ANN. SCIB.\C£ AGRO.N. IG
[)orlc-ol)jot et non sur la lamelle*. Les microbes colorés selon ce procédé apparaissent très nets et fortement teinlés quand on les exîimine avec un objectif 12 à immersion bomojjène de Vérick et avec tout le tiia{^e de Toeulaire i3. Toutefois, les préparations dans le cblorure de calcium conservent un fond un peu plus coloré et plus chargé d'impuretés que celles (|ui sont montées dans le baume.
20. Itidépendamment d(îs préparations faites comme on vient de le dire, nous employons, pour la photographie, des préparations fixées sur la lame et rec^ouvertes, sans aucun liijuidc intermédiaire soit d'un couvre-objet, soit d'uuc seconde lame porte-objet, qu'on enlève au mouieut de Tusage. Ces préparations à sec ne sont pas très favorables à l'observalion des détails intérieurs du microbe, à la recheiche des spores par exemple, mais elles montrent des bactéries colorées eu violet opaipii* presque noir et d'un relief remarquable, pennr'ltiml d'obtenir de bonnes photographies.
27. In/hfcnre des tutralcs sur les B. denilrilieans. — Avant d'étudi(u*le mode d'aclion de ces microbes sur les nitrates et les circon>tances qui [)euvent modifier leur pouvoir réducteur, il convient d'insister sur Tinfluence du nitrate lui-même sur leur développement.
Ensemencé dans un vase à fond plat, contenant en grande surface, sous une faible épaisseur, du bouillon ou du liquide artificiel exemi)t de nitrates, le B. dcuilriflcans se multiplie dans toute la masse, jiarce qu'il reçoit largement le contact de l'air extérieur. Mais dans un vase étroit, tel (pie le tube de la figure 1, par exemple, il ne se déveIo[)pe (jue dans les couches supérieures du liquide, là seulement où Toxygène peut se diffuser.
Dans ce cas, il forme à la surface, en moins de vingt-quatre heures, une couche membraneuse, zoogléiipie, bientôt glaireuse, dont Tépaisseur va en augmenlanl et dont les bords se redressent sur les parois de l'appan'il à une hauteur de plusieurs millimètres. La formation de cette membrane s'explique par la tendance qu'a le microbe à se groupei' sous l'influence de l'air, sans d'ailleurs changer
1. C'est au contrnirc sur la lamolln couvre-objet qu'il faut étaler le liquide de cil* turp, si ron emploie le baumo de Canada.
de forme et sans perdre la faculté do so mouvoir, lorsqu'il se retrouve libre, dans un Hijuide oxygéné. Nous avons eu la preuve de celle lenilance dans Tobservation niicroscopicpK,'.
Si l'on fait renscinencoment dans un milieu tout à fait privé d'air, le microbe donne avec le bouillon une très léjjére opalescence et hisse au liquide artificiel toute sa limpidité primitive.
38. Le B. ilenitrificfins se présente donc connue Tun des êtres /es plus avides d'oxygène ; et, non seulement il prend ce gaz à l'air fibre, mais il peut aussi remprunter à un milieu nilralé, de telle sorte qu'il es!, suivant le cas, et avec la même facililé, aérobie ou anaérobie. Aussi, quand on le sème dans des cultures riches en iûtrates, se répand-il uniformément dans toute la masse;, quelle que soit la forme du vase et l'épaisseur du liquide ; celui-ci se trouble rapidement, se recouvre d'une mousse épaisse et devient le siège d'une fermentation énergique. Lorsque le g;iz a cçssé de se dégager, le liquide, qui «'st devenu visqueux rt filant, s'éolaircit peu à peu, el le microbe se ramasse au fond du vase en coucbe glaii'euse ; quelijuefois, après la fermentation, si le contact de f air devient possible, il se fait à la surface une membrane zoogléicpie, analogue à celle que donnent les milieux non nri ratés.
