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elle persiste plus longtemps après l’action de la solution iodo-iodurée. Mais la plupart des liquides fixateurs et des colorants la détruisent, notamment l'alcool, le chloroforme, l’éther ; et nous n'avons jamais pu observer la biréfringence des granulations sur les coupes montées.

Drascn à tourné la difficulté et a pu voir la biréfringence sur des granulations incluses dans la glande

« Si on prépare une petite glande à venin de Salamandre qu'on vient de tuer, en enlevant le sac, la membrane capillaire, et, autant que possible, beaucoup de tissu conjonctif lamelleux, qu'on l’arrose avec quelques gouttes de liqueur de Flemming, qu’on la coupe en deux et qu’on porte l’un des segments ainsi obtenus sous le microscope polariseur, alors apparaissent les cellules à venin neutres (c’est-à-dire ce que j'ai appelé les sacs à venin), incluses dans une masse qui paraît traversée par

de nombreuses perles étincelantes de toutes couleurs ».

Drascx en conclut, d’une manière qu'il considère comme irréfutable, que les granulations biréfringentes sont une production exclusive du syncytium, c'est-à-dire du protoplasme général et périphérique de la glande et que les cellules à venin (c’est-à-dire les sacs à granulations) n’y sont pour rien ; ils fourniraient simplement les granulations inactives de la sécrétion.

Dans son assertion, il s'appuie encore sur d’autres faits que j'ai vus aussi de mon côté : c’est la production de cristaux toxiques, dans les préparations de venin frais, aux dépens des granulations biréfringentes. Cette apparition se produit presque instantanément, sous les yeux de l'observateur, lorsqu'on fait passer sous la lamelle qui recouvre le venin frais une goutte d’eau aiguisée d’acide chlorhydrique ou d’acide azotique à 5 p. 100 : à la place même des granulations qu’on voit disparaître, il se forme des aiguilles cristallines qui forment bientôt des faisceaux. Ces cristaux, préparés par le même procédé et en quantité qui permettent d’en essayer l’action, se montrent très toxiques, ce sont des sels des alcaloïdes du venin. Il n’est d’ailleurs pas nécessaire d'employer des acides ; ils se forment à l’état d’alcaloïdes pur dans les émissions aqueuses du venin ;mais leur apparition est un peu plus longue à se produire, c’est là toute la différence.

Ainsi, il existe dans le venin des granulations biréfringentes et d’autres, en plus grand nombre, qui ne le sont pas. Dans la glande, ces granulations biréfringentes ne se trouvent pas incluses dans les sacs à venin, mais disséminées dans le syncytium.

De notre côté, nous avons pu constater, par les colorants divers, que le syncytium et les sacs contiennent en général des granulations de même couleur et de même aspect ; en outre que les sacs renferment quelques granulations identiques à celles qu’on trouve en formation à l’intérieur du noyau. En particulier, le procédé de Heïidenhain a montré que, dans le syncytium, il n'existe que des granulations colorées en noir, tandis

que dans les sacs, il y a, outre des granulations noires, un grand nombre de granulations grises, à peine colorables.

Nous avons vu aussi qu'il ne suffit pas que le venin contienne des granulations pour qu'il soit actif ; chez les jeunes Salamandres, nouvellement transformées, et où les glandes ont acquis leur forme définitive, il y a un contenu granuleux, mais inactif. Chez l'adulte, C. Pmisarix a signalé le même fait, à savoir que le venin qui devient fluide et opalin après les excitations prolongées, par exemple, devient de moins en moins toxique.

Mais pour toutes ces raisons, faut-il conclure, comme le fait Drascu, que les granulations des sacs et celles du syncytium: sont de nature et d’origine tout à fait différente ? On ne peut admettre cette manière de voir.

L'étude embryologique du développement des glandes, du développement des sacs à venin et du travail du noyau, les faits physiologiques mêmes qui se rapportent à la lenteur du travail de sécrétion, nous portent au contraire à croire que les différences physiques que présentent les granulations du venin, sont dues à l’évolution graduelle de ces granulations, à une maturité imparfaite des jeunes grains, qui n’acquièrent d’emblée ni leur structure physique, ni leurs propriétés chimiques définitives.

Extraction et propriétés des substances actives du venin

L'action physiologique du venin de Salamandre a été étudiée et signalée sur divers animaux, et même sur l’homme, bien avant qu’on ait songé à en rechercher la nature chimique et à en extraire le principe actif.

Le premier travail important que l’on rencontre sur le sujet esl publié, en 1866, par Zaresky. L'auteur y donne un procédé de traitement du venin granuleux et en retire un alcaloïde qu'il appelle Samandarine et dont il fait l’étude toxicologique.

