis on alcallaise par une goutte d*AzH* concentrée pour 2 centimètres cubes de liquide, et on boucbe hermétiquement le tube. L'adrénaline précipite presque immédiatement. Après cinq minutes de repos, on centrifuge pendant dix minutes.
Quelle que soit la concentration du liquide, un quart environ de la Hubstance active reste en solution. Ainsi, dans notre cas^ le liquide décanté après centrifngation renferme encore 250 unités Cl'Fe environ par centimètre cube. On acidifie ce liquide immédiatement par de TCIH ; on concentre par évaporation dans le vide, ce qui permet d'en extraire de nouvelles quantités d'adrénaline.
Le dépdt d'adrénaline est lavé par quatre volumes environ d'eau distillée et centrifugé de nouveau. Le nouveau dépôt est lavé trois fois par l'alcool, puis deux fois par l'éther, et chaque fois soumis à la centrifngation. Après la dernière centrifngation, on chasse par le vide l'éther qui baigne le dépôt d'adrénaline. On conserve l'adrénaline, qui est hygroscopique, dans un flacon bien bouché.
Toxicité de la substance active des capsules surrénales ^
(Séance du 28 juin i902.)
Nous avons fait une série d'expériences pour déterminer la toxicité de l'adrénaline, préparée d'après la méthode de Takamine, modifiée par l'un de nous. L'adrénaline était dissoute dans l'eau aciditiée par le CIH; en d'autres termes, on injectait du chlorhydrate d'adrénaline.
Nous avons expérimenté sur des lapins, des cobayes et des grenouilles. L'adrénaline a toujours été administrée eu injections hypodermiques. Voici le résultat de nos recherches.
Les chiffres que nous allons donner se rapportent tous à l'adrénaline considérée à l'état de base.
Chez le lapin une dose de gr. 002 d'adrénaline par kilogramme d'animal n'a jamais occasionné la mort (cinq cas de survie sur cinq). Une dose de gr. 004 par kilogramme d'animal est rarement mortelle (un cas de mort sur quatre). Une dose de gr. 010 par kilogramme d'animal est presque toujours
* En collaboration avec M. Taramasio. Les détails de cette communinication sont exposés dans la dissertation inaugurale de M. Taramasio. Voy. page 15.
mortelle (cinq cas de mort sur six)* Une dose de gr. 020 est toiijoui's mortelle (trois cas de mort sur trois).
Chez le cobaye, une dose de gr. 002 d'adrénaline par kilogramme d^animal n'a jamais provoqué la mort (six cas de survie sur six). Une dose de gr. 004 par kilogramme d'animal est rarement mortelle (deux cas de mort sur six). Une dose de O gr. 006 par kilogramme d'animal est le plus souvent mortelle (trois cas de mort sur cinq). Finalement une dose de gr. 010 est toujours mortelle (quatre cas de mort sur quatre). • La toxicité de Tadrénaline est donc sensiblement la même chez le lapin et le cobaye.
Chez la grenouille^ une dose de gr, 10 par kilogramme d^animal n'a jamais provoqué la mort (cinq cas de survie sur €inq). Une dose de gr, 25 par kilogramme d'animal n'est le plus souvent pas mortelle (^six cas de survie sur neuf), ainsi qu'une dose de gr. 50 (cinq cas de survie sur huit). Une dose de l gramme par kilogramme d'animal est presque toujours mortelle (trois cas de mort sur quatre).
La grenouille serait donc cent fois environ moins sensible à Taction de l'adrénaline que le cobaye et le lapin.
Chez le cobaye et le lapin, la mort due à Tadministration d'adrénaline a lieu très peu de temps après T injection (en moins d'une heure en général ; dans quelques rares cas, après six ou sept heures). Loi-sque l'animal succombe après un laps de temps plus long ^quinze heures au minimum), la mort n'est plus due à Tactîon directe de ladrénaline, mais à une infection se manifestant sous forme de gangrène humide à l'endroit de rinjection-
Chez la grenouille, la raort est beaucoup plus tardive; elle arrive après plusieurs heures ou après quelques jours.
Les troubles produits par les injections hypodermiques d'adrénaline sont ceux décrits par les difïéreûts auteurs qui ont expérimenté avec l'extrait des capsules surrénales (Foa et Pellacani. Guavnieri et Marino-Zuco, Gluzinski, Gourfein, Vincent, etc). On constate de la dyspnée, un affaiblissement de la sensibilité, des réflexes et des mouvements volontaires, une paralysie qui commence par le train postérieur et qui envahit ensuite le train antérieur. Tous ces phénomènes sont dus à des troubles des centres nerveux, et ne sont pas d'ordre périphérique, car l'excitabitité neuro-musculaire reste intacte.
Quant à la cause de la mort, elle est due chez le lapin et le
'f^W^t^-éQ,
cobaye à ud œdème aigu rtes poumons. Avant que les troubles paralytiques soient assez prononcés pour provoquer directement la mort, survient l'œdème aigu du poumon qui tue Tanimal en quelques instants.
Chez la grenouille, au contraire, la mort est occasionnée par les troubles paralytiques des centres nerveux.
La faible toxicité de l'adrénaline pour la grenouille peut être en partie attribuée au fait que chez cet animal la respiration pulmonaire n'est pas indispensable à lu vie, puisque la peau peut suffire à l'hématose.
Enfin, nous avons remarqué que, chez le lapin et le cobaye, les doses mortelles d'adrénaline produisent le plus souvent, à l'endroit de l'injection, une mortification des tissus, due à l'ischémie locale prolongée. Après quelques jours, on observe une eschare, qui tombe en laissant une cicatrice.
Les détails de cette communication seront exposés dans la dissertation inaugurale de M. Taramasio.
QuANTrrÉ DE SUBSTANCE ACTIVE CONTENUE DANS LES CAPSULES SURRÉNALES DE DIFFÉRENTES ESPÈCES ANIMALES.
(Séance du 12 Juillet 1902)
J'ai dosé chez plusieurs espèces animales la quantité de substance active existant dans les capsules surrénales. Dans ces recherches, je me suis servi de la méthode colorimétrique que j'ai décrite dans une communication précédente. Je rappelle ici qu'un centigramme de substance active à l'état de base (adrénaline) donne 750 unités Cl'Fe environ.
Les animaux dont j'ai étudié les capsules étaient tous des animaux de boucherie, sauf les chiens. Les capsules étaient enlevées immédiatement après la mort de l'animal, broyées et soumises à des macérations successives dans l'eau jusqu'à épuisement complet de la substance active. Après avoir réuni tous les liquides de macération on ajoutait une goutte d'acide acétique à 1/5 pour 5 centimètres cubes de liquide et on filtrait. Le liquide passe limpide ; il sert au dosage colorimétrique par le chlorure ferrique.
Voici les résultats que j'ai obtenus.
£SPJkCE AKIMALB
xV 1.
Chien adulte \ de 27 kil. / .V 2.
Chien vieux de 26 kil.
Chien adulte ( de 23 kil. }
iNo 4.
Chien adulte i de 19 kil. \ No 5.
Chienne adulte
de 9 kil.
Moutons de 40 kil.
(moy. de 14 mont.) iV 7.
Moutons de 28 kil.
(moy. de 11 moût.) x\o 8.
Porcs de 120 kil.
(moy. de 12 porcs.) ^ No 9.
Porcs de 100 kil.
(moy. de 8 porcs.) No 10.
Cheval \
de 350 kil. l
No H.
