CHAPITRE V

PREUVES EXPÉRIMENTALES QUE LE BACTÉRIOM CHAUVŒI EST L’AGENT EXCLUSIF DE LA VIRULENCE DU CHARBON SYMPTOMATIQUE. - RÉSIS- TANCE DE CE MICROBE AUX CAUSES DE DESTRUCTION.

Après avoir démontré l’inoculabilité du charbon symptomatique, il faut déterminer, parmi les produits organiques complexes qui servent aux inoculations, quel est l’agent infectieux.

Nos inoculations ont été généralement faites avec les sucs des muscles et des ganglions malades, la sérosité des œdèmes et le sang. Rappelons que les sucs et la sérosité renferment des globules sanguins et lymphatiques, des débris de fibres musculaires, des gouttelettes de graisse, et, de plus, des granulations fines et mobiles, brillantes ou sombres selon leur position sous l’objectif du microscope, et des bactéries mobiles, avec ou sans corpuscule à leur intérieur (Voyez la description au chapitre III, art. n) et sous forme de microcoques, tandis que le sang ne présente que des granulations analogues à celles des pulpes et, dans quelques cas, des bactéries très mobiles, sans corpuscule , les bactéries sporulées étant toujours fort rares.

En présence d’éléments organiques et de microbes étrangers, le choix de l’agent actif est aujourd’hui facile à faire.

ARTICLE PREMIER

PREUVES EXPÉRIMENTALES QUE LE BACTÉRIUM CHAUVŒ1 EST L’AGENT EXCLUSIVEMENT PRODUCTEUR DU CHARBON SYMPTOMATIQUE.

L’idée que les maladies infectieuses sont dues à des mi crobes spécifiques ne rencontre plus guère d’incrédules aujourd’hui. Notre tâche se trouve donc simplifiée pour le charbon symptomatique; nous allons néanmoins exposer les procédés qui nous ont servi à établir les preuves indiquées plus haut.

§ 1. La première objection à laquelle nous devions répondre est empruntée aux théories humorales, elle consiste à prétendre que l’agent qui occasionne et reproduit le charbon réside dans les parties dissoutes, qu’au lieu d’être un élément figuré, corpuscule ou bâtonnet, c’est une substance soluble, intimement mêlée aux liquides organiques, si ce ne sont ces liquides eux-mêmes devenus virulents par une modification spéciale de leur constitution, qu’enfin les particules figurées sont contingentes ou consécutives à l’apparition, du mal.

Pour réfuter cette objection, nous ne pouvions mieux faire que d’emprunter à M. Pasteur sa méthode de filtration sur le plâtre. En traitant de cette façon des liquides très infectieux, les inoculations faites avec la partie filtrée n’ont jamais communiqué la maladie, tandis que la portion restée sur le plâtre a déterminé des accidents mortels. Naturellement c’est au début de nos recherches que ces expériences ont été faites. Elles remontent au mois d’avril 1880.

Nous avons aussi emprunté à M. Chauveau le procédé basé sur la diffusion qu’il a mis en pratique dans ses premières études sur les virus et la virulence. Si l’on prend un liquide dilué provenant de pulpe virulente et qu’on l’abandonne soixante heures dans un tube d’essai fermé avec un tampon

Arl. Corn, et Th. — Charbon symptomatique. 9

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

de coton et placé dans un lieu à l’abri de toute secousse, l’examen microscopique de la partie supérieure du liquide n’y montrera pas de microbes et l’inoculation de celle-ci sera presque invariablement sans résultats, tandis que le même examen fait sur la partie inférieure du liquide y montre des bactéries en abondance et son inoculation est sûrement positive.

§ 2. Nous sommes également arrivés à fournir la même preuve d’une autre façon. Lorsqu’on produit d’emblée une tumeur charbonneuse par une inoculation massive dans le tissu conjonctif, les microbes se montrent assez tardivement dans le sang, quelques heures seulement avant la mort et sous forme de granulations. Tant que l’examen microscopique n’y montre aucun microbe, on peut l’inoculer impunément, les résultats seront constamment négatifs ; mais quand ils apparaissent, l’inoculation est presque toujours positive.

Enfin l’étude que nous avons faite plus haut des diverses humeurs provenant du cadavre d’un animal qui vient de succomber au charbon bactérien nous a offert une remarquable concordance entre la présence des microbes et la virulence. Nous avons vu, par exemple, que le rein fait l’office d’un filtre qui s’oppose au passage des microbes dans l’urine, l’examen microscopique nous a toujours montré celle-ci dépourvue de microphytes; or son inoculation a été constamment infructueuse.