Plus récemment, C. Prisauix, en 1889, a retiré du venin granuleux un alcaloïde dont le chlorhydrate cristallise aisément, et qui, tout er ayant les mêmes propriétés physiologiques que la Samandarine de ZA. LEsky, en diffère par quelques propriétés physiques telles que la solubilité et la cristallisation. Il l’appelle Salarnandrine, comme les autres auteurs français. En 1892, M. le Professeur ArNaun retirait à son tour du venin deux alcaloïdes, un premier identique à la Salamandrine de C. Pnisarix, et un second qui semble être une espèce nouvelle différente des deux premières. Enfin En. Fausr, en 1899, a également isolé deux alcaloïdes dont il a fait une étude très complète ; il conclut à deux espèces chimiques différentes, et il donne le nom de Samandaridine à l’alcaloïde le moins soluble, celui qui correspond à l’alcaloïde isolé et étudié par C. Prisazix, en

conservant le nom de Samandarine à l’alcaloïde découvert par ZALESKY.

Nous résumerons les procédés employés par ces auteurs pour l'extraction des alcaloïdes du venin et décrirons ensuite le nôtre qui nous a fourni un rendement plus considérable.

Procédé Zalesky. — La sécrétion crémeuse des glandes granuleuses de la Salamandre est obtenue en râclant avec un scalpel ou mieux avec une cuillère à thé les parties postérieures et latérales de la tête et du dos de l’animal. La masse ainsi obtenue est plongée dans l’eau bouillante, et cet extrait aqueux chaud traité par l'acide phospho-molybdique : il se forme un abondant précipité blanc jaunâtre, floconneux, qui possède une grande toxicité. On le lave, on le dissout dans l’eau de baryte, et on précipite la baryte en excès par un courant de gaz carbonique. On porte à l’ébullition et on filtre. Le filtratum est d’abord distillé, autant que possible à feu nu dans une cornue tubulée ; ensuite il est complètement desséché au bain-marie dans un courant d'hydrogène. Avant que le résidu soit complètement sec, il se forme en abondance de longs cristaux en aiguilles, qui disparaissent par la dessication complète. Après celle-ci, il reste une masse amorphe, incolore, cassante, dont la plus grande partie est facilement soluble dans l’eau.

Pendant la dessication dans le courant d'hydrogène, une partie de la masse se modifie de telle sorte qu'il se produit un corps résineux, insoluble dans l’eau, légèrement soluble dans l’alcool, auquel il donne une fluorescence passagère.

La solution aqueuse ou alcoolique de cette masse, saturée avec l’acide chlorhydrique et évaporée au bain-marie dans le courant d'hydrogène, abandonne avant la dessication de longs cristaux en aiguilles qui disparaissent de nouveau par la dessication complète.

La base isolée de sa combinaison chlorhydrique a donné à l'analyse la formule C8H®Az201 ; elle s’unit à 2HCI pour former le chlorhydrate : c’est la Samandarine. Cette base est un alcaloïde fixe, qui, desséché. conserve ses propriétés pendant plusieurs mois ; il est soluble dans l’eau et dans l'alcool. Sa solution est indécomposable à l’ébullition ; mais lorsqu'on dessèche le produit à l'air, il perd d’abord son eau de cristallisation, puis se décompose. Avec les acides, il donne des sels neutres ; l’acide phospho-molybdique, en particulier, le précipite de ses dissolutions ; il en est de même du chlorure de platine. Quand on évapore une solution chlorhydrique de samandarine dans laquelle on a versé du chlorure de platine, il se forme une masse bleue amorphe qui permet de déceler l’alcaloïde.

Dans ce mode de préparation, où l’auteur utilise la propriété de l’acide phospho-molybdique de précipiter les alcaloïdes, il n'obtient qu'un corps par le traitement du résidu sec. C’est avec le chlorhydrate de ce corps qu'il a réalisé ses expériences sur divers animaux.

C. Pmisauix, répétant le procédé de ZaLesky, et en suivant attentivement les phases, a observé qu’au début de l’évaporation, dans un courant d'hydrogène, du liquide alcalin, il se forme un précipité blanc pulvérulent qui ne disparaît pas. En décantant à ce moment le liquide soumis à l'évaporation, il a vu que le précipité est un peu soluble dans l’eau et dans l’éther, et que dans la solution éthérée abandonnée à l’évaporation,

il se forme de belles aiguilles cristallines qui se groupent en faisceaux. Ces cristaux dissous dans l’eau se montrent très toxiques ; ils tuent la souris avec les mêmes symptômes convulsifs que le venin entier. L’éther et le sulfure de carbone enlèvent à cette poudre une substance d’aspect graisseUX.

