DIVERSITÉ DES SUBSTANCES VACCINANTES

Vaccination par les sérums. — Nous avons vu que le sérum des animaux hyperimmunisés contre un venin déterminé peut conférer l’immu-

nité active aux animaux sensibles auxquels on l’injecte, et qu'il en est de même pour celui des espèces douées de l’immunité naturelle (Vipère, Couleuvre, Hérisson, Anguille...). I] suffit dans ce cas de chauffer préalablement le sérum à 58° pendant 15 minutes pour en détruire l’action toxique phlogogène.

Cette propriété antivenimeuse, marquée dans les deux cas précédents, ne semble même être que l’exagération d’une propriété générale du sérum des espèces sensibles. Car C. Pnisarix à montré que le sérum non toxique de cobaye et de cheval peut être utilisé directement à produire une vaccination; mais celle-ci est toujours moins forte et moins durable que lorsqu'on emploie le sérum des animaux hyperimmunisés.

Vaccination par la sécrétion cutanée muqueuse de Batraciens et de Poissons. — En 1897 C. Pnisazix a montré que la sécrétion cutanée muqueuse de la grande Salamandre du Japon peut servir à vacciner les animaux contre sa propre action toxique, et aussi contre celle du venin de Vipère.

Cette sécrétion dans les espèces où elle est toxique, présente des analogies d'action avec le venin de Vipère ; l’étude que nous en avons faite chez la plupart de nos espèces indigènes et un certain nombre d'espèces exotiques, ainsi que chez quelques Poissons, nous a conduite à distinguer deux groupes de sécrétions cutanées muqueuses

1° Sécrétions muqueuses venimeuses et vaccinantes: celles de Megalobatrachus maximus, Salamandra maculosa, Siredon axolotl, Rana esculenta, Discoglossus pictus, Alytes obstetricans.

2° Sécrélions muqueuses non venimeuses et vaccinantes : celles de Siren lacertina, Pelobates cultripes, auxquelles viennent s'ajouter pour les Poissons, celles de l’Anguilla vulgaris et du Protopterus annectens.

Ce second groupe est fort instructif au point de vue de l’indépendance, dans une même sécrétion, des substances toxiques et des substances vaccinantes, que l’on voit apparaître, spontanément et isolément, chez des espèces quelquefois très voisines d’un même genre, telles que la Rana esculenta et la Rana temporaria.

Vaccination par le venin des Vespidés. — Le venin des Vespidés qui à une certaine analogie d'action avec le venin de Vipère possède aussi une action vaccinante contre ce venin. En employant, soit le venin frais retiré des vésicules à venin des Frelons et des Guêpes communes, soit la macération des animaux dans l’eau glycérinée. C. Paisax à pu conférer l’immunité à des cobayes : un sujet qui a reçu de 1 à 3 cc. d'extrait glycériné de venin de Frelon peut, au bout de quelques jours. subir avec succès l'épreuve de la dose mortelle de venin. La substance immunisante résiste au chauffage à 120° ; elle est retenue en partie par le filtre de porcelaine ; elle est soluble dans l’alcool. Le venin de Frelon possède aussi une légère action antitoxique contre le venin de Vipère.

Vaccination par la bile, les sels biliaires, la cholestérine. — La destruction du venin dans le tube digestif a conduit tout naturellement les recherches vers l’action des sucs digestifs sur le venin. En 1897 et 1898, les expériences de Fraser, à Edimbourg, celles de C. Praisaxix, à Paris ont fixé les détails de l’action protectrice de la bile et de ses composants.

Indépendamment de ses propriétés antidotiques, préconisées dans l'Amérique du Sud par Evarico GarcrAa, la bile possède un pouvoir vaccinant manifeste contre le venin des Serpents. Un cobaye auquel on inocule de la bile sous la peau peut, 48 heures après, recevoir une dose mortelle de venin sans en être incommodé ; et cependant la bile n’est pas antitoxique vis-à-vis du venin. Ce sont les sels biliaires et la cholestérine qui jouent le rôle principal dans cette action: o gr. o2 de glycocholate de soude, o gr. o2 à o5 centigr. de cholestérine suffisent à con férer l’immunité au cobaye. Dernièrement BiLLaRD a immunisé le cobave avec le suc d’autolyse de foie de porc.