La viscosité ne se produit pas pendant que la fermentation est en pleine activité ; elle n'apparaît qu'à la fin, alors (pie le liquide peut êlrc assimilé à un milieu ex<'mpt de nil rates. Or, de tels milieux sont précisément, comme on Ta vu, très favorables à la production de matières glaireuses.
29. Circomtancesi qui inlluent sur ht dénitri/icatioa. — La (pianlilé de nitmte décomposé dans un temps donné dépend évidemment de l'activité du ferment cl, par conséijuent, pounin même microbe, de la niiture du milieu, de la tem|)érature, de l'Age de la semence, etc., toutes circonstances qui inlluent sur sa vitalité.
30. 1* Influeme de la nature du microbe. — Conii)arons d'abord nos deux li. denilrificans.
Le 9 janvier, à -4 heures du soir, on ensemence deux tubes à culture profonde (fig. I), contenant le même bouillorj nitrate, l'un a avec le //. denitri/kans % et l'autre h avec le J8. denilrilicans p.
Le lendemain 10, a 8 heures du matin, a est lioubl' avec une
mousse fine ; b est plus trouble, mais sans mousse ; à 4 heures du soir, la mousse apparaît dans b; elle a une épaisseur de 1 centimètre environ dans a.
Le 1 1, à 4 heures du soir, mousse très abondante dans b; mousse tombante et fermentation achevée dans a.
La marche de la dénitiification a été :
Le 10. Le 11.
Avec le B. denifrificans a o2 p. 100 100 p. 100
— — ji 50 — 77 —
Les deux microbes donnent des nitrites pendant la fermentation.
Ainsi, avec le bouillon de bœuf, il y a une différence dans le trouble du liquide, dans Tapparilion de la mousse et dans Tintensitéde la réduction. Le microbe a s'est toujours montré plus actif que le microbe p. Quant aux- produits de la réaction, on verra plus loin qu'ils ne diffèrent pas sensiblement.
Avec le liquide artificiel, dont on trouvera la composition à la page 255, les différences s'accentuent.
Le 10 janvier, à 4 heures du soir, deux tubes contenant du liquide artificiel sont ensemencés, a avec le B. denitrificinis a et t avec le B, denUrificans p.
Le lendemain, à 11 heures du matin, a est très trouble, avec une mousse de plusieurs centimètres d'épaisseur; b est trouble, mais sans mousse.
Le 12, la mousse est abondante dans b, tombante en a, où la fermentation est achevée.
La dénitiificalion a été :
Le 11. Le 18.
Avec le li. dcnitrificans a 77 p. 100 100 p. 100
— — ji 50 — 77 —
Ces deux ferments ne diffèrent pas seulement par leur activité; le premier, qui donnait des nitrites avec le bouillon de viande, n'en fait pris dans b* liquide artifittiel ; le second, au contraire, en donne dans les deux ras. De plus, a dégage du protoxyde d'azote quand p lie drgi^ge que de l'azote (voir p. 270 et suiv.).
En i*aison de sa grande puissance réduclrice, le //. denitri/icans a a été choisi pour les expériences ultérieures, sauf indication coutiiiire.
;îl . â** Inflvence de la iempêraiurc, — Le 10 septembre, on distriluie dans des vases de culture du bouillon additionné de nitrate de potasse ; après ensemencement, on met :
a, à la températarc de 2ô**
Le 11, tous les liquides sont troubles et donnent de la mousse.
Le 13, la fermentation est achevée dans c et d; elle continue dans a et b. Le dosage du salpêtre restant permet de calculer par diflërence la mesure de la dénitrification; on trouve:
Danso 77 p. 100
— rf 100 —
Une température voisine de 35** est donc très favorable à la réduction du nitrate; c'est celle que nous avons {^généralement adoptée. Nous verrons, à la fin du chapitre suivant, que la température influe sur la composition du gaz dégagé et qu'elle favorise la formai ion du proloxyde d'azote dans le h([uide arlilieiel.