Si, après avoir séparé ce premier précipité, on continue l’évaporation dans le courant d’hydrogène, on obtient un résidu jaunâtre de consistance cireuse. Ce résidu est très alcalin ; l’éther ne lui enlève qu’un peu de substance grasse. Il est peu soluble dans l’eau. Traité par l’eau bouillante, il dégage une odeur parfumée de cire d’abeiïlle. La solution aqueuse acidulée par l’acide chlorhydrique et évaporée au baïn-marie abandonne de longues aiguilles prismatiques ; elle est très toxique et produit les mêmes symptômes que celles du premier précipité.

L'observation précédente suggère l’idée que deux corps différents peuvent exister dans la sécrétion venimeuse de la Salamandre terrestre. Ils y existent, en effet, comme nous le verrons bientôt, et tout en possédant les mêmes propriétés physiologiques, ils se distinguent par d’autres caractères, entre autres leur coefficient de solubilité.

Procédé C. Phisalix. —- C. Pnisarrx a employé, pour extraire l’alca- Joïde du venin de la Salamandre terrestre la méthode suivante : il exprime le venin directement par pression, ou par excitation électrique, et le reçoit dans l’eau distillée. L’émulsion laiteuse ainsi obtenue est acidifiée par l’acide chlorhydrique ; on filtre et on évapore dans le vide sur l’acide sulfurique. Le résidu est repris par l’alcool à 95°. Celui-ci., évaporé lentement ou distillé, laisse apparaître de beaux cristaux en aiguilles qui sont plongés dans une matière visqueuse, jaunâtre, soluble dans l’alcool. Ces cristaux, lavés avec un peu d'alcool, sont essorés à la trompe et purifiés par plusieurs cristallisations successives.

Si au lieu de recevoir le venin dans l’eau on l’exprime sur une plaque de verre, il ne tarde pas à coaguler et à se prendre en une masse molle, élastique, qui brunit peu à peu à l’air. Pour en retirer l’alcaloïde, on réduit le coagulum en menus fragments, et on l’épuise par l’eau aiguisée d’acide chlorhydrique à 1 pour 1.000, en chauffant au bain-marie. On filtre, on évapore jusqu’à ce qu’on voie se déposer quelques cristaux ; on laisse la liqueur refroidir ; la cristallisation se fait alors très rapidement. Ce sont des cristaux en aiguilles, groupés soit en faisceaux, soit en étoiles, que l’on purifie comme il est dit ci-dessus et qui représentent le chlorhydrate de Salamandrine.

M. le Professeur Lacroix, dont on connaît la compétence en cristallographie, en a déterminé les caractères optiques. Ce sont de petites baguettes allongées, sans pointement, qui forment souvent des mâcles à 60° ; ils sont monocliniques ; les extinctions sont toujours parallèles aux côtés du prisme. Le plan des axes optiques est perpendiculaire à l’allongement. Les cristaux allongés sont couchés suivant deux faces,

l’une à allongement négatif, l’autre à allongement positif. Cette dernière est sensiblement normale à la bissectrice de l'angle aigu des axes optiques. Cette bissectrice est positive ; l’angle 2 E des axes optiques est égal à 25°. Malgré la pureté apparente de la substance cristallisée ainsi obtenue, il était à prévoir qu’elle n’était pas homogène. C. Pisauix a eu recours à l’habileté du Professeur ArNauD» auquel on doit la découverte d'’intéressants alcaloïdes. Du venin granuleux de 300 Salamandres, exprimé dans l’eau distillée, puis traité par l’acide chlorhydrique, M. ArnAup retira par cristallisations fractionnées deux chlorhydrates différant entre eux par quelques détails de propriétés physiques : l’un de ces sels est moins soluble dans l’eau, plus blanc, plus dense ; l’autre est plus soluble, moins blanc, moins dense ; le premier est un peu plus toxique que l’autre.

Procédé de Edwin $S. Faust. — Cet auteur emploie l’animal entier pour extraire le venin contenu dans la peau. A cet effet, les Salamandres sont tuées par le chloroforme, qui détermine une abondante sécrétion des glandes cutanées. et découpées en morceaux. Ce hachis de Salamandres est arrosé avec une grande quantité d’eau, additionnée d'acide acétique, jusqu’à faible réaction acide, puis porté à l’ébullition ou chauffé pendant plusieurs heures au bain-marie. Après refroidissement, on filtre ; la masse que retient le filtre est de nouveau épuisée au bain-marie par de l’eau légèrement acétifiée. Le filtratum trouble est directement traité par l’acétate de plomb en excès : il se forme un abondant précipité que l’on sépare par filtration. Au filtratum clair, on ajoute de la lessive de soude pour enlever une partie du plomb ; le précipité d’hydroxyde de plomb entraîne une nouvelle quantité d’albumine. Ce précipité est séparé par filtration, et le’liquide additionné d'acide sulfurique dilué : le plomb encore dissous précipite à peu près complètement ; nouvelle filtration après laquelle le liquide filtré donne encore la réaction du biuret.

