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C'est également dans la teinture à chaud que l’on trouve le plus fort retour par l'émulsine (sans tenir compte de la teinture officinale qui a été préparée avec une racine de Gentiane de provenance inconnue).
Au cours del'hydrolyse par l’émulsine, on a constaté unfait assez curieux et qui mérite d’être signalé.
Si on calcule, pour la teinture à chaud et pour la teinture à froid, l'indice de réduction enzymolytique, on trouve 530 et 669 : les deux indices sont donc très différents.
Cette différence vient de ce que, dans la teinture à froid, on a observé, vers la fin de l'hydrolyse, une augmentation de sucre réducteur sans que la déviation ait changé, et il peut même arriver que cette augmentation de sucre réducteur soit corrélative d'un recul de la déviation vers la gauche de quelques minutes.
On a d’ailleurs retrouvé le même fait, mais bien plus net, au cours de l’hydrolyse de la teinture officinale. Les chiffres qui figurent au tableau ont été obtenus après avoir fait agir l’émulsine pendant 25 jours; en laissant l'action se continuer pendant encore 25 jours, on a observé que la déviation du liquide était devenue gauche {elle avait passé de + 38’ à — 9”) et que la quantité de sucre réducteur avait passé de 4 gr. 920 à 4 gr. 998 : soit un recul de la déviation vers la gauche de 47° et formation de 0 gr. 078 de sucre réducteur.
Un recul de la déviation vers la gauche sous l'influence de l’'émulsine n’a été constaté jusqu'ici qu'au cours de l’hydrolyse du mélibiose, du manninotriose et du sucre provenant de l’hydrolyse partielle du verbascose par l’invertine.
Je n'ai encore pas pu trouver d'explication satisfaisantepour le cas qui nous occupe.
Si la composition des teintures ne diffère que légèrement au point de vue des sucres, il n’en est pas de même pour les
principes glucosidiqués, comme on le verra dans le tableau suivant :
AOC 22
Tableau IV.
TEINTURE | TEINTURE | TEINTURE à chaud à froid officinale GREAT PRE À ER CRE
Déviation initiale creer terre — 4% 7 — 43 —117 Déviation après émulsine.......... + 17 + 5’ — T Sucre réducteur inilial............. Osr176 0274 Our 342 Sucre réducteur après émulsine....| 0,702 0, 544 0 , 588 Retourpariémulsine "rire 4°24 48 ATOS Sucre réducteur par émulsine...... Ovr526 Our 270 Ocr246 EMA AR RENE EME AA 119 337 211 Gentiopicrmen her Enr ire 19r 039 re) ?
Comparons d'abord les résultats que nous donnent les analyses des teintures à chaud et à froid.
On est immédiatement frappé par la grande différence qui existe entre les déviations initiales des deux teintures : — 4°7° pour la teinture à chaud et — 43° pour la teinture à froid. Cette différence est due surtout à la disparition de la gentiopicrine dans la seconde, En effet, sous l'action de l'émulsine, on constate un retour de 264’ dans la teinture à chaud et seulement de 48’ dans la teinture à froid. De plus, l'indice de réduction (337) de cette dernière indique que le glucoside qui y existe encore n'est pas de la gentiopicrine, tandis que l'indice de la teinture à chaud (119) montre que l'on a toujours à faire à ce glucoside dont elle renfermerait 1 gr. 039 pour 100 cm*.
On sait que, dans l'hydrolyse de la gentiopicrine par l’émulsine, la gentiogénine, insoluble dans l’eau, se dépose, à l'état cristallisé, sur les parois des vases, ainsi que l'ont montré MM. BourqueLor et Hérissey (1). [l est donc très facile d’obtenir la gentiogénine.
On peut employer la réaction caractéristique de ce corps, signalée par M. G. Tanrer, comme moyen de contrôler la pré-
(1) Comptes rendus de la Société de Pharmacie. Séance du 1 février 1899. (Journ. de Pharm. et de Chim. (6) IX, p. 220, 1899).