32. 3" Influence du ckau/faye de la semence. — Le 27 octobre, on remplit une série de petites ampoules effilées aux deux bouts avec un Uquide en fermentation, on les scelle à la lampe et on les plonge dans un bain-marie, dont on élève {)rogressivement la lempéralure. Ces ampoules, chauffées à des degrés divers, servent ensuite, après refroidissement, à ensemencer des tubes de bouillon nitrate.
Un tube a reçoit la semence chaufTée à W
— b — — GO
Le 28, a est trouble cl donne de la mousse ; b est opalin, sans mousse; c et (/ sont limpides.
Le 2!), h se trouhle et mousse à son tour.
Le 4 novembre, c et d sont restés limpides.
:Î3. Le même jour, expérience toute semblable, mais en resserrant les tempi ratures entre 50 et 100 degrés.
iD tube a reçoit la semence chauffée k 50^
Le 28, a Qib sont troubles, les autres tubes sont limpides.
Le 21), dénitriiîcation très avancée dans a ; fermentation et mousse dans b; ni trouble, ni mousse dans les autres tubes.
Le A novembre, c, (/, e et /"sont restés limpides.
Le microbe dénitrifiant est donc tué à la température de 70 degrés, mais il souffre déjà de Taclion d'une température de 60 et même de 50 degrés.
3-4. 4** In/luence de Cnir. -*- La décomposition des nitrates doit diminuer au contact de Tair, parce que, dans ces conditions, le microbe est largement pourvu de Toxygène dont il a besoin pour son développement, et «pfil lui est plus facile de le prendre là qu'à une combinaison cbiinique. Les expériences suivantes justifient celte hypothèse.
L — Le 0 août, un flacon de 300 centimètres cubes est rempli jusqu'au goulot d'rau d'égout nitratée ; un volume égal de Ii(]uide est v(;rsédans un flacon de GOO centimètres cubes de capacité. Même semence dans les deux liquides.
Après un séjour de 24 heures à Tétuve, le premier a perdu 42 p. 100 et le second H p. 100 seulement du nitrate employé.
IL — Le 12 février, on met un même volume de bouillon de bœuf additionné de sal|)étre dans une fiole de culture à fond plat A (fig. 6), où il occupe une éj)aisseur de 2 à 3 millimètres seulement, et dans un tube de culture A', sous une épaisseur de 12 centimètres environ.
Los deux vases re(;oivcnt clianim iinî^ goutte do I.i iiioiiie scmenro. Le 14, la réduction a été :
Dans a de I i p. 100
— a' de 47 —
Mulgré la faible épaisseur du bouillon dans la fiole A, on voit qu'il vu eu, néanmoins, une dénilriiicalion partielle. Les rlioscs se passent
-î II
! 'il'^
Fi^. 6.
sans doute comme dans l'action de la levure de bière sur du moùl en grande surface. On ne peut, dans les deux cas, supprimer complètement la fermentation, parce que Taéralioude tous les poinisdu li-
quille esl impossible. Les organismes tout voisins de la couche superficielle, protègent en eflel les autres contre le contact de Taîr, et ceux-ci fonctionnent aloi's comme dans une culture en profondeur.
35. Plus le milieu sera nutritif, plus les orji^anismes se développeront et plus il sera difficile d'avoir une réduction nulle dans un lifpiide en couche mince. Mais si le milieu est pauvre en ahrnents, comme l'eau d*é{jout, les microbes seront peu abondants, l'air pourra se dissoudre dans toute la masse et le nitrate ne sera pas décomposé. L'expérience suivante réalise ces conditions.
IH. — Le 6 août, on fait trois parts égales d'eau d'égout nitratée, qu'on distribue dans trois vases de capacités différentes:
a Flacon complètement rempli.
b Flacon il moitié rempli.
c Fiole ù camphre où le liquide occupe 2""° environ
d'épaisseur.
