RÉSISTANCE DU BACTERIUM CHAUVŒI AUX CAUSES DE DESTRUCTION

Puisqu’il est prouvé que les microbes, à l’état de mycélium et de spores, sont les agents exclusifs du charbon, puisqu’ils existent par milliards dans les tissus des malades, examinons ce qu’ils deviennent quand ils sont mis en liberté par la manipulation, le dépeçage ou la putréfaction des cadavres et qu’ils tombent sur des corps où ils se dessèchent rapidement, ou bien arrivent dans la terre et les eaux.

Pendant combien de temps conservent-ils leurs propriétés? Sous quel état? Peuvent-ils être détruits rapidement? Questions capitales pour l’hygiène et la pathologie dont on voit de suite les conséquences pratiques.

Nous allons suivre le virus hors du cadavre d’un sujet qui vient de succomber.

L’examen doit porter sur le virus frais récemment échappé

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

du cadavre et sur celui qui en est sorti depuis un temps variable. Dans ce dernier cas, deux circonstances peuvent se présenter: Le virus est tombé dans l’eau ou dans un milieu saturé d’humidité, ou bien il a été projeté sur un corps sec (pierre, bois, etc.) par une température élevée et il s’est desséché rapidement.

Sous l’un ou l’autre état, nous avons examiné la façon dont il se comporte vis-à-vis : a) du froid; b) de la chaleur sèche et de la chaleur humide; c) de l’eau et d’un milieu humide; d) de la putréfaction ; é) de diverses substances et agents chimiques.

Mais il convient de dire dès maintenant, et pour éviter des répétitions, que la résistance du virus desséché est beaucoup plus considérable que celle du virus frais et conséquemment, quand nous dirons que ce dernier résiste à l’un des agents qui viennent d’être énumérés, ce sera indiquer implicitement que le virus desséché en fait autant, tandis que l’inverse n’est pas vrai.

Action du froid. — Avant toute démonstration expérimentale, on pouvait soupçonner que le contage du charbon symptomatique est doué d’une résistance considérable aux causes de destruction, en considérant l’étendue de l’aire géographique où il sévit. Il ne ressemble en rien à celui de plusieurs affections épidémiques qui, cantonnées le plus souvent dans les contrées tropicales, ne s’acclimatent guère au delà d’unelatitude déterminée, maiss’atténuentets’éteignent, heureusement pour l’humanité. Effectivement, il exerce son action dans les deux mondes, comme nous l’avons dit antérieurement (Voyez chapitre II) et ainsi qu’en témoignent les correspondances et les pièces pathologiques qui nous ont été adressées. Nous l’avons vu sévir sur les bords des chotts algériens et nous l’avons retrouvé sur les alpages du Jura français et du Jura suisse, à 800 et même 1100 mètres

d’altitude, là où la neige recouvre le sol cinq mois chaque année, ainsi que sur les pâturages du plateau granitique et volcanique du centre, dans la chaîne des Puys et celle du Mont-Dore, à 1000 mètres d’altitude et dans des conditions hibernales semblables à celles du Jura et des Alpes.

Nous ne pouvions, toutefois, nous en tenir à ces seules données de l’observation et nous avons eu recours à l’expérimentation pour savoir exactement à quoi nous arrêter.

Nous allons d’abord transcrire une expérience faite par nous pendant le rigoureux hiver de 1880-81 , elle montrera comment se comporte le microbe vis-à-vis de la congélation.

45 janvier 1881. — Avec les muscles d’un mouton qui vient de succomber au charbon symptomatique, on prépare un liquide très virulent. Ce liquide est recueilli dans un verre placé lui- même dans une capsule pleine de glace pilée ; le tout est posé sur le rebord d une des fenêtres du laboratoire. Le liquide de pulpe ne tarde pas à se congeler et à se prendre en un bloc qu’on ne touche ni ne déplace pendant les journées et les nuits des 16 et 17 qui sont extrêmement rigoureuses. Dans la matinée du 18, on fait dégeler le morceau de glace; l’examen microscopique montre les microbes avec leur mobilité habituelle ; on inocule 5 gouttes du liquide obtenu à un cobaye qui meurt douze heures après l’inoculation, en présentant une tumeur charbonneuse.