Vaccination par la tyrosine et le suc de tubercules de dahlia. — 2 à 3 cc. d’une émulsion aqueuse à 1 % de tyrosine immunise également le cobaye contre le venin de Vipère. Cette quantité correspond à o gr. o0ù de tyrosine. C. Puisazix, auquel on doit cette constatation, a vu qu’en renouvelant plusieurs fois les injections, on peut créer une immunité assez intense et assez durable. C’est à la tyrosine que le suc des tubercules de dahlia doit ses propriétés vaccinantes: 1 à 2 cc. de ce suc frais suffit à vacciner le cobaye contre la dose mortelle de venin. Le dahlia est le premier exemple connu d’un végétal dont le suc cellulaire est doué de propriétés vaccinantes contre le venin.

La tyrosine n’est pas sensiblement antitoxique; elle ne neutralise pas non plus le venin par mélange avec lui.

Vaccination par les sucs de champignons. — L'activité et la rapidité des transformations nutritives qui se passent dans les champignons est un des faits les plus remarquables de la Biologie. Aussi n'est-il pas étonnant d’y rencontrer tant de substances diverses : ferments, hydrates de carbone, albuminoïdes, et un certain nombre d’autres corps provenant de leur transformation.

Parmi ces substances, plusieurs possèdent, comme l’a montré C. Prisauix, des propriétés vaccinantes contre le venin ; il était logique de penser que le suc qui les renferme toutes jouirait de cette propriété. C. Prisauix a essayé à cet effet le suc de champignon de couche, de différentes amanites : Amanita muscaria, Amanita mappa, de Lactarius torminosus, de truffe. Le suc de ces divers champignons a été obtenu par macération des champignons dans un égal volume d’eau. Avec celui de champignon de couche, la dose vaccinante est comprise entre 2 et 5 cc. ; avec celui d’amanita muscaria, elle est de 2 cc. par la voie hypodermique ;

elle est de 4 cc. 5 par la voie digestive. C’est avec le suc de Truffe que la vaccination est la plus manifeste.

En raison des différences qui séparent les espèces étudiées, il est probable que la vaccination est produite par des substances différentes plutôt que par une même substance commune à toutes les espèces; car il est à remarquer qu'il a été possible d’immuniser par ingestion, au moyen de l’Amanita muscaria, tandis que cette voie ne donne rien, pour la limite des doses employées, dans la vaccination classique par le venin

Des corps aussi différents du venin de Vipère que les sels biliaires, la cholestérine, la tyrosine, le suc de dahlia et de champignons peuvent-ils produire les mêmes résultats au point de vue de l’immunité ? C'est ce que Paisarix a recherché par un certain nombre d'expériences avec la tyrosine. Il a vu que l’immunité, comme pour le venin, met de 36 à 48 heures à s'établir ; il y a donc réaction de l'organisme. Mais le sang des cobayes vaccinés est-il préventif et antitoxique ? Pnisazix a observé que ces propriétés ne sont pas sensiblement plus accusées chez les vaccinés que chez les témoins, où la propriété préventive existe normalement à la dose de 5 à 6 cc., et où la propriété antitoxique se manifeste occasionnellement. Elles ne s’accroissent pas non plus quand on augmente le nombre des inoculations. Il faut en conclure que la tyrosine n'agit pas sur le sang de la même manière que le venin, et que le mécanisme de la protection exercée par cette substance n'est pas le même que celui de l’immunité obtenue par le venin ou par l’échidno-vaccin.

Pour interpréter ces phénomènes, PHisaztx envisage diverses hypothèses qui trouvent chacune un appui dans des faits déjà connus : ou bien les vaccins chimiques se combinent avec le venin ou se fixent sur lui, de telle sorte que le mélange devient inoffensif pour les tissus les plus

sensibles; ou bien elles se fixent sur les cellules de ces tissus, qu'elles:

rendent impénétrables au venin ; ou bien encore elles fournissent aux cellules les matériaux indispensables qui leur sont enlevés par le venin.

La première hypothèse trouve un appui dans les expériences de.

Ransou et de Hépox : ces auteurs ont constaté que la cholestérine est un antidote de la saponine et des glucosides hémolytiques, parce qu'en se fixant sur ces poisons elle les rend inoffensifs pour les hématies. La seconde hypothèse repose sur une expérience de Hénon : cet auteur a vu que les hématies ont la propriété de fixer énergiquement les acides et qu'alors ils deviennent inattaquables par la solanine. Enfin la troisième hypothèse a été mise en honneur par les recherches de Heymans et Masoin sur l’action antitoxique de l'hyposulfite de soude sur les dinitriles normaux.

Mais, comme le signale Pmisarix, ce ne sont là que des hypothèses entre lesquelles il est actuellement difficile de choisir. Quoi qu'il en soit, ces recherches offrent l'intérêt appréciable d'élargir les conceptions que l'on peut avoir de l’immunité et des processus par lesquels on la fait apparaître.