§ 3. Il vient d’être dit qu’à côté des éléments organiques normaux, on trouve des microcoques et des bactéries mobiles, sporulées ou non. On pouvait se demander si les uns et les autres sont deux formes du même microbe. Les cultures sous le microscope, à l’aide de la chambre chaude de Ranvier, nous permettent de constater que, pourvues d’un ou de deux noyaux à leurs extrémités, quand on les place sous l’objectif, les bactéries ne tardent pas à se désagréger,

PATHOGÉNIE ET INOCULATIONS PRÉVENTIVES. d 3 1

à se dissoudre en quelque sorte en mettant en liberté leurs spores qui deviennent les corpuscules brillants. Au bout de quelques heures, ceux-ci remplissent tout le champ et remplacent les bactéries dont ils proviennent. Quant aux bactéries sans spores, elles se divisent en fragments très courts.

L’expérimentation nous a appris que les spores et les microcoques possèdent une activité égale, sinon supérieure aux bactéries et que leur inoculation reproduit la tumeur et la bactérie.

Si l’on recueille du sang à plusieurs reprises pendant l’évolution de la maladie, il est possible de saisir le moment où ils font leur apparition. En dirigeant l’expérience de cette manière, on constate que le sang n’est virulent qu’à partir du moment où il renferme des granulations, et sa virulence est alors aussi grande que celle des éléments figurés de la tumeur. La preuve en est fournie par l’expérience ci-dessous :

5 février 1881. — Un mouton est gravement malade d’une inoculation faite deux jours auparavant dans les muscles de la cuisse droite ; quatre heures avant sa mort, on plonge la canule d’une seringue dans l’une de ses jugulaires et on aspire quelques centimètres cubes de sang; sans perdre de temps, on pousse 1 centimètre cube de ce liquide dans la jugulaire d’une brebis mérinos préparée à cet effet. L’examen microscopique ne montre dans ce sang que des granulations mobiles.

Dans la soirée, la brebis est triste. Le lendemain matin, on observe quelques frissons ; la tristesse a augmenté ; pas d’engorgement autour du point d’inoculation.

Le même jour, à six heures du soir, on constate une boiterie causée par une tumeur charbonneuse qui se développe dans la profondeur de la cuisse droite.

Le 7, mort à neuf heures du matin, soit quarante-deux heures après l’inoculation.

La tumeur renferme des bactéries avec et sans spores.

L’introduction des granulations du sang dans les vaisseaux a donc déterminé des accidents aussi considérables que

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

l’inoculation intra-veineuse de très fortes doses des microbes de la tumeur et de l’œdème et a reproduit des microbes bactériformes. Par conséquent, l’agent virulent du charbon symptomatique consiste en un organisme inférieur qui se présente sous les formes de granulations et de bâtonnets mobiles dont le plus grand nombre est pourvu d’une spore près de l’une des extrémités.

§ 4. L’isolement par les cultures successives dans des milieux artificiels pouvait fournir la dernière preuve de la spécificité du microbe que nous avons accusé de produire le charbon bactérien.

Ce microbe n’est pas de ceux que l’on cultive aisément.

Plusieurs essais de culture dans le sérum sanguin, le bouillon de bœuf ou de veau pur ont donné des résultats nuis ou incomplets.

Nous avons semé dans ces milieux nutritifs du sang recueilli sur des sujets récemment morts du charbon bactérien ou de la sérosité musculaire puisée, avec les précautions usitées, au sein de tumeurs symptomatiques.

Les cultures furent d’abord laissées en communication avec l’air. Dans ce cas, leur activité, constatée par 1 inoculation, n’a jamais dépassé la première génération.

Nous remplaçâmes alors l’atmosphère du tube à culture par l’acide carbonique. Dans ces conditions, les cultures fécondées avec la sérosité des tumeurs présentèrent les signes d’une prolifération plus active que celles qui avaient été ensemencées avec le sang.

Généralement ces cultures ont conservé une virulence mortelle jusqu’à la troisième génération; puis, pendant deux autres générations, elles ont manifesté une virulence atténuée qui conférait l’immunité aux animaux soumis à leur essai , mais au delà leur virulence a paru éteinte.