Même semence dans les trois appareils.
Le i6, la jiroporLion de nitrate réduit a été :
Dans a de 33 p. 100
— b de U —
— c de 0 —
U résulte de là (pie, pour obtenir des fermentations rapides, il faudra faire usage de vases profonds et complètement remplis do hipiide.
:iG. 5" Itifluence de Fôgc de la semence. — Si Ton prend jiour semence, dans des cultures nouvelles, le IL dcniiri/icans aux différentes périodes de son développement, on constate que ce microbe s'adaiblit projjj^ressivement jusqu'à la perle complète de son activité, juscprà la mort.
Le 17 novembre, apiès avoir é|)rouvé à l'éluve un certain nomlire de tubes de culture, conlenaiit du bouillon additionné de 1U j^rainmes de nitrate de potasse par litn», on ensemence l'un d'eux avec un iniciolx; très j«'une. Le lendemain, les jours suivants, puis à des intervalles plus éloijiués, on ens(Mnence successiveuienl les autres tubes, avec des prisr's faites «lans celui-là. La proportion de nitrate réduit a été mesurée pour cluujue tube après 2i et après 48 heures.
■UMBBO
d'ordre Je la enltare.
DATB
de reiueiiipiioement.
AOE
de la «emence.
17 nov.
jour
2 déc.
Le tableau suivant résume cette expérience :
PBOPORTioars dk vituatb RAnurf après 21 heure*, après 48 hnareH.
es p. 100 84 p. 100
Malgré quelques irrégularités qui pourraient s'expliquer par les différences de volumes de semence employée?, on voit que le sens du pliénomùne est très net et que la vitalité du ferment diminue assez rapidement lorsqu'il est laissé en contact avec son liquide. C'est un fait fréquent chez les infmiment petits.
37- La nature du liquide de culture influe, d'ailleurs, sur la vitesse d'affaiblissement du microbe.
 la fin de juin 1883, on sème du ferment pur dans les liquides suivants :
«. — Liquide artiOciel de la page 255 contenant 1 p. 100 de nitrate de potasse.
à. — Bouillon de bœuf contenant 1 p. 100 de nitrate de potasse.
c — Bouillon de bœor contenant 1 p. 100 de nitrate de potasse ot5 p. 100 de sucre.
tf. — Bouillon de bœuf contenant 1 p. 100 de nitrate de potasse et 2 p. 100 d'amidon.
€. — Kau de levure, sans nitrate.
/. — Bouillon de bœuf, sans nitrate, contenant 2 p. 100 d'amidon.
Ces cultures sont abandonnées à la température ordinaire jusqu'en janvier 1884. A cette date, les liijuides sont opalins ; au fond des tubes, on trouve un dépôt grisâtre, constitué par un amas de iiiicrolies, de cristaux de phuspbate ammoniaco-magnésien et de ;^ranubi(ioiis amorplies.
Le C janvier, avec des prises faites dans ces divers liquides, les unes â la surface, les autres dans le dépôt, on ensemence largement du bouillon <le bœuf neutre, contenant i p. 100 de salpêtre.
Le 7, les cultures issues de c, d, e et /"donnent une mousse abunçfante, tandis que celles issues de a et de b ne sont même pas troubles.
Le 8, le tube ensemencé avec le dépôt de b est devenu trouble à son tour, et mousse légèrement ; celui qui a reçu une goutte de la surface est limpide.
Le 9, mêmes tubes qu'hier en fermentation ; dans plusieurs, la dénitrification est achevée.
Le 10 et jours suivants, les tubes déjà stériles n'ont donné ni trouble, ni réduction, ni microbes.