Apr sence de la gentiopicrine dans les liquides qui servent à l'analyse. La réaction de Tanrer sé fait de la façon suivante :
« A un peu de gentiogénine, on ajoute [II à 1V gouttes d'acide sulfurique pur ; après quelques instants, l'acide se colore en brun. Si, alors, on ajoute de l’eau, goutte à goutte, on voit se développer une coloration bleue ».
Pour opérer ainsi, il faut avoir de la gentiogénine à l’état sec. J'aimodifié légèrement le mode opératoire de façon à pouvoir obtenir la coloration bleue en opérant directement sur le produit humide,tel que l’on vient de le recueillir dans l’essai à l'émulsine.
La gentiogéninerecueillie sur un filtre et lavée à l’eau est'traitée par 3 à 4 cm* d'alcool à 95°.On reçoit l'alcool dans un tube à essai et on y fait tomber un égal volume d'acide sulfurique pur en ayant soin de ne pas mélanger les deux liquides. A la limite de séparation, il se développe une belle coloration bleue ; on mélange en agitant doucement, et tout le liquide se colore en bleu.
En traitant de la sorte le produit qui s'était précipité pendant l’action de l'émulsine dans la teinture à chaud, on a obtenu une réaction aussi nette qu'avec la gentiogénine pure. Avec le produit provenant de la teinture à froid, on n’a obtenu qu'une coloration bleue très faible. La gentiopicrine a donc en grande partie disparu dans la teinture à froid.
La différence dans la composition des deux teintures est donc très nette : dans la teinture à chaud, rendue stable, pour employer l'expression de Lesueur (1), la gentiopicrine existe dans la proportion de 1 gr. 039 pour 100 cm*, ce qui correspond à la teneur de la racine employée, tandis que, dans la teinture à froid, pendant la préparation de laquelle les ferments n'ont pas été tués, la gentiopicrine n'existe pour ainsi dire plus.
Si on compare maintenant l'analyse de la teinture à froid et celle de la teinture officinale, on voit que les résultats sont à peu près identiques. Sous l'influence de l’émulsine, on constate dans la teinture à froid un retour à droite plus faible et la formation de plus de sucre réducteur que dans la teinture officinale. Les indices sont par suite très différents, 337 et 211.
(1) M. Lesugur. — Influence du mode de préparation sur la composition et la stabilité des alcoolatures et des teintures. Stérilisation par l'alcool (Journ. de Pharm. et de Chim. (6) XXX, p. 49, 1909).
On peut dire toutefois qu'il y a un rapport très étroit entre la composition d’une teinture de Gentiane préparée par macération avec une racine non fermentée et celle d'une teinture de Gentiane préparée de façon identique avec le produit officinal, c'est-à-dire avec une racine que l'on a fait fermenter au cours de la dessiccation.
MM. BourqueLor et HÉrissey ayant montré que la poudre de Gentiane renferme de l’émulsine (1), on a pensé que cette disparition devait provenir de l’hydrolyse du glucoside par ce ferment pendant la préparation de la teinture. En ce qui concerne l’action de l’émulsine sur les glucosides, en milieu alcoolique, je n'ai trouvé signalée qu'une observation de Boucarez qui empêcha l’hydrolyse de l’amygdaline en ajoutant 1 à 2 cm* d'alcool à un mélange obtenu en délayant 1 gr. de tourteau d'amandes dans 30 gr. d’eau (2).
En admettant que cette observation de BoucareL soit exacte, il fallait néanmoins s’assurer de l’activité de l’émulsine sur ia gentiopicrine dans un liquide renfermant 60 p. 100 d’alcool (alcool à 60°). Dans ce but, on a fait l'expérience suivante :
On a dissous 1 gr. de gentiopicrine dans 100 cm* d'alcool à 60° et on a ajouté dans le liquide 0 gr. 20 d'émulsine en poudre. On a abandonné le mélange à la température du laboratoire, en ayant soin d’agiter de temps en temps. Le liquide, d'abord incolore, a jauni peu à peu.