Nous désirions pousser nos recherches plus loin et utiliser le froid intense que des découvertes physico-chimiques récentes ont permis de produire dans les laboratoires. Mais n’étant pas outillés nous-mêmes pour ce genre de recherches, nous ne pouvions le faire. Nous avons mis à contribution l’obligeance de M. E. Yung, de l’Université de Genève, qui, de concert avec M. Raoul Pictet, a préparé et exécuté une expérience des plus remarquables dont les résultats ont été consignés dans les comptes rendus de l’Académie des scien-

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

ces (1). Le virus du charbon bactérien a été soumis par ces expérimentateurs aux conditions suivantes :

« Du suc de pulpe musculaire provenant d’un cobaye qui vient de succomber au charbon symptomatique est recueilli dans des tubules qu’on place dans un tube plus grand. Celui-ci est scellé à la lampe et enfermé avec plusieurs autres contenant divers virus et ferments, des œufs d’invertébrés et des graines, dans une cassette enveloppée de corps mauvais conducteurs. On soumet le tout d’abord à un abaissement progressif de température de 0° à environ — 70° par l’action de l'acide sulfureux Jiquide continué pendant vingt heures. L’acide sulfureux a été ensuite remplacé par l’acide carbonique solide (sans diminution de pression) dont la provision a été régulièrement entretenue jour et nuit durant quatre-vingt-huit heures, le thermomètre oscillant entre — 70° et — 76°. Enfin on a fait agir le vide durant vingt heures, sur la neige carbonique abaissant ainsi la température à environ — 120° ou 130°. De ce point, le réchauffement s’est opéré lentement pendant six heures au bout desquelles tout était revenu à la température ambiante. »

Le virus ainsi traité nous a été renvoyé immédiatement par M. E. Yung; le jour même de sa réception nous l’avons utilisé sur un jeune cobaye qui est mort à la quinzième heure après l’inoculation en montrant une belle tumeur au point inoculé. Le suc musculaire de sa tumeur, inoculé au lapin et au chien, n’a produit aucun effet, preuve que nous nous trouvions bien en face du virus charbonneux et non d’un produit septicémique.

Puisque, dans de pareilles conditions de froid, si remarquables par leur intensité et leur durée, la bactérie charbonneuse n’a été ni détruite ni atténuée, il est bien difficile de prévoir à quelles limites il faudrait atteindre pour l’anéantir. En tout cas un semblable résultat, rapproché de ceux obtenus sur d’autres virus figurés, comme les spores du B. anihrads , ouvre à la biologie générale un nouveau champ de recherches et de méditations.

(I) De l’action du froid sur les microbes, in Comptes rendus de V Académie des sciences , 24 mars 1884.

Action de la chaleur. — Bien différents sont les résultats, suivant que la chaleur agit sur du virus frais ou sur du virus desséché, et suivant que l’on fait agir sur le virus de l’eau ou de l’air chauds. Ce sont autant de conditions à examiner.

1° Action médiate de l’air chaud sur le virus frais. — Si l’on enferme du virus frais dans un tube qu’on scelle à la lampe et qu’on place dans une étuve, on constate, par une série d’inoculations, que jusqu’à 65° la chaleur ne paraît pas produire d’effets bien appréciables sur le coniage, tout au moins quand elle n’est continuée que pendant une durée de dix à trente minutes; la mort arrive invariablement de la douzième à la trentième heure chez les sujets inoculés avec du virus ainsi chauffé. A partir de 65°, et en chauffant pendant soixante-dix minutes, nous avons observé une proportion soutenue entre la durée de la chauffe et le moment de la mort des cobayes inoculés. L’expérience suivante met bien celte corrélation en évidence :

30 juin 1882. — A une série de cobayes, on inocule 5 gouttes d’un virus frais qui a été chauffé :

A 63° pendant 13 minutes ; le cobaye inoculé est mort 12 h. après.

Si l’on chauffe à 70° pendant deux heures vingt minutes, ou à 80° pendant deux heures, l’activité virulente est complètement anéantie, Finoculation ne produit rien. Il n’y a pas, dans ce cas, atténuation et transformation du virus en vaccin, car, à l’épreuve, les sujets ont toujours succombé.

