RECHERCHES SUR LE FERMENT AMYLOLYTIQUE DU 6AN

2** Dans lu sang à intervalles de temps croissants après sa sortie des vaisseaux ; 3** Dans le sérum.

1** Sanff circulant, — 25 centimètres cubes de sang sont reçus de l'artère directement dans 4 volumes d'alcool à 95**. Le précipité qui contient Thémodiastase est recueilli sur le filtre, lavé à l'alcool jusqu'à ce que l'alcool de lavage ne contienne plus de sucre, desséché de diverses façons indiquées dans chaque expérience. Ce précipité est ensuite traité par 50 centimètres cubes d'eau distillée pendant vingt-quatre heures à la glacière. On filtre et on a ainsi une solution aqueuse du ferment toujours obtenue dans des conditions comparables.

2** Sanff après sa sortie des vaisseaux, — Pour empêcher le sang de se coaguler, nous l'avons additionné de 1 0/0 d'oxalate de soude, ce qui ne change rien à l'action de la diastase. On prélevait ensuite 25 centimètres cubes de sang à des intervalles de temps variant de vingt minutes à vingt-quatre heures après sa sortie des vaisseaux. Ces 25 centimètres cubes étaient traités par l'alcool et on obtenait une dissolution aqueuse du ferment par la méthode employée pour le sang circulant.

3** Sérum. — Le sang recueilli dans une éprouvette stérilisée * est mis à la glacière pendant vingt-quatre heures. On décante le sérum et on le traite par l'alcool. On obtient encore l'extrait aqueux d'hémodiastase par la méthode décrite précédeuunent. Comme pour le sang, la recherche du ferment est faite dans le sérum à des intervalles de temps variant de vingt-quatre à quarante-huit heures après sa sortie des vaisseaux.

Action de Thémodiastase sur V amidon. — Dans chaque expérience, on prend 10 centimètres cubes de l'extrait aqueux, on les mélange avec 50 centimètres cubes d'empois d'amidon qui ne réduit pas la liqueur de FehHng. On met le tout à l'étuve à 40* pendant un temps variable de quatre à quinze heures et on recherche la présence du sucre dans ce liquide au moyen de la liqueur de Fehling.

IV. — Preuve de r existence du ferment dans le sang circulant et dans le sérum,

Exp. I. — 1° 25 centimètres cubes de sang sont reçus de Tarière d'un chien dans 50 centimètres cubes d'alcool ; 25 centimètres cubes du même sang dans 100 centimètres cubes d'alcool.

* Tous les vases donl nous nous sommes servi dans nos expériences avaient été stérilisés à l'autoclave à 120* pendant une heure.

632 A. TCHEREVKOFF.

Les précipités alcooliques sont desséchés à l*air, puis pendant six jours dans le vide au-dessus de Tacide sulfurique.

î2® 500 centimètres cubes du même sang sont recueillis pour en extraire le sérum :

10*» du sérum sont précipités par 100** d'alcool K 10 — — 150 —

Les précipités alcooliques sont desséchés à Tair.

On mélange 10 centimètres cubes de l'extrait aqueux de chaque prise aveo 20 centimètres cubes d*empois d'amidon, on laisse quatre heui*e8 a l'étuve à 40*, puis dix-huit heures à la glacière.

On constate que tous les ballons contiennent du sucre en notable proportion.

Contre^preuve. — On prend de l'extrait aqueux du sang et du sérum, on le stérilise à Tautoclave à 120* pendant trois quarts d'heure et on mélange 10 centimètres cubes de cet extrait sténlisé à 20 centimètres cubes d'amidon. Après quatre heures de séjour à l'étuve, ce mélange ne contenait pas de sucre.

V. — Recherche du ferment dans le sang circulant^ dans le saiig retiré des vaisseaux et dans le plasma,

ExF. II. — 1* 25 centimètres cubes de sang de chien sont reçus à la sortie de l'artère dans 125 centimètres cubes d'alcool;

2* 120 centimètres cubes de sang sont additionnés à la sortie du vaisseau de Iff'jô d'oxalate de soude. On prélève de ce sang :

a 25'*, 20 minutes après la prise de sang. b 25<«, 40 — — —

Les 45 centimètres cubes qui restent sont mis à la glacière et vingtquatre heures après la prise du sang, ils fournissent :

d 10~ de plasma.

tf, by c, d sont précipités par 125 centimètres cubes d'alcool. On dessèche les précipités à l'air pendant vingt-quatre heures.

On fait aloi*s deux parts des précipités. La première moitié de chaque précipité est dissoute dans 50 centimètres cubes d'eau distillée. 10 centimètres cubes de cet extrait aqueux sont mélangés à 50 centimètres cubes d'empois d'amidon et placés à 40* pendant quatre heures. Au bout de ce temps on constate que chaque ballon contient du sucre.

* 100 centimètres cubes d'alcool sont suffisants pour précipiter tout le ferment de 35 centimètres cubes de sérum, car le flltrat additionné d'une nouvelle quan-> lité d*alcool ne donne pas do nouveau précipité.