Sérothérapie

La première observation sur la propriété antitoxique acquise par le sérum des animaux vaccinés a été faite par C. Pnisazix et G. Ber- TRAND ; ces auteurs constatèrent que le sérum des cobayes, prélevé 48 heures après l'inoculation immunisante d’échidno-vaccin, défibriné, puis mélangé avec le venin et injecté dans le péritoine d’autres cobayes, les rend capables de résister à l’action mortelle du venin. Ils ont vu aussi que le sérum chauffé des animaux doués de l’immunité naturelle possède la même propriété ; il est comme celui des animaux vaccinés, antivenimeux. A. CALMETTE fait bientôt la même constatation pour le sérum des animaux vaccinés par le venin de Cobra. Il envisage alors la possibilité d'obtenir des sérums très antitoxiques et utilisables pratiquement dans la thérapeutique des blessures venimeuses. En 1895-96, il entreprit de vacciner un certain nombre de grands animaux, ânes, chevaux, en leur inoculart sous la peau, à intervalles de 4 ou jours, des mélanges de solutions de venins à doses d’abord petites puis progressives, et de solutions à 1/69 d’hypochlorite de chaux.

En général, après 2 mois, les chevaux pouvaient supporter l’inoculation d’une dose de venin pur, capable de tuer 50 lapins de 2 kg; au bout de 16 mois les sujets pouvaient résister à la dose de 2 gr. de venin (pesé sec), soit environ 8o fois la dose mortelle, qui est de o gr. 025 mgr., et qui tue les chevaux neufs en 12 à 24 heures.

Lorsqu'un cheval est ainsi vacciné, on peut le saigner à trois reprises consécutives en dix jours ; 12 jours après la dernière injection de venin, on lui fait une première saignée de 8 litres ; 5 jours après une de 6 litres ; 5 jours après une de 6 litres également, soit en tout 20 litres ; puis on laisse reposer l’animal pendant 3 mois en le soumettant à un régime reconstituant.

Durant cet intervalle, on lui fait au bout d’un mois une inoculation de > gr. de venin ; une deuxième un mois et demi après pour entretenir le pouvoir antitoxique, qui dans ces conditions reste constant.

Chaque saignée doit être éprouvée par la mesure du pouvoir antitoxique in vitro, et par celle du pouvoir préventif. À. CALMETTE emploie comme animal d’essai le lapin; le sérum est utilisable lorsqu'un mélange de 1 cc. de sérum avec 1 mgr. de venin inoculé sous la peau ne produit aucun symptôme d’envenimation, et lorsque 2 cc. de sérum injectés préventivement à un lapin de 2 kgr. lui permettent de résister deux heures après à l’inoculation de 1 mgr. de venih, qui tue les témoins en 2 ou 3 heures par la même voie, et en 30 minutes par la voie intraveineuse.

La rapidité des résultats, quand on opère par la voie veineuse permet de réaliser en moins d’une heure l’épreuve du pouvoir préventif, et de se prêter à une démonstration publique ; il suffit d’inoculer 2 cc. de sérum dans la veine marginale de l'oreille d’un lapin, et 5 minutes après une

solution de 1 mgr. de venin dans la veine de l’autre oreille. Le lapin témoin qui n'a reçu que le venin meurt en 30 minutes environ ; le vacciné résiste.

Le sérum antivenimeux dont on a mesuré le pouvoir préventif est décanté et réparti dans des flacons de 10 cc. stérilisés, en prenant pour toutes les manipulations du sérum, les précautions usuelles d’asepsie. Les flacons sont ensuite hermétiquement fermés, puis portés 3 jours de suite au bain-marie à 58° pour tuer les germes qui auraient pu éclore de leurs spores.

Ce sérum conserve pendant deux ans environ sa valeur antitoxique sous tous les climats ; puis cette valeur décroît peu à peu. Il est de plus, sous cette forme, assez facilement contaminable, comme d’ailleurs tous les liquides organiques. On remédie à ces inconvénients de la même façon que pour le venin, en desséchant le sérum rapidement dans le vide aidé ou non d’une chaleur douce. Le sérum desséché se conserve, sinon indéfiniment, du moins très longtemps dans des ampoules de verre scel- ‘ lées à la lampe et qui pourront servir directement de récipient pour Ja redissolution du sérum au moment de l’emploi.