Enfin, si l’on place le virus dans une étuve à 100°, il est anéanti au bout de vingt minutes.

140 LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

Dans un certain nombre d’expériences, où le virus a été chauffé à 70° pendant un temps variant de une heure à deux heures vingt minutes, nous avons obtenu des résultats très curieux et très dignes de fixer l’attention.

En effet, le virus qui a été chauffé une heure est à peine modifié; celui qui l’a été pendant une heure trente-cinq minutes tue encore, mais avec une cerlaine lenteur, la plupart des animaux auxquels on l’inocule; celui qui a été chauffé une heure quarante-cinq minutes ne tue qu’ exceptionnellement ; tandis que si l’opération est prolongée pendant deux heures, le virus sort si singulièrement modifié qu’il tue non seulement les cobayes sur lesquels ou l’inocule, mais encore des animaux qui résistent à l’insertion du virus naturels, tels que le rat blanc.

Préoccupés de savoir si, dans ce cas, nous avions encore affaire au virus du charbon symptomatique ou à un contage étranger et cle résistance différente, nous avons fait ingérer à un bouvillon la pulpe préparée avec les muscles des cobayes tués par le virus chauffé deux heures et cet animal a contracté, six jours après l’ingestion, un superbe charbon symptomatique.

Il a été déjà question de cet animal au chapitre de la transmission du charbon.

2° Actions immédiate et médiate de l’eau chaude sur le virus frais. — La simple projection d’eau bouillante sur le virus ne suffit pas à en détruire les funestes propriétés. Si l’on place, par exemple, 2 centimètres cubes de virus au fond d’un verre, qu’on verse dessus trois fois la même quantité d’eau bouillante, soit 6 centimètres cubes, et qu’on abandonne le tout pour l’inoculer après refroidissement, l’inoculation donne des résultats positifs. Mais si l’on plonge le virus contenu dans un tube fermé, comme il a été dit tout à l’heure, dans l’eau bouillante, un séjour de deux minutes suffit pour

le rendre inactif, et jusqu a présent il ne nous a pas paru qu’il fût devenu vaccinal.

On voit que l’action médiate de l’eau chaude est bien supérieure à celle de 1 air chaud.

3° Action immédiate de l’air chaud sur le virus desséché. — Si du liquide de pulpe charbonneuse est répandu en couches très faibles sur un corps non poreux, et que l’évaporation et la dessiccation se fassent à une tempéLature de 35°, rapidement, de façon que la putréfaction n’ait pas le temps d’intervenir, il se forme un résidu brunâtre où le microbe spécifique conserve toute son activité. Il suffit d’en délayer un peu dans quelques centimètres cubes d’eau pour obtenir un liquide dont les effets ne diffèrent point de ceux produits par le virus frais. Dans ces conditions, la conservation intégrale de ses propriétés dure au moins deux ans.

On peut soumettre ce résidu à des lavages successifs jusqu’à ce qu’il ait abandonné la matière colorante qu’il renferme ; on obtient, après dessiccation, une poussière impalpable , blanchâtre > qui est aussi active que les liquides fraîchement extraits des tumeurs.

Quand on expose dans une étuve ce virus ainsi desséché, soit après l’avoir légèrement hydraté, soit après l’avoir mélangé à de l’eau, l’expérimentation montre qu’il faut maintenir l’étuve à 85° pendant six heures pour obtenir une diminution d’activité sensible. Mais elle n’est pas très prononcée, car si l’on rencontre des sujets doués d’une grande susceptibilité, bouvillons et moutons, si l’on inocule des doses massives ou si l’on s’adresse à de très jeunes cobayes, on amène la mort.

En chauffant, pendant le même laps de temps, à 90°, 95°, Î00° et 105°, on obtient des virus de plus en plus affaiblis, comme nous le dirons en traitant de l’atténuation, mais non totalement anéantis. L’expérience suivante en est la preuve t

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

18 janvier 1882. — On délaye un peu de pulpe desséchée et chauffée à 100° pendant six heures dans quantité suffisante d’eau; puis, avec le liquide ainsi préparé, on inocule un petit cobaye âgé de quarante-huit heures et un cobaye adulte ; le premier reçoit 1/2 centimètre cube, le second 1 centimètre cube. L'adulte a résisté, le jeune est mort le surlendemain, en présentant à la cuisse une tumeur des plus caractéristiques.