La semence provenant du liquide artificiel a était donc morte ; celle provenant du bouillon de bœuf nitrate b ne s'est rajeunie qu'avec peine; à la surface même, elle était morte. Quant aux autres semences, celles qui avaient été prises dans les bouillons nitrates c et d, additionnés de sucre ou d'amidon, elles se sont rajeunies moins vite que celles qui avaient été extraites des Hquides non nitrates e et f; en effet, le 9, la réduction était complète dans ces dernières cultures, tandis qu'elle n'était (pie de 56 p. 100 dans les tubes ensemencés avec c et de 68 p. 100 dans les tubes ensemencés avec d.
L'ordre dans lequel nous avons placé les hquides de culture est précisément celui (pii indiciue leur valeur nutritive relative pour le B. denitri/icans. Celui-ci, comme beaucoup d'autres organismes, s'épuise donc, dans un milieu, d'autant plus vite qu'il s'y est montré plus actif.
38. L'eau de levure non nitratée est, de tous les liquides que nous avons essayés, celui «jui conserve le [>lus longtemps la semence de notre microbe. Grâce à cette propriété, nous avons pu le retrouver vivant au mois de décembre 1884, c'est-à-dire un an et demi après son ensemencement. Ce fut une résurrection des plus heureuses, car, à la suite d'une élévation accidentelle de la température dans notre étuve, le ferment qui servait à nos expériences fut tué, et nous l'eussions perdu sans retour, si le tube d'eau de levure conservé dnnsr notre colleclion ne nous avait permis de le rajeunir. Aujourd'hui encore, 25 août 1885, on retrouve des spores vivantes dans le tube ensemencé à la fin de juin 1883 et dans le tube ensemencé en janvier 1884.
39. 6" Influence de la proportion de nitrate. — I. I.e 21 juillet, oa ensemence des flacons exactement remplis d'eau d'égout, contenant des doses croissantes de nitrate de potasse :
a 0*',25 par litre.
Les liquides se sont tous troublés et la réduction a suivi la marche suivante :
An 83 Juillet. An 85 Juillet. Au 98 Juillet. Aul<^raoût. Au 7 août.
Daos a. , . 58 p. 100 92 p. 100 100 p. 100 » »
On déduit de là :
DURÂR NITRATIB
^ , . . , décomposé par Jour
de U réduction, e„ mo> enne.
Dins a 7 Jours. 0*^036 par litre.
II. — Avec un liquide plus nutritif que Teau d'égout, du bouillon de viande, par exemple, la destmction du nitrate est l)eaucoup plus rapide.
Le 5 septembre, on ensemence du bouillon renfermant :
a 1 gramme de nitrate de potasse par litre.
La marche de la dénitrification a été de jour en jour :
6 sept. 7 sept. 8 sept. 9 sept.
Dans a 86 p. 100 100 p. 100 • »
On a «loin* obtenu :
DirBKB HITRATB
inazi 111 iim dêtmi t par j our
de la rêduciion. en moyenne.
Dans a 2 jours. 0»^ô par litre.
III. — La dénitrification peut se produire aussi avec des doses plus élevées de sel.
Le 8 septembre, on dispose un autre essai dans du bouillon tenant en dissolution :
a 4 grammes de nitrate de potasse par litre.
La semence est prise dans un flacon en pleine fermentation. Les dosages successils ont donné pour la dénitriûcation :
9 Bopt. 11 sept. 13 icpt 15 sept. SS sept.
Dansa. . 2ô p. 100 75 p. 100 100 p. 100 » •
— b. , 26 — 68 — 81 — Syp. 400 •
Si Ton calcule les doses de nitrate détruit au 13 septembre, c'està-dire 5 jours après rensemencement, on obtient :
M OY K2H NK
TOTAL. parjuur.
Dans a 4R',00 06^80 par litre.