Ces cultures renfermaient des essaims de bactéries très

courtes, des filaments poliarliculés et quelques bactéries isolées, mobiles, formées d’une granulation ovoïde, foncée, englobée dans une petite masse protoplasmique de même forme ou légèrement allongée, rappelant les plus fins microbes que l’on rencontre dans les muscles de la tumeui charbonneuse.

Il y avait indication à changer la composition des milieux. Des considérations de plusieurs ordres nous portèrent à croire que la bactérie du charbon symptomatique se plairait dans le bouillon de poulet additionné d’une petite quantité de glycérine et de sulfate de fer.

Douze générations successives furent obtenues en employant ce liquide nutritif et en faisant les cultures dans le vide, d’après la technique recommandée par M. Pasteur.

Cette série de culture fut extrêmement remarquable par Puniformité de ses résultats. Effectivement, tous les tubes ont présenté des microbes d’une seule et même forme.

Ces microbes étaient fins, mobiles et composés d une sorte de noyau sombre ou clair, selon la position de 1 objectif, foit semblable à la spore des bactéries de la tumeur musculaire, et d’une aréole protoplasmique, claire, effilée à l un de ses pôles, de manière à leur donner l’aspect d’un tout petit clou de girofle. L’aréole protoplasmique était fort difficile à voir, en raison de sa réfringence qui se rapprochait beaucoup de celle du milieu de culture. Il fut utile de l’étudier avec 1 objectif n° 10, de Hartnack.

De plus, toutes ces cultures ont tué les cobayes qui les ont reçues, en produisant les lésions que nous avons décrites longuement ailleurs. Mais, à côté du fait brut qui est fort utile à constater, l’inoculation a révélé certaines particularités intéressantes.

Ainsi l’activité pathogène a crû dans les cultures successives jusqu’à la dixième génération. Les cobayes qui reçu-

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

rent les sept premières sont morts vingt à vingt-deux heures après l’inoculation ; la huitième culture tuait ces animaux en dix-huit heures, la neuvième en douze heures, la dixième en sept heures.

Le dénouement a été si rapide après l’inoculation de celte dernière que nous nous sommes pris à douter de la pureté de la culture. Nous pouvions être en présence d’une septicémie foudroyante, d’autant plus que le point d’inoculation présentait un simple œdème séreux et des bactéries en clou de girofle ou de simples granulations mobiles. Mais une série d’inoculations de contrôle nous a bientôt rassurés. Avec les sucs extraits des muscles œdématiés, nous avons inoculé un chien, un lapin, un rat blanc, une poule, animaux qui jouissent de la réceptivité pour la septicémie foudroyante ou gangréneuse et en sont dépourvus pour le charbon bactérien; puis un cobaye et un mouton à qui l’on avait communiqué l’immunité contre cette dernière maladie par des inoculations antérieures, enfin deux cobayes indemnes. Or, les deux premières séries d’animaux sortirent intacts de l’épreuve, tandis que les deux cobayes indemnes furent emportés en offrant les symptômes et les lésions du charbon bactérien.

La onzième génération a donné lieu à une anomalie qui nous a fait penser un instant à l’épuisement du microbe. Le cobaye inoculé avec cette culture ne mourut qu’au neuvième jour qui suivit l’injection sous-cutanée. 11 s’agissait d’un cas de résistance exceptionnelle du cobaye, car la tumeur développée sur la victime renfermait le microbe caractéristique dans toute sa beauté. En outre, la douzième génération tuait le cobaye en trente heures.

Telle a été cette série de cultures dans le bouillon de poulet additionné de glycérine et de sulfate de fer.

Nous avons aussi cultivé le Bacterium Chauvœi dans le bouillon de bœuf acidulé par l’acide lactique. Dans ce mi-

lieu, il a conservé son activité jusqu’à la sixième génération.

Ces diverses cultures ont donc démontré que le virus du charbon symptomatique est un parasite végétal microscopique, que l’on fait reproduire artificiellement à l’abri de l’air atmosphérique sous la forme d’une courte bactérie qui finit par être nucléée à une extrémité, laquelle grossit dans le tissu conjonctif et passe par les phases de bactéries longues, vibroïdes , d’articles courts, mobiles, à extrémités angulaires ou arrondies, auquel cas ils ressemblent à des microbactéries.

Cette étude a encore montré qu’il existe des ressemblances frappantes, au point de vue morphologique, entre le microbe du charbon bactérien, le ferment butyrique et l’agent de la septicémie gangréneuse de l’homme.

ARTICLE II