Lorsque le chauffage est poussé à 110° et continué pendant six heures, on tue le contage; car, dans ce cas, nous n’avons jamais vu l’inoculation être suivie d’aucun effet sensible, même sur de très jeunes sujets.

Ces recherches montrent que le virus bactérien desséché est doué d’une grande résistance à l’action modificatrice de la chaleur.

4° Action médiate de l’eau chaude sur le virus desséché. — Placé dans un tube comme le virus frais et plongé dans l’eau bouillante pendant une heure, le virus desséché conserve toute son activité. Nous nous sommes alors demandé si, en le triturant à l’avance dans une quantité suffisante d’eau de façon à en faire un liquide analogue à celui qui sert aux inoculations expérimentales, en le rapprochant davantage du virus frais, la chaleur n’aurait pas plus de prise sur lui. Il n’en fut rien. Il est nécessaire de laisser le virus sec au moins deux heures dans l’eau bouillante pour en annihiler les propriétés contagieuses.

Action de l’eau ou d’un milieu saturé d’humidité a la température ambiante. — Quand le virus frais arrive dans une grande quantité d’eau, il s’y dilue et s’atténue par cette dilution comme il sera dit ultérieurement. Si on le place dans une petite quantité d’une eau tranquille, les microbes ne tardent pas à tomber au fond et la partie supérieure est inoffensive, son inoculation ne donne rien. Peu à peu ces microbes s’atténuent dans leur virulence, mais d’une façon

extrêmement variable qui tient peut-être en partie à la composition chimique des eaux. Il nous est arrivé de ne rien obtenir par des inoculations faites après cent vingt heures de séjour dans l'eau; d’autres fois la virulence s’est prolongée trois mois et plus.

Action d’un milieu saturé de vapeur a la température de 110°. — Du virus frais enfermé dans de petits tubes ou étalé sur des fragments de tissus, du virus desséché, mais délayé dans l’eau et distribué de la même manière que le précédent, ont été exposés dans 1 étuve de MM . Geneste et Herscher pendant quinze minutes, en ayant toutefois la précaution de purger l’appareil au bout des sept premières minutes et de rétablir ensuite la pression.

Cette opération a détruit le virus frais et le virus desséché étalé sur les fragments d’étoffe ; le virus sec délayé et logé dans un tube lui a survécu. Mais ce dernier a été détruit à la suite d’une nouvelle opération qui a duré vingt minutes.

Action de la putréfaction et de quelques autres fermentations. — Quand le cadavre est enfoui et que la décomposition s’en est emparée, les agents de la putréfaction détruisent-ils ceux du charbon symptomatique? Nous nous sommes assurés qu’il n’en est rien, au moins pendant six mois, par l’expérience qui suit:

12 novembre 1880. — On enlève les muscles les plus noirs d’une tumeur siégeant à la cuisse d’une génisse qui vient de succomber au charbon, on les met dans un vase mal bouché qu’on abandonne sur le rebord d’une des. fenêtres du laboratoire. Le 18 mai 1881, plus de. six mois après, on examine ces muscles qui sont réduits en une sorte de putrilage répandant une odeur insupportable ; ils fourmillent de microorganismes de toutes sortes, parmi lesquels le vibrion serpentiforme caractéristique de la putréfaction. On achève de broyer ces muscles dans un peu d’eau ; on presse et l’on passe sur un tamis ;

14 * LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

5 gouttes du liquide filtré sont inoculées à un cobaye qui meurt à la cinquantième heure, en présentant une tumeur de la cuisse. Pour nous assurer que cette tumeur est bien de nature charbonneuse et que le cochon d’Inde n’a pas succombé à la septicémie, nous faisons une pulpe avec la tumeur qu’il nous offre et nous pratiquons une inoculation au lapin, ce réactif de la septicémie. Il n’en ressent rien.