Si l’on ajoute à ce filtratum, qui contient encore un peu d'acide suifurique libre, de l’acide phospho-tungstique, il se forme un volumineux précipité qui, indépendamment des corps albuminoïdes, renferme Ja véritable substance toxique de la sécrétion venimeuse. Ce précipité est traité à la manière ordinaire par l’eau de baryte ; on filtre ; le filtratum est neutralisé avec l’acide sulfurique, et le sulfate de baryum formé est séparé par filtration. Le liquide est alors additionné d'alcool qui dissout les alcaloïdes, tandis que les albumines et les peptones restent en partie insolubles. L'alcool filtré est concentré par évaporation ; le résidu sirupeux est encore additionné d'alcool et filtré. On évapore de nouveau et om renouvelle cette opération plusieurs fois. On obtient enfin une solution de Samandarine ne donnant que très faiblement la réaction du biuret, et qui peut être conservée sans altération pendant des mois. E. Fausr débarrasse complètement cette solution de traces de peptones, en la traitant à nouveau par la baryte caustique, finement pulvérisée. Les peptones forment avec le baryum un précipité insoluble dans l’alcool, ce qui per-

met d'obtenir une solution de Samandarine, pure de toutes traces d’albu. minoïdes, et ne donnent plus la réaction du biuret.

La Samandarine ainsi préparée ne cristallise pas ; elle est insoluble dans l’éther éthylique ainsi que dans l’éther de pétrole.

Après avoir vainement esayé d’en faire des sels cristallisables avec les acides chlorhydrique, azotique, acétique, oxalique et picrique, E. Fausr a réussi à préparer le sulfate cristallisé par le moyen suivant : la solution de Samandarine est acidulée avec l’acide sulfurique et précipitée de nouveau avec l'acide phospho-tungstique pur ; le précipité rassemblé sur le filtre est bien lavé, puis décomposé à la manière ordinaire par la baryte caustique pure ; on filtre, et la baryte est précipitée par l'acide sulfurique et un courant d’acide carbonique.

Si on neutralise par l’acide sulfurique la solution aqueuse de Samandarine ainsi obtenue, et qu’on évapore à sec, à une chaleur modérée, on obtient un résidu amorphe, faiblement coloré en jaune et soluble dans l'alcool. La solution alcoolique est additionnée d’éther jusqu’à la production d’un trouble persistant : on voit alors se former, au bout de quelques jours, à basse température, de très fines aiguilles cristallines inicroscopiques, qui se réunissent en touffes ou en amas étoilés. Ces cristaux sont lavés avec un mélange d’alcool et d’éther, et desséchés.

Si on en fait à chaud une solution de concentration moyenne et qu’on laisse lentement refroidir, il se forme de belles aiguilles de 1 cm 1/2 de long. Ces cristaux tombent en efflorescence à l’air ; ils sont lévogyres et dévient à — 53°,59 le plan de polarisation. La constitution de ce corps, établie par l'analyse élémentaire, correspond à la formule C#HS%A7{0? +SOfH?, que l’on peut écrire, l’acide sulfurique étant bibasique MSA Z O0) SO.

Si l’on ajoute à la solution de sulfate de Samandarine une lessive de soude, la base devient libre et se sépare sous forme d'huile légèrement colorée en jaune qui, même après un séjour de deux semaines à la glacière, ne se congèle pas.

Additionnée d'acide chlorhydrique concentré et porté à l’ébullition, la Samandarine donne naissance à un corps d'aspect huileux, sur la nature duquel des données précises ne peuvent être fournies.

Le sulfate de Samandarine peut être décelé par une réaction donnant un produit coloré : si on ajoute de l’acide chlorhydrique concentré sur des cristaux de sulfate, et qu’on porte à l’ébullition, on aperçoit au bout de quelques minutes, une coloration violette, qui devient bleu intense par une ébullition plus prolongée.

Cette réaction explique l’observation de Zaresxy relativement au chlorure de platine, qu'il fait agir sur une solution chlorhydrique de Samandarine : par évaporation à sec, il se forme une masse bleue amorphe transparente et insoluble dans l’eau, mais dans la production de laquelle le chlorure de platine ne joue aucun rôle. Pour les alcaloïdes connus, on

n'observe cette réaction précise qu'avec la vératrine qui, dans les mêmes conditions, donne une belle coloration rouge.