L'examen polarimétrique rend compte de l'action du ferment.
DéVATIONANILIAIE AA PEER NEA — 6
ADS AMOUTS Eee ee ee — 3°20?
— GHOUTS AMAR ETES ER — 2°26 = MAO IOUrTS meer ere — 10467 AIO TOURS Ba PIOHO OS — 1°22’ = 2O0MNOUTS 2er. Tania ce cle — 58’ = 'ÉANOUTS nt Rte cet — 38’ AU TOUTS..ecencrenre Does — 30 US JOULS eee CSA EE — 30°
(1) Em. BourQUELOT et H. HÉRISSEY. — Les sucres de la poudre et de l'extrait de Gentiane ; préparation du gentiobiose en partant de ces médicaments (Journ. de Pharm. et de Chim., (6) XVI, p. 513, 1902).
(2) BouGaREL.— De l’amygdaline. T'hèse inaugurale, Paris, 1877, p. 50.
Cette expérience établit bien que l’émulsine exerce son action hydrolysante sur la gentiopicrine dans l'alcool à 60c.
L'hydrolyse est seulement ralentie et l'alcool n'a arrêté l’action du ferment qu'après un contact de AO jours. À ce moment, il y avait 77,2 pour pour 100 de gentiopicrine hydrolysée.
La teinture à froid renfermant moins d’hydrates de carbone hydrolysables par l'invertine que la teinture à chaud, et la poudre de Gentiane renfermant de l'invertine, on a fait agir l’'invertine sur le sucre de canne en solution dans l'alcool à 60c.
L'invertine, elle aussi, agit en milieu alcoolique. L’essai a porté sur une solution de 1 gr. de saccharose dans 100 cm d’alcoo!l à 60°; on a ajouté à cette solution 0 gr. 20 de levüre de bière tuée par l'alcool, et on a abandonné le mélange à la température du laboratoire, en ayant soin d’agiter de temps en temps.
DéVIATIONMINIAle, 2 de ste o « + 10207 ADR MO TRS ET on een + 36 RD MOUSE Re name ess ee + 6 Er DNOUTEME NT re eve LÉO + 2?
OM OS Re eine. s — 10?
= PDO to so utbanrsontébdbp os — 10°
Cette hydrolyse est plus rapide que la précédente, puisqu’en 10 jours il y a déjà 75 °/, de sucre hydrolysé, tandis qu'il n’y avait dans le même temps que 49,2 °/, de gentiopicrine détruite. Elle est arrêtée aussi bien plus tôt, en moins de 15 jours, alors qu'il y a 86,5 ?/, de sucre hydrolysé.
Il ressort de ces deux expériences que ces deux ferments hydratants ne sont pas paralysés immédiatement par le contact avec l'alcool et qu'ils peuvent parfaitement exercer leur action en milieu alcoolique.
Les teintures alcooliques préparées selon le Codex doivent donc être, pendant leur préparation, le siège d'hydrolyses plus ou moins rapides, suivant l’activité des ferments que la matière première renferme.
La teinture de Gentiane préparée à froid. selon les indications du Codex, nous apporte la preuve de cette hydrolyse et nous montre quelle grande différence il peut parfois exister entre la composition de la matière première et la composition de la
DS
teinture préparée par macération. LEsugur avait déjà signalé des différences de même ordre, mais moins fortes.
En résumé, si on veut une teinture de Gentiane renfermant encore 1 (/, de gentiopicrine, il faudra la préparer à chaud, de façon à tuer sûrement'tous les ferments que la racine contient, sinon la gentiopicrine sera hydrolysée par l'émulsine pendant la préparation. |
Il est bon de faire remarquer que c’est la première fois que l’on signale une action hydrolysante de l'émulsine sur un glucoside en solution dans un alcool de titre aussi élevé.
C’est pour déterminer exactement de quelle façon s’opérait cette action que nous avons fait, M. BourqQuELoT et moi, toute une série d'expériences qui sont exposées dans le chapitre suivant.
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