Leune, constructeur, à Paris
Laveran et Mesml. — Trypanosomes et Trypanosomiascs. 2
violet foncé un peu difTérente de celle du noyau ; la membrane ondulante reste incolore ou prend une teinte bleuâtre très pâle. Les hématies sont colorées en rose, les noyaux des leucocytes en violet foncé.
Cette méthode reste, croyons-nous, la méthode de choix dans tous les cas où ii y a quelque difficulté à bien faire apparaître tous les détails de structure des flagellés, en particulier les flagelles.
Mais, il existe un certain nombre de méthodes simplifiées où le principe colorant du Romanowsky, qui se produit extemporanément dans le procédé que nous venons de décrire, est employé tout préparé. Nous ferons connaître deux de ces méthodes, celle de Leishman et celle de Giemsa.
La préparation de la poudre de Leishman ' nécessite les 2 solutions suivantes :
Solution A. — On prépare une solution de bleu de méthylène médicinal (Grûbler) à 1 p. 100. On la rend alcaline en ajoutant 0,5 p. 100 de carbonate de soude. On chauffe à 65'^ dans une étuve à paraffine pendant 12 heures et on laisse ensuite à la température de la chambre pendant 10 jours avant Tusage.
Solution B. — On prépare une solution d'éosine BA (GrQbler) à 1 p. 1000.
On mélange volumes égaux de la solution A et de la solution B.
On laisse 6 à 12 heures de contact en agitant de temps en temps avec une baguette de verre. On rassemble le précipité sur un filtre, on lave abondamment avec l'eau distillée jusqu'à ce que l'eau de lavage soit incolore ou possède seulement une teinteJégèrement bleue.
Le meilleur dissolvant de cette nouvelle couleur est l'alcool méthylique pur et anhydre. On fait une solution à 0,15 p. 100 en ayant soin de broyer la poudre au mortier et de n'ajouter l'alcool que par petites quantités. De cette solution, que l'on peut conserver un certain temps dans un flacon bien bouché, on met 3 ou 4 gouttes sur la préparation. On répartit également la matière colorante sur la lame qui n'a pas besoin dêtre préalablement fixée, étant donné que la couleur a pour substratum l'alcool méthylique anhydre. On laisse une demi-minute, puis on met le double d'eau distillée, 6 à 8 gouttes, en ayant soin de bien agiter. On laisse la coloration se faire, pendant 5 à 15 minutes.
On lave et on laisse agir l'eau, distillée ou ordinaire, pour la différenciation, pendant 1 minute. On sèche.
Le colorant de Leishman se trouve dans le commerce sous forme de poudre et de comprimés (soloïdes).
La méthode de Giemsa ^ est encore plus employée que celle de
1. Leishman, British medic. Journ., 27 sept. 1901, p. 757, et Jauni. Roy. Ariny med. Corps, t. II, ilJ04, p. 069.
2. GiEMS.x, Centralbl.f. Bakler, I, Origin., t. XXXVII, 1904, p. 308.
Leishman; le point de départ est le même : préparation d'une poudre (Giemsa se sert comme bleu du bleu Azur II). Il utilise la solubilité relativement grande de ces matières colorantes dans la glycérine, et il prépare la solution suivante :
Poudre « Azur II-Eosine ». 3 gr. ) . . , - i - . ,, • . . ,, A o ^ uien dessèches a 1 exsicateur.
Azur II 0 gr. 8 ^
Glycérine 250 gr.
On opère à 60"; on ajoute ensuite, toujours à 60' : alcool méthylique, 250 gr. On abandonne 24 heures à la température de la chambre et on filtre. Durant ces diverses manipulations, il convient d'éviter avec soin toute trace d'humidité.
La solution de Giemsa existe toute préparée dans le commerce; elle peut être employée par un des deux procédés qui suivent :
1" Procédé de coloration lente. — Dans une petite éprouvette graduée, on met 15 ce. d'eau distillée, on ajoute 15 gouttes de la solution de Giemsa, on mélange et on verse dans la boîte spéciale à colorations. Les frottis de sang convenablement fixés sont laissés dans le bain colorant pendant 6 à 12 heures; après quoi on lave à grande eau et on sèche.
2° Procédé de coloration rapide. — Le bain colorant est préparé avec une quantité double de la solution de Giemsa (30 gouttes environ pour 15 ce. d'eau distillée^). Au bout de 15 à 20 minutes, la coloration est en général suffisante. On lave à grande eau et on sèche.
Si la coloration obtenue par l'un ou l'autre de ces procédés est insuffisante, on peut faire passer la préparation dans un nouveau bain colorant.
L'examen à l'aide des objectifs à immersion est fait en déposant directement sur la préparation une goutte d'huile de cèdre que l'on enlève ensuite, comme nous l'avons déjà indiqué.
Pour obtenir une coloration très rapide. Giemsa - conseille d'employer un colorant composé d'un mélange à parties égales de solution colorante de Giemsa et d'alcool méthylique pur; on le garde dans un flacon compte-gouttes.
La préparation, placée frottis en haut dans une boîte de Pétri, est recouverte entièrement du mélange colorant (10 à 15 gouttes); on laisse agir une demi-minute, puis on verse dans la boîte de Pétri la quantité d'eau distillée nécessaire pour recouvrir entièrement la lame porte-objet (10 à 15 cm') ; on agite prudemment pour obtenir
1. Il n'est pas possible d'indiquer plus exactement la quantité de solution à employer parce que le pouvoir colorant des solutions de Giemsa est un peu variable.