— rf 4 ,32 0 ,86 —
40. L'activité du microbe dépend donc de la richesse du milieu et de la |)roportion de nitrate di^sous. Dans les bouillons de viande, elle paraîi maximum pour les doses de salpêtre voisines de! p. 100;
mais la bactérie peut vivre et agir avec 2 p. 100 do sel. Dans ce dernier cas, la fermentation se ralentit au bout de peu de jours et ne se termine pas, soit paire que le liquide est devenu fortement alcalin et gêne le développement du feiinent, soit parce que la matière organirpie n'y est plus en quantité suffisante (voir page 273).
La proportion que nous adoptons généralement est celle de iO grammes par litre.
La cpiantilé de sel décomposé par litre et par jour a dépassé 1 gramme dans Texpérience précédente. Dans cerlains cas, nous avons eu 3 grammes dans du bouillon de poulet, 6 grammes et même 9 {,'rammes dans du liquide artificiel.
il. 7* Influence de la hase du nitrate. — Les azotates alcalins et razolalc (le chaux sont tous décomposables par le /?. dcnitrlficans.
I. — Le 6 août, on ensemence de Teau d'égout renfermant des poids égaux, 1*^'',67 par litre, de res divers sels; la fermentation s'est régulièrement établie, donnant la mousse et le trouble habitais.
La dénitrification a été :
8 août. 9 août.
Avec le nitrate de potasse de42 p. 100 47 p. 100
— de soude 24 — 40 —
— ■ d'ammoniaque 25 — 40 —
— de chaux 37 — 58 —
II. — A doses plus élevées, le sel de chaux empêche la vie du microbe et ne se décompose pas, même dans un milieu plus riche en matières nutritives.
Le 10 juillet, on ensemence des tubes de bouillon de bœuf contenant des poids équivalents (le dixième de l'équivalent par litre; de nitrates alcalins et de nitrate de chaux. On a obtenu les réductions suivantes :
11 Juillet. 12 Juillet.
Avec le nitrate de potasse 21 p. 100 51 p. 100
— de soude 20 — 27 —
— d'ammoniaque 22 — 38 —
— de chaux 0 — 0 —-
Le sel do potasse s'est montré plus favorable que les autres ; mais dans d'autres expériences, où le bouillon avait une autre coinpo-
254 ANNALES DE LA SCIENCE AGRONOMICfUE.
sition, où la semence n'avait pas été prise au même âge, rordrca été un peu différent ; c'est ce qui est arrivé dans l'exemple suivant.
III. — Le 12 février, on ensemence des tubes de bouillon de bœuf contenant respectivement des poids de sel équivalents à 10 grammes de nitrate de potasse.
La réduction a été :
IS février. 14 février. 15 février.
Avec le nitrate de potasse. . . dc3S p. 100 65 p. 100 79 p. 100
— de soude ... 47 — 80 — 96 —
— d'ammoniaque . 32 — 68 — 73 —
On peut, dès lors, admettre que les trois nitrates alcalins se réduisent, suivant les cas, avec la même facilité.
42. 8* Influence de lu conslilulion des liquides de culture. — Les expériences que nous avons rapportées ont déjà montré que le B. denilrifwans vit mieux et détruil plus de nitrate, toutes clio^es égales d'ailleurs, dans les bouillons de viande que dans l'eau d'égout. La nécessité d'un milieu riclie en matières nutritives ne s'explique pas seulement par les besoins du microbe ; nous verrons, dans le chapitre suivant, que la réduction du sel ne peut s'accomplir que si Toxygène nitrique trouve à brûler du carbone organirpie.
Mais (juelles sont les matières organiques qui peuvent convenir? En faire une liste complète serait impossible et inutile. Nous dirons seulement que, parmi celles que nous avons essayées, indépendamment du bouillon de poule, de veau ou de bœuf, l'huile d'olives, l'huile d'amandes douces, la glycérine, le sucre, le glucose, l'amidon, les alcools de la série grasse, le glyrol, le glycocollc, Taspai-agine, Taniline, les acides tartrique, citrique, benzoïque, salicylique, phénique en milieux neutres, sont plus ou moins propres à la culture du microbe dénitrifiant ; que le chloroforme et les oxalates empêchent son développement.