Séparation d’un deuxième alcaloïde dans le procédé de Faust. — Le premier précipité obtenu avec l'acide phospho-tungstique, dans la décoction de Salamandre préparée comme il vient d'être dit, est additionné d’eau de baryte qui met le ou les alcaloïdes en liberté. On neutralise avec l'acide sulfurique et on filtre pour séparer le sulfate de baryum. De la solution chaude, neutre, donnant encore la réaction du biuret, il se sépare un sulfate cristallisé dont la base diffère de la samandarine par sa constitution et quelques-unes de ses propriétés. Fausr lui a donné le nom de Samandaridine. Cette base qui correspond probablement à celle du premier précipité obtenu par C. Pmsarix en employant la méthode de ZaLEsky, a pour constitution (C*? H31 Az O) ; et son sulfate (C2 H31 Az O}? + SO‘ Hi

Ce sulfate est moins soluble dans l’eau et dans l’alcool que le sulfate de samandarine, et n’a pas d’action sur la lumière polarisée. Avec l'acide chlorhydrique à l’ébullition, la Samandaridine se comporte comme la première, donnant d’abord une coloration violette, puis bleu intense si l’on prolonge l’ébullition.

Par distillation sèche avec le zinc en poudre, elle donne un distillat alcalin dont l’odeur fait aussitôt penser à la présence de pyridine, de quinoléine ou de leurs dérivés.

En traitant ce distillat par l’eau acidulée à l’acide chlorydrique, la plus grande partie du produit se dissout ; on a une solution acide qu’on agite avec de l’éther ; puis on décante celui-ci, tandis que le résidu aqueux est filtré bouillant sur noir animal. On ajoute au filtratum chaud et acide du chlorure de platine. Par refroidissement, il se forme de fines aiguilles cristallines d’un jaune sombre ; et ces cristaux essorés fondent à 261°. o gr. 1622 de cette substance calcinée laissent un résidu de o gr. 0444 de platine, c’est-à-dire équivalant à 27,36 p. 100 de platine. Le point de fusion, ainsi que la teneur en platine du sel double ainsi préparé, et isolé par l’auteur des produits de décomposition de la Samandaridine, caractérisent ce même corps comme isoquinoléine. Pour le chloroplatinate d’isoquinoléine, le point de fusion est 263° et la composition (C° H7 Az HCI)? Pt CIf + 2 H? O correspondant à une teneur en platine de 27,59 %. La Samandaridine serait d’après cela un dérivé d’une substance hydrocarbornée hexacyclique contenant de l’azote dans son noyau.

Si l’on compare la constitution C% H# Az? O de la Samandarine à la formule C2? H* Az O qui correspond à la Samandaridine, on voit que la première contient en plus de la seconde CS H° Az, c’est-à-dire un ensemble très voisin d’un groupe méthylpyridique, C5 H$ (CH*) Az. L'auteur en conclut qu’on pourra peut-être réussir à obtenir de la Samandarine par l’action d’un halogène méthylpyridique sur la Samandaridine, ou inversement obtenir de la Samandaridine par dédoublement de la Samandarine. Mais on n’a pu encore justifier cette hypothèse. Jusqu'ici, ajoute E.

Fausr, on pensait que les alcaloïdes toxiques appartenant aux dérivés de la quinoléine, étaient exclusivement formés par les végétaux. Par la préparation des deux alcaloïdes précédents, obtenus purs, et leur identification comme dérivés de l’isoquinoléine, cette possibilité est aussi démontrée pour les organismes animaux.

L'action physiologique de la Samandaridine est la même que celle de la Samandarine ; elle n’en diffère que par sa moindre toxicité.

Des 8oo Salamandres sur lesquelles a porté l’intéressant travail de M. E. Fausr, il a retiré en tout 5 gr. 8 des deux sulfates ; ce qui est un rendement assez faible, bien que les produits soient très purs. Cela tient sûrement à ce qu'il a employé tout l’animal, au lieu de n’opérer que sur le venin exprimé, ou tout au moins sur la peau qui, seule, contient des alcaloïdes en quantité appréciable. Il a de la sorte inutilement introduit dans sa préparation des substances qu'il a fallu précipiter successivement, et en grande masse par rapport aux principes à extraire. Les précipités successifs et nombreux de son procédé ont retenu et entraîné mécaniquement la plus grande partie des alcaloïdes. On ne peut comprendre ce mode de procéder que par le temps qu'a voulu gagner E. Fausr à préparer ses matériaux, car il faut avouer que l’expression directe des glandes est une opération assez longue ; mais le dépouillement de l’animal est un moyen beaucoup plus rapide, et qui donne encore de bons résultats.

Procédé Marie Phisalix. — Le liquide laiteux fourni par l’expression des glandes granuleuses de la Salamandre dans l’eau distillée est concentré par évaporation à basse température et précipité par cinq à six fois son volume d’alcool à 95° qui précipite les albuminoïdes et dissout les principes immédiats générateurs des alcaloïdes. On met évaporer le filtratum dans le vide de la trompe. Au fur et à mesure que l’évaporation avance, on voit apparaître des cristaux blancs qui, à la fin de l'opération, occupent tout le fond du cristallisoir ; c’est la salamandridine.

Ces cristaux vus au miscroscope ont la forme d’aiguilles groupées en faisceaux ou en étoiles ; ils sont légers et secs, et possèdent les propriétés physiologiques du venin entier.

