MILIEUX SOLIDES

mité par un tube en caoutchouc (4), muni d’une pince, et terminé par un ajutage en verre effilé, à pointe fermée (p), l'ensemble formant siphon. La conserve, une fois remplie aux trois quarts de bouillon et bien fermée, est stérilisée par un séjour à l’étuve humide ou autoclave (fig. 1641), à la température de 110-115 degrés, pendant une demi-heure. Après refroidissement, le bouillon, troublé par cette opération, laisse déposer un précipité ; il se conserve ensuite indéfiniment clair, ce qui prouve qu'il est exempt de germes vivants (p. 1203).

b) Conserves à sérum. — Pour la préparation du sérum sanguin, on fait usage d'une conserve semblable à la précédente, mais pourvue d’une troisième tubulure (fig. 1659, s), par laquelle passe un tube étiré en pointe fermée. Le flacon étant stérilisé, on puise directement le sang de l'animal, celui du Cheval par exemple, en introduisant cette pointe, préalablement brisée avec un instrument flambé, dans une artère ou une veine, et en ligaturant l'artère en aval de linci-

sion, la veine en amont. Après quoi, on Fig. 1659. — Conserve à sérum referme le tube à la lampe et on aban- sanguin. — /, tube ouvert, avec donne la conserve à elle-même tampon d'ouate ; s, tube fermé, . : ÉLELS SLA ; étiré en pointe fine, par lequel

La coagulation s'opère petit à petit : se fait la prise de sang ; d, sidans le sang du Cheval, les globules phon ; d', caoutchouc ; d'', ajugagnent le fond, avant que le fibrino- tage en verre fermé (Arloing).

gène n'entre en coagulation, d'où il résulte que le caillot grisâtre, allégé des globules, vient se produire à la surface, tandis que le sérum limpide remplit le reste du récipient,

2° Milieux solides. -— Les milieux de culture solides sont les uns à base de gélatine, principe albuminoïde, les autres à base de gélose ou agar-agar, principe ternaire mucilagineux, extrait de diverses Algues. Ces deux substances ne servent ici que de substratum aux aliments qu’on y incorpore.

La gélaline nutritive s'obtient en faisant dissoudre, dans le bouillon précédemment défini, environ 10 p. 100, de gélatine blanche de Paris. On filtre la dissolution encore chaude, pour l'obtenir tout à fait transparente.

La gélatine fond vers 25 degrés, ce qui interdit de l'employer pour les températures plus élevées, auxquelles pourtant il est souvent nécessaire de soumettre les cultures, l’optimum thermique pour la germination des spores et pour la croissance des Bactéries étant d'environ 35 degrés. On lui substitue alors la gélose nutritive (20 grammes par litre de bouillon), qui ne fond que vers 40 degrés.

Aussitôt préparées, la gélatine ou la gélose nutritive sont versées dans des tubes à essai (fig. 1660), préalablement stérilisés à l’étuve sèche à 200 degrés. Dès qu'ils sont chargés, ces tubes sont fermés avec un tampon d'ouate, puis portés à l’autoclave à 110-115 degrés pour la stérili-

1220 LES BACTÉRIACÉES

sation. Il faut remarquer que si l’on prolonge trop l’action de la chaleur, la gélatine perd la propriété de se solidifier par le refroidissement ; aussi stérilise-t-on parfois à une température de 1009 seulement, mais en répétant plusieurs fois l'opération (p.120#). Pendant le refroidissement, on incline plus ou moins le tube (A), ou bien on le laisse vertical (B), selon l'étendue de surface de culture que l’on veut obtenir.

Ajoutons qu'au lieu de gélatine ou de gélose, on peut employer les milieux solides les plus divers, tels que le pain, des tranches de Pomme de terre cuite, des fruits, etc. D'une manière générale, c’est par tâätonne-

À Fig. 1660 et 1661. — Tubes à gélatine nutritive. — À, cul-

ture en surface ; /, colonie bactérienne ; B, culture en profondeur; 2, tampon d'ouate ; 3, capuchon de caoutchouc, recouvrant ce dernier, pour empêcher là dessiccation {Arloing).

ment seulement que l’on arrive à définir le milieu le plus propre au développement de l'espèce considérée.

2° Ensemencement. — a) Milieux liquides. Si la culture du germe doit se faire en milieu liquide, on verse d’abord un peu de bouillon dans une série de #alras de verre (fig. 1662), à col rodé, sur lequel s'adapte une tubulure rétrécie vers le haut et fermée avec un petit tampon d’ouate ; au préalable, ces matras sont bien netloyés et stérilisés à sec à 200°.

Au moment d'y introduire Île bouillon, on brise la pointe du siphon de la conserve (fig. 1658, p), non sans l'avoir flambée ; on souffle dans la tubulure ouverte, tout en écartant les branches de la pince, et on laisse couler dans chaque matras la quantité voulue de bouillon. Les matras chargés sont aussitôt fermés.

Après avoir abandonné la pince à elle-même, on ferme de nouveau la pointe du tube à la lampe.

Pour vérifier la stérilité des matras ainsi pourvus de bouillon, on les expose à l’étuve pendant deux jours à la température de 34 à 36° : le

bouillon doit rester parfaitement limpide.

On procède ensuite à lensemencement. Si la Bactérie à cultiver vit dans un milieu solide ou pâteux, on en extrait une pelile parcelle, au moyen d’une aiguille de platine Hambée,