Il est remarquable que l'acide phénique, Tacide salicylique, l'aniline, qui sont d'excellents antisepticpies pour certains mî<Tobes, n'empêchent pas le développement du li, denilrificans, même à des doses supérieures aux doses habituelles. M. Mûntz a bien voulu nous citer des faits k\\x\ concordent avec nos observations, du moins pour
Facule phonique; il a vu ccriains organisriKîs le détruire à dose de plnsieui-s jrrammes par litre.
Dïin> les rullures où Ton ajoute de l'aniline, on perçoit nettement Todrnr de nitrobenzine. Cette réaction intéressante, Finverse de c»:lle que Ton produit d'ordinaire dans 1rs laboratoires ou dans Tindu^lrio, s'expliipie par la mise en liberté, à Tétat naissant, de Toxygène nitrique*, puisqu'on a :
C* ir Az -+- 30* = C* ir (Az 0*) + H» 0*.
43. On peut remplarer les liquides complexes, comme le bouillon de viande , par des liquides artificiels de compusition connue. La con>tilntiun d'un pareil milieu exige de longs tâtonnements, dans le détail desquels il nous paraît inutile d'entrer.
En nous inspirant dcb travaux d(» même ordre dus à M. Pasteur et à M. Raulin, nous sommes arrivés, par degrés, à conqjoscT le liquide suivant, «pii nous donne des tcrmentations au moins aussi rapides que les bouillons les plus riclies.
>■ lirait de potasse 10«%0()
Acide citrique 7 ,00
Asparagine 5 ,00
Phosphate de potasse 5 ,00
Suliate de aiugnêsic ù ,00
Chlorure de calcium cristallisé 0 ,50
Suirtte de protoxyde de for 0 ,05
Sulfate d'alumine 0 .02
SUicate de soude 0 ,02
Eau 1000 ,00
Ammoniaque q. s. pour neutraliser.
Toutes ces substances, exactement pesées, sont mises dans un ballon avec de Teau distillée; on fait dissoudre à cliaud, puis quand la sululioD est refroidie, on la sature avec Tammoniaque et on coin-
1. On doit sans duute expliquer par ractinn de microbes dénitrifiaiits et non par des microzymas, comme ra proposé M. J. B(.>champ. le fait observé par .M. Méhay, d'oiydaiion à froid de racide acétique dans les liquides neutres ou faiblcuient alcalins eo présence des azotates et des phosphates alcalins. [Journal t/c pharmacie et de ehimue, 4* série, t. XXUl, p. 184 : et t. XXIV, p. 288. 187G.)
plùtc le volume à un litre. On distribue ensuite le liquide dans d flules, pour la stérilisation.
4-4. Nous verrons, plus loin, l'influence de l'asparajfine sur la nature des gaz dégagés. Pour le moment, il suffit de dire que le liquide artificiel ainsi constitué est comparable, comme milieu nutritif, au meilleur bouillon de viande contenant la même dose de salpêtre.
Dans le bouillon, le B. deniirilicans donne rapidement du trouble et commence à dégager des bulles de gaz 15 à 18 heures après rensemencenient. Dans le liquide artificiel, le trouble et les bulles gazeuses apparaissent un peu |)Ius tard ; mais, quand la fermentation est bien établie, Tintensité du trouble devient supérieure à celle du bouillon ; elle est si considérable que la liciueur est opaque sous une faible épaisseur. En même temps, le microbe se multiplie avec une abondance telle (|u'il est rare de voir, au microscope, plus d'organismes réunis que dans une goutte de ce liquide artificiel.
L'activité de la réduction est, d'ailleurs, à peu près la même dans les deux milieux. En effet, dans un essai comparatif, la proportion de nitrate détruit en vingt-quatre heures a été de 50 p. 100 dans le bouillon et de 48 p. 100 dans le liquide artificiel.