Une partie de l’extrait alcoolique ne cristallise pas, et reste à l’état de substance pâteuse et jaunâtre. Cette substance, reprise par l'alcool et par l’eau, peut encore donner une certaine quantité de cristaux. Ce pro cédé fournit presque sans déchet, et sans manipulations compliquées un des alcaloïdes du venin de Salamandre. Le rendement est, en effet, assez satisfaisant : 14 Salamandres ont donné, seulement pour les glandes caudales, 65 milligrammes de cristaux purs, ce qui équivaut à o gr 464 pour 100 Salamandres. Si l’on considère que le nombre des glandes de la queue n’est guère que le cinquième du nombre total des glandes granuleuses, on arrive au chiffre de 2 gr. 320 d’alcaloïde pour 100 individus, ou de 17 gr. 560 pour 800. Par son procédé, Fausr n’a trouvé pour ce même nombre de 8oo Salamandres hachées que 4 grammes de sulfate de Sala-

mandridine et 1 gr. 8 de sulfate de Salamandrine, soit 5 gr. 8 seulement pour les deux sels d’alcaloïdes.

Il est presque impossible, on le comprend, quelque moyen que l'on emploie, de faire sortir tout le venin des glandes granuleuses. Aussi, si l’on veut compléter l’extraction du principe actif restant dans la neau, faut-il avoir recours à une manipulation complémentaire. L'animal dont on a exprimé la plus grande partie du venin, par pression directe, est chloroformé et dépouillé ; la peau est plongée dans l’alcool à 95°, qui coagule comme on sait le venin muqueux, et on la laisse macérer pendant plusieurs jours. On décante ensuite l'alcool, on exprime celui qui reste dans la peau, on filtre et on distille au bain-marie jusqu’à réduction de moitié du volume du liquide environ, puis on met évaporer à la température de 50°. Dans ce liquide alcalin, on voit se déposer peu à peu un précipité blanchâtre qui, vu au microscope, se montre formé de petites sphères hérissées d’aiguilles cristallines. On les sépare par filtration, on les lave sur le filtre, à l’eau distillée, puis on les reprend par l’eau bouillante, et on filtre de nouveau : au fur et à mesure que le liquide filtré se refroidit, il se trouble par la formation d’un précipité blanc qui se prend en masse. Celui-ci est constitué par de belles aiguilles groupées en pinceaux ou en étoiles. Ces cristaux représentent le premier alcaloïde isolé par C. Paisazix. Les eaux mères sont à nouveau réduites par évaporation : il ne tarde pas à se former à leur surface de nouveaux cristaux très blancs, en grandes aiguilles qui flottent en voile épais. Ces cristaux moins denses,

et plus solubles que les premiers représentent le deuxième alcaloïde de M. ARNAUD.

Essai de séparation des principes immmédiats du venin granuleux. — Jusqu'ici les auteurs qui, par des procédés divers, ont extrait les alcaloïdes du venin de Salamandre et déterminé leur constitution chimique, n’ont pas recherché sous quelle forme la substance active s’y rencontre. Existe-t-elle à l’état libre, en dissolution dans le plasma glandulaire ; faitelle partie d’une combinaison chimique complexe, ou bien encore seraitelle un produit de formation secondaire, sous l’influence de réactifs chimiques agissant soit dans l’organisme, soit en dehors de lui ? C’est ce que nous avons essayé d’élucider. Si on reçoit dans l’alcool fort le venin directement exprimé des queues de Salamandre, et qu’on mette évaporer cet alcool dans le vide, on obtient un extrait très toxique de consistance molle, de couleur jaunâtre, à odeur parfumée, dans lequel il n'apparaît pas de cristaux.

De même, si on plonge dans l’alcool fort les peaux desséchées, après les avoir ou non traitées par le sulfure de carbone, l’extrait alcoolique, aussi très toxique, n’abandonne pas de cristaux par évaporation.

Les alcaloïdes dont l'alcool est un des meilleurs dissolvants, n'’existent donc pas à l’état libre dans le venin.

Ces résultats se modifient si l’on traite ultérieurement l'extrait alcoo-

lique de venin ou de peaux sèches par l’eau distillée, ou qu’on reçoive le venin dans l’eau, avant addition d’alcool, ou enfin qu’on plonge les peaux fraîches dans l’alcool.

En effet : en ajoutant de l’eau distillée sur cet extrait alcoolique fort de venin frais, il se produit un léger louche qui disparaît peu à peu, en même temps qu'on voit se former dans le liquide de fines aiguilles cristallines qui se groupent en faisceaux ou en mâcles ; ces cristaux sont de la Salamandridine. Pendant cette réaction, l’odeur primitive se développe davantage, et rappelle celle du miel ou du coing. On décante pour séparer les cristaux de l’eau jaunâtre et parfumée, et on les purifie.