Chaque ampoule contient 1 gr. de sérum, qu'il suffira de dissoudre dans 10 cc. d’eau bouillie et refroïdie; on a en quelques minutes une solution prête à être injectée. |

A. CALMETTE avait pensé d’abord que le sérum préparé avec le venin de Cobra pouvait être effectif contre toutes les envenimations; mais les expériences de Prisazix et BERTRAND montrèrent bientôt la spécificité des sérums, comme celle des venins. Bien que tous ces derniers contiennent une substance neurotoxique à action générale, il est certain que les neurotoxines ne sont pas identiques, et les venins sont loin de contenir en même proportion les substances à action locale ; ces substances phlocogènes et hémorragipares existent en plus grande quantité dans le venin des Vipéridés et des Colubridés Opisthoglyphes que dans celui des Colubridés Protéroglyphes ; le sérum anticobra, d’autre part, n’a pas d'action marquée sur l’envenimalion par le venin de Vipère aspic.

A. CALMETTE a d’ailleurs reconnu la spécificité des sérums en préparant à l’Institut Pasteur des sérums polyvalents avec un mélange de divers venins: Lachesis, Crotale, Naja haje, Pseudechis, Notechis, Vipères d'Europe, etc... Mais l’établissement dans diverses contrées d’Instituts de sérothérapie antivenimeuse a retiré la plus grande partie du seul intérêt que pouvaient présenter les sérums polyvalents, qui ne doivent être utilisés que dans les cas où l’on ne sait à quelle espèce de serpent est due la morsure.

En 1895, Fraser, après avoir déterminé la dose minima mortelle de venin de Cobra pour différents animaux et celle de différents venins pour le lapin, reconnut les propriétés neutralisantes in vitro du sérum des animaux immunisés.

La plupart des immunisations furent produites par l’inoculation de

doses graduellement croissantes de venin, bien qu'il ait réussi avec des chats par la voie gastrique. l

Lorsque le sérum antivenimeux et le venin sont inoculés en des régions différentes du corps et aussitôt l’un après l’autre, il faut 2 cc. 5 à 3 cc. de sérum pour sauver l’animal ; il faut 4 cc. de sérum par kilog de poids, inoculés 30 minutes avant le venin, pour protéger le sujet contre une dose un peu supérieure à la dose mortelle ; il suffit de 1 cc. 5, et même de o cc. S d’antivenin injectés 30 minutes après le venin pour protéger contre cette même dose mortelle, et de 5 cc. pour protéger contre deux fois cette dose.

FRASER pensa aussi que le sérum anticobra pouvait être efficace contre différents venins ; mais seulement pour les animaux assez résistants comme les carnivores : le chat, en particulier.

Il attribue la résistance des Carnivores, plus grande que celle des Herbivores, à leur régime carné, et essaya de vérifier cette hypothèse en nourrissant pendant plusieurs semaines des rats blancs exclusivement avec de la viande. Ii constata chez eux un accroissement de résistance.

Il fixe d’abord à 20 cc. la dose de sérum nécessaire pour protéger l’homme, mais après avoir renoncé à produire l’immunité par la voie gastrique, il doute de l’action pratique du sérum dans la thérapeutique humaine, à moins que l’on emploie les doses élevées de 300 à 350 cc. pour protéger contre la dose minima mortelle.

I! considère que la neutralisation du venin par l’antivenin est d'ordre chimique, car elle met un certain temps, une vingtaine de minutes, à se produire ; il écarte la probabilité que les leucocytes stimulés par l’antivenin, puissent protéger l’organisme envenimé, et confirme l'opinion de Prisauix que l’immunité est surtout due à la présence dans le sang d’une substance antitoxique, originaire au moins en partie, d’un constituant du venin lui-même.

A. CALMETTE a vu aussi que la quantité d’antivenin nécessaire à protéger un animal contre la dose mortelle de venin est d'autant plus grande que l’espèce est plus sensible ; il employait comme terme de comparaison le lapin.

La durée de l’immunité acquise contre le venin est d'autant plus grande que la dernière dose de venin inoculée a été plus forte; un lapin habitué à la dose mortelle de venin de Cobra est encore résistant au bout de deux mois. Cette durée est portée à 8 mois lorsque le sujet a été immunisé contre 120 fois la dose mortelle.

L'immunité passive a une durée beaucoup moindre : elle ne dépasse pas quelques jours : la dose de 20 cc. de sérum anticobra inoculée dans les veines protège un lapin normal pendant une période de 7 jours contre la dose qui tue les témoins en 15 à 20 minutes. L'injection quo tidienne pendant deux semaines confère une immunité qui peut durer dr» 20 à 25 jours.