II faut se garder de croire, toutefois, qu’avec les matières ■putréfiées d’un cadavre charbonneux on obtienne constamment et exclusivement le charbon. A côté de ce résultat, il arrive que les inoculations restent parfois complètement moffensives ; dans d’autres cas, on obtient simplement la septicémie et d’autres fois on obtient à la fois le charbon et la septicémie. Il est aussi impossible de prévoir à l’avance ce qu’il arrivera que de se rendre compte, par l’examen microscopique, de la nature de tous les microbes observés.

Trente mois après la mort, des inoculations faites avec un liquide extrait des muscles réduits en putrilage de la génisse dont il vient d être question ont été constamment négatives. Nous n’en conclurons pas, d’une façon catégorique, qu’après ce temps d’enfouissement les bactéries du charbon symptomatique son t entièrement détruites ; nous avons trop présentes à l’esprit les recherches de M. Pasteur sur la conservation des spores du B. anthracis dans les lieux infectés. Nous en déduirons tout au plus que si elles existent, ou bien un petit nombre seulement ont survécu, ou bien elles ont été atténuées dans leur virulence première et certaines manipulations seraient nécessaires pour la leur redonner.

Si le microbe du charbon symptomatique peut vivre à côté de celui de la putréfaction, la présence du Bacillus anthracis ne l’entrave point non plus. L’observation a appris depuis longtemps qu’on voit dans les mêmes localités régner côte à côte les diverses formes carbunculaires distinguées par Chaberf ; c’est le cas dans le Bassigny, l’Auvergne, la

Lombardie. L’expérimentation nous a montré qu’on pouvait faire évoluer le sang-de-rate et le charbon bactérien sur le même sujet ; en voici un exemple :

6 janvier 1881. — On pousse 1/2 centimètre cube de virus bactérien dans la cuisse d’un cobaye à l’aide d’une seringue Pravaz qui vient d’être employée par M. Chauveau pour inoculer le sang-de-rate et dans laquelle sont restés des bacilles. Les 8 et 9, le cobaye a la cuisse tuméfiée et boite fortement. On le trouve mort le 10 au matin. Sa cuisse est le siège d’une tumeur qui offre les caractères et les bactéries du charbon symptomatique, tandis que son sang fourmille de bâtonnets du sang-de-rate.

Il nous semble inutile de multiplier les exemples de concomitance des deux maladies sur le même sujet. M. Chauveau, qui s’est occupé aussi de ce point, est arrivé aux mêmes résultats que nous.

Nous avons voulu savoir si le ferment qui se trouve < dans la présure et lui communique la propriété coagulante qu’il exerce sur la caséine du lait est détruit par la bactérie charbonneuse ou réciproquement. Nos expériences sur ce point nous ont démontré que chacun de ces ferments conserve son activité propre, du moins après un mélange de quarante-huit heures. La propriété coagulante de la présure n’est point annihilée et le lait ainsi coagulé, réduit en une bouillie très liquide, communique le charbon par inoculation.

Il en est de même de la torulacée de la fermentation ammoniacale; elle ne détruit pas la bactérie charbonneuse et n’est pas détruite par elle à la suite d’un contact de même durée.

Ainsi, et sans préjuger ce qui arriverait si le mélange avec des microbes aérobies ou anaérobies était plus prolongé qu’il ne l’a été dans nos expériences, le virus bactérien produit ses effets parallèlement à ceux d’autres organismes qui,

Arl. Corn, et Th. — Charbon symptomatique . 10

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

comme lui, sont fondions de maladies redoutables ou de phénomènes spéciaux de fermentation.

Action de divers agents chimiques. — Nous nous sommes livrés à une étude longue, minutieuse de l’action d’un grand nombre de substances vis-à-vis du virus bactérien. Sa puissante résistance en face des agents atmosphériques, froid et chaleur, nous poussait à rechercher quelles sont les substances auxquelles doivent s’adresser l’hygiéniste et le thérapeutiste pour la détruire. C’est là une question de premier ordre. Nous sommes arrivés à des résultats pleins d’intérêt, comme on va le voir.