Le liquide parfumé concentré par évaporation rapide, reste sirupeux ; quoiqu'il ne contienne plus de cristaux visibles au microscope, il est encore très toxique, car il suffit de o cc. 0066 pour provoquer en deux minutes, chez la grenouille, une attaque tonico-clonique, suivie d’une paralysie avec secousses cloniques, qui se termine au bout de 3 jours par la mort. Il était à présumer qu'une nouvelle addition d’eau dans ce liquide produirait une nouvelle apparition de cristaux toxiques, c’est en effet ce qui a lieu : on obtient une cristallisation aussi abondante que la première. On peut répéter plusieurs fois de suite la même opération ; vers la quatrième ou la cinquième, l’addition d’eau ne fait plus apparaître de cristaux ; on a un résidu toujours parfumé, mais très toxique, et contenant par conséquent encore des alcaloïdes. Injecté à une Grenouille, ïi produit les accidents caractéristiques à la dose de o cc. 00078, dose neuf fois plus faible que celle qui suffisait après l’enlèvement des premiers cristaux. Cette différence est certainement beaucoup plus grande que l’erreur possible. La toxicité continue et même croissante du résidu ne s'explique guère que par les réactions chimiques, que l'addition d'eau a provoquées. Il est donc permis de penser que c’est par hydratalion des principes immédiats, et dédoublements ultérieurs, que les alcaloïdes sont mis en liberté.

Les principes immédiats qui contiennent les alcaloïdes du venin sont donc solubles dans l'alcool fort ; ils sont également solubles dans quelques autres réactifs, comme nous allons le voir.

Si on plonge dans le chloroforme des peaux fraîches de Salamandre, il se fait une plasmolyse lente et graduée qui expulse ou fait exsuder parmi les produits constitutifs de la peau et des glandes, ceux qui sont insolubles dans le chloroforme. Le liquide déplacé par le chloroforme vient surnager à la surface de celui-ci ; il est fortement alcalin. Aspironsle au moyen d’une pipette, et injectons-en 1 cc. dans le péritoine d’une Grenouille. Au bout de dix minutes environ, la respiration du sujet devient intermittente et irrégulière, le saut pénible. La parésie augmente ; l'animal a peine à se mouvoir, et mis sur le dos, ne peut se retourner. Quant on l’excite, il réagit à peine par quelques mouvements des pattes ; au bout d’une heure, c’est la flaccidité absolue, qui aboutit à la mort. A aucun moment, on n’observe de mouvements convulsifs. Le symptôme

caractéristique déterminé par la Salamandrine étant la convulsion, on peut donc en conclure que le liquide exsudé n’en contenait pas trace ; il manifestait au contraire l’action du venin muqueux. Les principes immédiats contenant les alcaloïdes ont été dissous entièrement, par le chloroforme, ainsi que les corps gras du venin. Après distillation, l'extrait chloroformique de peau, laisse un résidu visqueux, huileux, jaunâtre, de réaction neutre. Ce résidu est, comme on peut s’y attendre, très toxique ; il tue la Grenouille en quelques heures à la dose de o cc. 14 en produisant les accidents convulsifs habituels. Toutes tentatives pour en retirer les corps cristallisables sont restées infructueuses.

Le traitement des peaux fraîches par le chloroforme, constitue en même temps un moyen de séparation des principes immédiats des corps toxiques, du venin muqueux et du venin granuleux.

Quand on répète l'expérience précédente en substituant l’éther au chloroforme, dans le produit plasmolysé dominent les principes toxiques du venin granuleux ; o cc. 3 de ce liquide injecté à une grenouille produisent des convulsions caractéristiques en vingt à vingt-cinq minutes. Quant à l’éther lui-même, il abandonne un résidu onctueux et jaune dans lequel on voit au microscope des cristaux en aiguilles et en mâcles. Si on émulsionne ce produit avec un peu d’eau et qu’on l’inocule à une gre nouille, on observe une paralysie immédiate, puis dix minutes après l’inoculation une attaque tonico-clonique, suivie de quelques autres, et la mort en vingt-cinq minutes. L’éther a donc dissous lui aussi des principes immédiats toxiques, mais un peu moins que le chloroforme, puisqu'il en est resté dans le liquide plasmolysé.

En essayant de la même manière, mais sur des peaux séchées dans le vide, l’action dissolvante du sulfure de carbone, on obtient par distillation du sulfure un extrait huileux, jaunâtre, neutre, très riche en cholestérine : celle-ci cristallise spontanément, et peut ainsi être séparée. Cet extrait sulfo-carboné est soluble dans l’éther, mais très peu dans l'alcool ; au microscope, on aperçoit dans l'extrait, des cristaux de cholestérine, et des globules sphériques ou ovoïdes à zones concentriques alternativement claires et sombres ; la plupart de ces globules présentent la croix de polarisation.