En nous plaçant aussi près que possible des conditions de la pratique, nous avons fait agir sur le ferment charbonneux un grand nombre de substances liquides ou en dissolution, recommandées dans les injections ou les lavages antiseptiques. Nous avons étudié également les gaz ou les substances liquides susceptibles de se vaporiser spontanément, préconisés pour la désinfection des habitations.

En agissant sur du virus frais et sur du virus desséché, nous avons bien vite constaté, comme nous l’avions déjà vu à propos de l’action de la chaleur, que la résistance du virus desséché est beaucoup plus considérable que celle du contage frais. Toute substance capable de détruire l’activité du premier anéantit celle du second et ici encore l’inverse n’est pas exact.

Les diverses matières employée sont été laissées quarantehuit heures en contact avec le virus. Les substances gazeuses ont été amenées dans un bocal fermé par un bouchon luté à la cire auquel était suspendu un verre de montre contenant le virus, le tout d’après un dispositif indiqué par notre collègue M. Péteaux. Il va de soi que, pour l’essai de l’activité, on s’est servi constamment de la même quantité de virus

(5 gouttes), qui a été inoculée par injection hypodermique.

Nous allons résumer dans les deux tableaux suivants l’action des substances essayées vis-à-vis du virus frais, et dans un troisième nous indiquerons les substances qui détruisent le virus desséché et celles qui, susceptibles de le détruire à l’état frais, sont impuissantes quand il est sec.

LE CHARBON SYMPTOMATIQUE

A. — Action de substances liquides ou en dissolution sur le virus FRAIS.

NE DÉTRUISENT PAS LA VIRULENCE

DÉTRUISENT LA VIRULENCE. j

Alcool à 90°.

Acide phéniqué (solution aqueuse

Alcool camphré (saturé).

Alcool phéniqué (à saturation et

Acide salicylique (1 / 1 000).

— borique (1 /5).

Glycérine.

— azotique (1/20).

Ammoniaque.

— sulfurique (dilué).

Acétate d’ammoniaque.

— chlorhydrique (1 /2).

Sulfate —

— oxalique (à saturation). j

Sulfhydrate —

Alcool salicyliqué (à saturation).

Carbonate —

Soude. j

Benzine.

Eau iodée.

Potasse (1/5).

Salicylate de soude (1/5). j

Chlorure de sodium (dissolution

Permanganate dépotasse (1/20,.

: saturée).

Sulfate de cuivre (1/5).

| Chaux vive et eau de chaux.

. Nitrate d’argent (1/1000). j

Polysulfure de calcium (1 / 5).

Sublimé corrosif (1/5000). !

jj Sulfate de fer (1/5).

Camphre bichloré Cazeneuve (so-

Sulfate de quinine (1/10).

lution alcoolique saturée).

Borate de soude (1/5).

Chloral (3/100). j

Hyposulfite de soude (1/2).

Acétate d’alumine (1/200). j

Acide tannique (1/5).

Acide picrique (solution saturée).

Acide lactique.

Naphthaline (solution alcoolique

Iodoforme (dissolution alcoolique

saturée).

Acide benzoïque (2/100).

Iodoforme en poudre.

Essence d’eucalyptus (1/800).

Silicate de potasse (1/200).

Essence de thym (1/800). !

Eau oxygénée.

Acide formique.

Eau arsénicale (saturée et chaude).

Essence de girofle.

Chlorure de zinc.

Phénate de soude.

| Chlorure de manganèse.

Huile phosphorée.

Essence de térébenthine.

Solution de sucre (à la tempéra-

Camphre monochloré Cazeneuve (solution alcoolique saturée).

Jus d’ail.

Jus de citron.

I Nicotine.

ture de 35°).

B. — Action de gaz ou de substances employées à. l’état de vapeurs sur le virus FRAIS.

NE DÉTRUISENT PAS LA VIRULENCE

DÉTRUISENT LA VIRULENCE. j

Ammoniaque.

Acide sulfureux.

Chloroforme.

Hydrogène sulfuré.

Ozone.

Brome.

Chlore.

Sulfure de carbone.

Vapeurs d’essence de thym.

— — d’eucalyptus.

C. — Action de substances liquides ou gazeuses sur le virus DESSÉCHÉ.

NE DÉTRUISENT PAS LA VIRULENCE

DÉTRUISENT LA VIRULENCE