Contre toute prévision, l'extrait sulfo-carboné, inoculé à la grenouille, a occasionné la mort avec les accidents convulsifs caractéristiques du venin. Il faut donc en conclure que le sulfure de carbone a aussi dissous les principes immédiats toxiques, et cela en assez forte proportion, car il suffit de o cc. 14 de l’extrait huileux pour tuer une grenouille en vingt-quatre heures.

Cependant la plus grande partie de la substance active est restée dans la glande, d’où on peut l’extraire par l’alcool fort : des peaux sèches, épuisées à trois reprises par le sulfure de carbone, ont été plongées dans l'alcool à 95°. L'alcool distillé dans le vide ou à l’air, laisse un résidu jaunâtre, visqueux, dans lequel surnagent quelques gouttelet-

tes huileuses de couleur plus sombre. Ce résidu, très acide, reste liquide à l’air, et ne se dessèche pas complètement à la chaleur ; il reste incristallisable quand on ajoute de l’eau distillée ou même de l’eau acidulée. Cei extrait alcoolique est trois fois plus toxique que l’extrait sulfo-carboné, et produit les mêmes symptômes chez la grenouille.

Des essais précédents nous pouvons conclure 1° que les alcaloïdes n'existent pas à l’état libre dans la glande ; ils s’y trouvent sous forme de principes immédiats que nous n’avons pu isoler encore, et qui soni très solubles dans l’alcool et le chloroforme, un peu moins dans l’éther et le sulfure de carbone ; 2° que les actions chimiques qui aboutissent à la séparation des alcaloïdes nécessitent le contact de l’eau, ce qui permet de penser qu’elles sont dues à une hydratation suivie de dédoublement.

Les deux espèces de cristaux obtenus par cristallisations successives et qui diffèrent entre eux par leur solubilité et leurs poids spécifiques correspondent-ils aux deux alcaloïdes isolés et analysés par E. Faust ? Pour les identifier, il faudrait déterminer leurs constantes physiques ; malheureusement la quantité de substance dont nous pouvions disposer après essais physiologiques, était insuffisante pour cette recherche.

Toutefois en nous fondant sur les différences de toxicité, nous ne croyons pas que ces deux sortes de cristaux représentent la Samandaridine et la Samandarine de Fausr. En effet, d’après ce dernier auteur, la dose de Samandaridine nécessaire pour déterminer la mort avec les mêmes symptômes est sept à huit fois plus grande que celle de Samandarine. La différence de toxicité entre nos alcaloïdes est moindre : chez la grenouille, la dose mortelle minima est environ o mmg. 6 pour le premier alcaloïde, le moins soluble, et de o mmg. 5 pour le second. II est donc probable que la Salamandrine se trouve en solution dans le résidu sirupeux très toxique, qui reste après la séparation des cristaux par les procédés que nous avons employés. Ce résidu renferme encore quelques sels qui cristallisent, mais qui ne sont pas toxiques. Après les avoir enlevés, le liquide n’a rien perdu de sa toxicité ; il est insoluble dans l’éther, dans le mélange d'alcool et d’éther, et ne cristallise pas spontanément.

En résumé, on peut extraire du venin de Salamandre trois alcaloïdes. Les deux premiers cristallisent aisément et se distinguent par leurs caractères physiques (ArnauD) ; l’un d’eux correspond à la Samandaridine de Fausr, et nous l’appelons Salamandridine ; le troisième cristallise difficilement et diffère des deux autres par ses caractères physiques et chimiques : c’est la Samandarine ou Salamandrine proprement dite, isolée en premier lieu par Zaesky. Ce sont les deux premiers alcaloïdes que nous avons préparés et qui ont servi à nos études physiologiques.

Action physiologique du venin granuleux et de ses alcaloides

L'action physiologique du venin de Salamandre produit les mêmes symptômes généraux que les alcaloïdes toxiques qu'on en retire ; Ce qui

explique la connaissance assez exacte que l’on possédait de l’envenimation salamandrique, bien avant que les travaux de GrATIoLET et CLoEz, et de Zarrsky eussent attiré l’attention sur les propriétés chimiques du venin, et permis à ce dernier auteur d'en isoler un principe actif.

Les alcaloïdes isolés ensuite, soit par C. Paisaurx, soit par M. Arnaun, soit par E. Fausr, ou enfin par nous-même, ne possèdent entre eux que des différences insignifiantes, portant sur la dose toxique et sur la durée de la survie ; mais non sur la succession ni la nature des symptômes.

On peut donc, dans l’étude physiologique, employer soit le venin en nature, à la manière des empiriques et des empoisonneurs ; soit les alcaloïdes ou leurs sels, ce qui permet d'établir pour chacun d'’eux les doses toxiques minima qui agissent sur les différents animaux.